ウイルスゲノムのコピー数を正確に測定するためのデジタルドロップレットPCR用のウイルスサンプルとマスターミックスの調製

ボルテックスを開始するには、アデノ随伴ウイルスまたはAAVサンプルを遠心分離して、すべての液体がチューブの底に残っていることを確認します。45マイクロリットルのDNase I含有溶液を0.2ミリリットルのPCR 8チューブストリップチューブに加えます。5マイクロリットルのAAVサンプルをDNase溶液の入ったチューブに移します。

ボルテックス後、サンプルを短時間遠心分離して、すべての液体が底に残っていることを確認します。サーモサイクラーを使用して、サンプルを摂氏37度で1時間インキュベートし、その後摂氏4度まで冷却します。次に、DNaseの処理済みサンプルをAAV希釈バッファーで適切に希釈し、新しい0.2 mL PCR 8チューブストリップに調製します。

連続希釈後、サンプルをボルテックスして遠心分離し、すべての液体が底に残るようにします。フォワードプライマーとリバースプライマー、プローブddPCR Supermix、DNase's-Free Waterを必要な量で組み合わせます。マスターミックスをボルテックスし、チューブを短時間遠心分離します。

次に、19.8マイクロリットルのマスターミックスを、新しい0.2ミリリットルのPCR 8チューブストリップの各チューブに移します。