まず、100ミリグラムの新鮮なティッシュまたは20ミリグラムの風乾ティッシュを取り、2ミリリットルの遠心分離チューブに入れます。5mmのステンレス製ビーズを2個遠心チューブに入れ、60ヘルツで60秒間作動するハイスループットティッシュグラインダーに移します。DNA抽出には、800マイクロリットルの予冷済み核分離バッファーをサンプルに加え、ボルテックスミキサーに5分間置きます。
次に、サンプルを遠心分離機に入れ、13、780gで10分間回転させます。遠心分離後、上清を慎重に取り除きます。次に、600マイクロリットルのバッファーP1を加え、続いて5マイクロリットルのRNase Aをサンプルに加えます。
ボルテックス後、サンプルを摂氏65度の水浴で1.5時間インキュベートし、インキュベーション中にチューブを2〜3回反転させます。次に、200マイクロリットルのバッファーP2を追加します。よく混ぜます。そして、サンプルを氷の上に15分間置きます。
その後、13、780gで10分間遠心分離します。上清をフィルターカラムAFに慎重に吸引し、13、780gで2分間遠心分離します。下部濾液を新しい1.5ミリリットルの遠心分離管に移します。
濾液の体積を計算した後、サンプルにバッファーP3の1.5倍の容量を加え、すぐに振とうしてサンプルを混合します。調製した混合物650マイクロリットルを吸収カラムに加え、5分間インキュベートします。その後、13、780gで30〜60秒間遠心分離します。
得られた濾液を再び吸収カラムに加えます。廃液を遠心分離して廃棄します。カラムを600マイクロリットルのリンス液WBで2回洗浄します。遠心分離後、廃液を捨て、吸収カラムを空の収集チューブに入れます。
サンプルを13,780gで2分間遠心分離した後、室温で放置して残留エタノールを蒸発させます。吸収カラムを清潔な1.5ミリリットルの遠心分離管に移し、65°Cに予熱した滅菌脱イオン水45マイクロリットルを吸着膜の中心に加えます。5分後、チューブを13,780gで室温で2分間遠心分離します。
次に、分光光度計を使用します。ろ過した溶液中のDNA濃度を測定します。OD260とOD280の吸光度比は1.8から1.84の範囲であり、DNA量は1マイクロリットルあたり100ナノグラムを超えており、抽出されたDNAの品質が良好であることが確認されました。
