マウス網膜神経節細胞の免疫染色のためのホールマウント網膜の単離とプロセシング(英語)

核摘出術と眼球処理のために頸部脱臼を使用してマウスを安楽死させた後、解剖中の向きを確認するために、眼球の背側の角膜の端に青いマーカーで印を付けます。ハサミを使って、眼球に付着した残存筋組織を切除します。次に、除核した眼球をPBSで満たされた2ミリリットルの丸底マイクロ遠心チューブに移します。

次に、眼球を新たに調製した4%パラホルムアルデヒドを含む別の2ミリリットルのチューブに入れ、摂氏4度で10分間固定します。解剖顕微鏡下で、細かい鉗子を使用して角膜に小さな切開を行います。眼球を固定液に戻し、4°Cで3時間インキュベートして組織の形態を保存します。

角膜と水晶体を取り除くには、細かい手術用ハサミを使用して、角膜と強膜の境界である角膜辺縁部の周りに約1ミリメートルの小さな切開を行います。角膜の周囲を慎重に切り取り、角膜を完全に切除して下にある構造を露出させます。次に、細い鉗子を使用して、網膜の損傷を避けるために、レンズをそっとつかみ、周囲の組織から慎重に持ち上げます。

強膜切開の場合は、細い眼科用ハサミで強膜に正確なスリットを切って、その後の解剖を容易にします。次に、網膜分離のために、強膜と網膜の間の切開部に歯付き鉗子を挿入します。強膜の端をそっとつかみ、過度の力を入れないようにして組織の裂け目を防ぎます。

強膜と網膜の境界に沿って鉗子を動かして、切開部を徐々に拡大します。鉗子の歯の部分を使用して、強膜を網膜から損傷することなく慎重に分離します。次に、鋭利なハサミを使用して、網膜をほぼ同じサイズの4つのフラップに分割します。

解剖した網膜を柔らかい毛ブラシでそっと広げ、表面から破片を細心の注意を払って取り除きます。