AIベースのプログラムを使用したマウス網膜神経節細胞の免疫染色と自動カウント

マウント網膜全体をマウスから分離した後、網膜をPBSで5分間穏やかに攪拌しながら洗浄します。洗浄した網膜をブロッキングバッファーに30分間浸します。インキュベーション後、ブロッキングバッファーを一次抗体BRN3Aと交換します。

網膜を摂氏4度で一晩インキュベートし、特異的抗原抗体が結合できるようにします。翌日、網膜をPBSで3回、各5分間洗浄した後、Alexa 594またはAlexa 488標識抗ウサギ二次抗体と2時間インキュベートして、標的抗原を可視化します。免疫染色した網膜をPBSで洗浄した後、ガラス製の顕微鏡スライドに優しく移します。

網膜を平らにして、折り畳みや歪みを最小限に抑えます。取り付けられた網膜にカバースリップをかぶせて、気泡が形成されないようにします。GitHub のリンクからコードをダウンロードします。

次に、クラウドディスクから必要なファイルをダウンロードして解凍します。Configを見つけます。ini ファイルを作成し、yolov5_cpu パスを指すようにその内容を変更します。

次に、[ユーザーインターフェイス]をクリックします。EXEを実行してグラフィカルインターフェイスを開きます。pmse_plusかどうかを確認します。

ptモデルファイルはドライブCのルートディレクトリにあります。そうでない場合は、yolov5フォルダのweightsフォルダからコピーします。セルカウントソフトウェアを開きます。[画像を開く]をクリックして画像をインポートし、[実行]をクリックしてソフトウェアがセルを自動的にカウントできるようにします。

自動細胞計数ソフトウェアは、N-メチル-D-アスパラギン酸誘発緑内障マウスモデルで15, 231の網膜神経節細胞を正確に識別し、正常な網膜の約45, 000〜50, 000のRGCと比較して有意な細胞損失を示しました。