著者らは、機器の胚の開発と利用をスピードアップについてのアドバイスのためにマイクロインジェクショントレーニング、クラリッサ·ヘンリー博士のキャロル·キムの研究室に感謝したい、とFLI1貢献するためのネイサンローソンう：EGFP魚。私たちは、原稿の重要な読書のためにウィーラーラボとショーン壁のメンバーに感謝します。また、このプロジェクトの技術的助言のために魚のケアとアドバイスをマークNilan、とライアンPhennicieとクリスティンガボールに感謝します。この作品は、K.ブラザーズ、MAFESハッチ助成E08913-08、およびR.ウィーラーにNIH NCRR賞P20RR016463にMAFES研究アシスタントシップによって資金を供給された。

利害の衝突が宣言されません。

ここで紹介するゼブラフィッシュマイクロインジェクション法は、Gutzman らとは異なります。ここではその34我々は36から48 HPF幼虫の後脳室に耳胞を介して注入を示しています。我々は記述方法が減少し組織の損傷と後脳の脳室に10月15日酵母の一貫性の注入を可能にします。このプロトコルは、24 HPI（ 図1）と有意な死亡率/罹病率5の結果から、体全?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント（オプション） </td></tr><tr><td>産卵水槽</td><td>水生生息地</td><td> 2L </td><td></td></tr><tr><td> 1.7 mLチューブ</td><td> Axygen </td><td> MCT-175-C </td><td></td></tr><tr><td>インスタントオーシャン</td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> S17957C </td><td></td></tr><tr><td>余分深いペトリ皿</td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> 08から757-11Z </td><td></td></tr><tr><td>標準のペトリ皿</td><td> VWRサイエンティフィック</td><td> 25384-302 </td><td></td></tr><tr><td>転送ピペット</td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> 13から711-7M </td><td></td></tr><tr><td>酵母エキス</td><td> VWR ScientiFIC </td><td> 90000-726 </td><td></td></tr><tr><td>ペプトン</td><td> VWRサイエンティフィック</td><td> 90000-264 </td><td></td></tr><tr><td>デキストロース</td><td>フィッシャー·サイエンティフィック</td><td> D16-1 </td><td></td></tr><tr><td>寒天</td><td> VWRサイエンティフィック</td><td> 90000-760 </td><td></td></tr><tr><td>使い捨て血球</td><td> VWRサイエンティフィック</td><td> 82030-468 </td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水</td><td> VWRサイエンティフィック</td><td> 12001-986 </td><td></td></tr><tr><td>デュモンDumoxelピンセット</td><td> VWRサイエンティフィック</td><td> 100501-806 </td><td></td></tr><tr><td>木製のダボ</td><td> VWRサイエンティフィック</td><td> 10805-018 </td><td></td></tr><tr><td>キムワイプ</td><td> VWRサイエンティフィック</td><td> 300053-964 </td><td></td></tr><tr><td>メルト低いアガロース</td><td> VWRサイエンティフィック</td><td> 12001-722 </td><td></td></tr><tr><td>注射料理のアガロース</td><td> VWRサイエンティフィック</td><td> 12002-102 </td><td></td></tr><tr><td>ブラウンマイクロピペットプラー燃える</td><td>サッター·インスツルメンツ</td><td> P-97 </td><td></td></tr><tr><td>中空ガラス棒</td><td>サッター·インスツルメンツ</td><td> BF120-69から10 </td><td>ブンゼンバーナー上に加熱することにより、滑らかなガラスのガラス棒のために</td></tr><tr><td>ピペットの収納ボックス</td><td>サッター·インスツルメンツ</td><td> BX10 </td><td></td></tr><tr><td> MPPI-3噴射システム</td><td>適用された科学計測</td><td> MPPI-3 </td><td></td></tr><tr><td>背圧ユニット</td><td>適用された科学計測</td><td> BPU </td><td></td></tr><tr><td>マイクロピペットホルダーキット</td><td>アプリエド·サイエンティフィック·インスツルメンテーション</td><td> MPIP </td><td></td></tr><tr><td>フットスイッチ</td><td>適用された科学計測</td><td> FSW </td><td></td></tr><tr><td>マニピュレーター</td><td>適用された科学計測</td><td> MM33 </td><td></td></tr><tr><td>マグネットベース</td><td>適用された科学計測</td><td>マグネットベース</td><td></td></tr><tr><td> Tricaineメタンスルホン酸塩</td><td>西洋ケミカル株式会社</td><td> MS-222 </td><td></td></tr><tr><td>解剖の範囲</td><td>オリンポス</td><td> SZ61トップSZX-ILLB2-100ベース</td><td></td></tr><tr><td>共焦点顕微鏡</td><td>オリンポス</td><td> FV-1000レーザー走査共焦点顕微鏡システムとIX-81 </td><td></td></tr><tr><td> 14インチ試験管ホイールとTC-7組織培養ローラードラム</td><td>ニューブランズウィックサイエンティフィック</td><td> TC-7 </td><td></td></tr><tr><td>イメージング料理</td><td>マテック株式会社</td><td> P24G-1.0-10-F </td><td></td></tr><tr><td>針をロードするためのピペットチップ</td><td>エッペンドルフ</td><td> 930001007 </td><td></td></tr><tr><td>プレート注ぐグリッド</td><td>適応科学ツール</td><td> TU-1 </td><td></td></tr><tr><td>加熱ステージ</td><td> Bioptechs株式会社</td><td>デルタT-5 </td><td></td></tr><tr><td>平らなヘラ</td><td> VWRサイエンティフィック</td><td> 82027-486 </td><td></td></tr><tr><td>プラスチック製のふるい</td><td>ナッツオンラインの用品</td><td> 12センチメートル</td><td></td></tr><tr><td>パラフィルム</td><td> VWRサイエンティフィック</td><td> 52858-000 </td><td></td></tr><tr><td>渦魔神</td><td> VWRサイエンティフィック</td><td> 14216-184 </td><td></td></tr><tr><td> 16×150 mmの培養管</td><td> VWRサイエンティフィック</td><td> 60825-435 </td><td></td></tr><tr><td>光度計</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td> ND 2000 </td><td></td></tr><tr><td>フェノールレッド</td><td> VWRサイエンティフィック</td><td> 97062-478 </td><td></td></tr><tr><td>塩酸</td><td> VWRサイエンティフィック</td><td> 87003-216 </td><td></td></tr><tr><td> NaClを</td><td> VWRサイエンティフィック</td><td> BDH4534-500GP </td><td></td></tr><tr><td>塩化カリウム</td><td> VWRサイエンティフィック</td><td> BDH4532-500GP </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4で </td><td> VWRサイエンティフィック</td><td> BDH0246-500GP </td><td></td></tr><tr><td>のCa（NO 3）2 </td><td> VWRサイエンティフィック</td><td> BDH0226-500GP </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> VWRサイエンティフィック</td><td> BDH4520-500GP </td><td></td></tR&gt; <tr><td> Morpholinos </td><td> GeneTools、LLC </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

non-invasive imaging of disseminated candidiasis in zebrafish larvae

病原体カンジダ·アルビカンスに起因する播種性カンジダ症は、入院して個人の臨床的に重要な問題であり、30から40パーセント起因する死亡率は6に関連付けられています。全身性カンジダ症は、通常、先天性免疫によって制御され、食細胞NADPHオキシダーゼなどの自然免疫細胞成分の遺伝的欠陥を持つ個人は、カンジダ7月9日に影響を受けやすくなります。非常に小さなCのダイナミクスについてはほとんど知られていないin vivoでの自然免疫細胞とカンジダの相互作用。in vitro試験で広範には、ホストCの外側にあること確立していますカンジダは、マクロファージの内部で発芽し、かつ迅速に好中球10月14日によって破壊されています。in vitro試験において 、有用なものの、サイトカイン、細胞外マトリックスの添付ファイル、および細胞間の接点10の時間依存ダイナミクスを含む生体内環境で複雑 ​​なを再現することはできません15から18 </sup&gt;。宿主 - 病原体相互作用におけるこれらの要因の寄与を調べるためには、ライブをそのままホストに非侵襲的に感染のこれらの側面を視覚化するためのモデル生物を見つけることが重要です。 ゼブラフィッシュの幼虫は、感染症の研究のためのユニークで多彩な脊椎動物宿主を提供しています。開発ゼブラフィッシュ幼生の最初の30日間だけ先天性免疫防御2、19-21のような先天性免疫に大きく依存している播種性カンジダ症などの疾患の研究を簡素化しています。ゼブラフィッシュ幼生の小型化と透明性の両方の宿主と病原体の細胞レベルでの感染動態のイメージングを可能にします。生得的な免疫細胞を蛍光トランスジェニック幼虫は感染22から24に関与する特定の細胞型を識別するために使用することができます。変更されたアンチセンスオリゴヌクレオチド（Morpholinos）は、そのような食細胞NADPHオキシダーゼなどの様々な免疫成分をノックダウンするとfungaへの応答の変化を勉強するために使用することができますlの感染5。小さな下の脊椎動物を使用しての倫理的、実用的な利点に加えて、ゼブラフィッシュの幼虫は、イメージの両方intravitallyと色の病原体とホストの間で激戦を特有の可能性を提供しています。 ゼブラフィッシュは、ヒトの病原性細菌の数のモデル感染症に使用されており、マイコバクテリア感染3、25の私たちの理解に大きな進歩に尽力してきました。しかし、ごく最近そのような幼虫5に感染するために使用されて菌類、23、26とはるかに大きいの病原体を持っており、感染の方法論の詳細な視覚的な説明がされていない最新の状態に。ここでは、以前のプロトコルへの私たちの修正を含むプリム25ゼブラフィッシュ後脳の脳室のマイクロインジェクションは、当社の技術を紹介します。真菌感染症のために幼虫のゼブラフィッシュモデルを使用して、我々の所見は、in vitro試験から分岐し、宿主-病原体interaを検討する必要性を強化ホストではなく、ペトリ皿5の簡素化、システムの複雑な環境でction。

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Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae

ゼブラフィッシュの急速な発展、小型サイズと透明性感染症の自然免疫制御の研究のための途方もない利点があります<sup&gt; 1月4日</sup&gt;。ここでは、真菌性病原体を用いたゼブラフィッシュの幼虫を感染させるためのテクニックを実証する<em&gt;カンジダ·アルビカンス</em&gt;マイクロインジェクションすることによって、方法論は、最近、真菌の二形の制御に食細胞NADPHオキシダーゼ活性を巻き込むために使用さ<sup&gt; 5</sup&gt;。

ゼブラフィッシュ幼生における播種性カンジダ症の非侵襲的イメージング

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

14.6K ビュー.  University of Maine. ゼブラフィッシュの急速な発展、小型サイズと透明性感染症の自然免疫制御の研究のための途方もない利点があります 1月4日。ここでは、真菌性病原体を用いたゼブラフィッシュの幼虫を感染させるためのテクニックを実証するカンジダ·アルビカンスマイクロインジェクションすることによって、方法論は、最近、真菌の二形の?...