この作品は、アメリカ心臓協会グレーター東南アジアアフィリエイト（09GRNT2060421）、米国医師会からとフロリダ臨床およびトランスレーショナル科学研究所の大学からの補助金によって支えられている。アダムメッカは、NIH / NINDS、NRSA博士号を取得する前の仲間（F30 NS-060335）です。ロバートRegenhardtは高血圧でフロリダ大学学際的なトレーニング·プログラム（T32 HL-083810）から博士号を取得する前のフェローシップの支援を受けた。

このプロトコルは、インスティテューショナルアニマルケアによって承認され、使用フロリダ大学の委員会（動物実験委員会）及び &quot;実験動物の管理と使用に関する指針&quot;（第8版、全米科学アカデミー、2011）に準拠していました。 材料<ol><li>動物：8週齢、雄、手術時に250〜300グラムの重量を量るのSprague Dawleyラット（Charles River農場、ウィルミントン、MA、USA）。 </li><li>麻酔<ol class="lalpha"><li>吸入麻酔システム（VetEquip社、プレザントン、カリフォルニア州、米国） </li><li>イソフルラン麻酔（バクスター薬学、ディアフィールド、イリノイ州、アメリカ） </li></ol></li><li>定位システム（デヴィッド·インスツルメンツKopfは、タハンガ、CA、USA）を<ol class="lalpha"><li>小動物の定位システム</li><li>ラットの非破裂耳バー</li><li>ラット用ガス麻酔ヘッドホルダー</li></ol></li><li>温度調節<ol class="lalpha"><li> BAT-12マイクロプローブ温度計（世界プレシジョンインスツルメンツ社、サラソタ、フロリダ州、米国） </li><li> T /ポンプ、TP600サーマルブランケット（Gaymarインダストリーズ社、Orchard Park、ニューヨーク、アメリカ） </li></ol></li><li>手術器具<ol class="lalpha"><li>スカルペルハンドルと＃11ブレード、虹彩ピンセット、鉗子グレーフェ、スクリュードライバーブルドッグクランプリトラクター、26ゲージ針ベベル（ワールド·精密機器株式会社、サラソタ、フロリダ州、米国）と10μLシリンジ</li><li>マイクロモータ、ドリルと定位ホルダー、典型的なマニピュレーターインジェクター（Stoelting、ウッドデール、イリノイ、米国） </li><li> 1.0ミリメートルラウンドドリルいが、1.0ミリメートル倒立円錐ドリルいが（Roboz手術器具株式会社、ゲーサーズバーグ、メリーランド州、米国） </li></ol></li><li>外科用品<ol class="lalpha"><li> 2.4 mmのシャフトの長さと取り付けネジ0から80×3/32、21ゲージのガイドカニューレ[長い台座下4ミリメートル]とカニューレダミー（プラスチック1、ロアノークVA、USA） </li><li>ジェット義歯アクリルと液体（ラング歯科製造株式会社、ホイーリング、イリノイ州、アメリカ） </li><li> 3.0ナイロン縫合糸（オアシス、メタワ、イリノイ、米国） </li><li>綿棒、Puralube眼軟膏（フィッシャー·サイエンティフィック、ピッツバーグ、PA、USA） </li><li>電気バリカン（オスター、プロビデンス、ロードアイランド州、米国） </li></ol></li><li>化学品<ol class="lalpha"><li>エンドセリン-1（アメリカンペプチド、サニーベール、カリフォルニア州、米国） </li><li>クロルヘキシジン2％（Agrilabs、セントジョセフ、ミズーリ州、米国） </li><li>ブプレノルフィン塩酸（ホスピーラ社、レイクフォレスト、イリノイ州、アメリカ） </li></ol></li><li>可視化装置<ol class="lalpha"><li>手術用顕微鏡（ザイラー音源と製造、セントルイス、ミズーリ州、米国） </li><li>光ファイバ照明装置（TechniQuip社、リヴァーモア、カリフォルニア州、米国） </li></ol></li><li>レーザードップラー血流計システム（ADInstruments社、コロラドスプリングズ、コロラド州、米国） <ol class="lalpha"><li>セントandardペンシルプローブ</li><li>プローブホルダ</li><li>血流計</li><li> LabChart 7とPowerLabの4月30日</li></ol></li><li>梗塞体積の測定<ol class="lalpha"><li>ラット脳マトリックス（Zivic·ミラーラボ社、アリソンPark、ペンシルバニア、米国） </li><li> 2,3,5 - トリフェニルテトラゾリウムクロライド（シグマアルドリッチ社、セントルイス、ミズーリ州、米国）は、PBSに0.05％に希釈</li><li>フラットベッドスキャナ（エプソンパーフェクV30、エプソン·アメリカ社は、ロングビーチ、CA、USA）を</li><li>画像Jソフトウェア（ImageJの1.42qソフトウェア、米国国立衛生研究所、ベセスダ、MA、USA） </li></ol></li></ol> 1。手術前のステップ<ol><li>手術に先立ち、ラットを水とげっ歯類への無料アクセスを12：12明/暗サイクルで飼育されています。 </li><li>麻酔は後部足のピンチに引き出しもはやラットまで誘導室では100％O 2ガスの混合物の4％イソフルランで誘導される。 </li><li> A浄化槽技術は滅菌手袋、滅菌手術器具、滅菌外科用ドレープ11の使用を含めて、この手順の間に維持されるべきである。 </li><li>頭頂部は電動バリカンで剃毛されています。 </li><li>ラットは、温度制御された操作面（​​サーマルブランケット）の上に横たわって吸収パッド上で発生しやすい位置に配置されます。 </li><li>ヘッドはガス麻酔フェイスマスクの配置で始まる定位装置に配置されます。 </li><li>次に、耳の棒を挿入して締められている。 </li><li>プロシージャ麻酔中に100％O 2ガス混合物中のイソフルラン2％で維持されます。 </li><li>潤滑剤の眼軟膏は、両眼に適用され、まぶたが外科手術中に目の乾燥を防ぐために閉鎖されています。 </li><li>プローブは、37の定数動物のコア温度を維持するために挿入され直腸温度±0.5℃ </li><li>定位にしっかりと保持ヘッド付きデバイスは、外科領域には2％クロルヘキシジンと生理食塩水3回を交互に清めです。 </li></ol> 2。手術の手順<ol><li>メスを使用して、正中切開は耳（上項線）の間に、目の最も尾側の側面（[後]）から頭蓋を覆う皮膚の上に作られています。 </li><li>皮膚を3ブルドッグクランプで横方向に後退させられる。 </li><li>結合組織は、複数の構造がはっきりと見ることができるように、乾いた綿棒を使って頭蓋骨から削除されます。これらはブレグマ、冠状縫合、右横頭蓋骨の尾根があります。綿棒は、術野から血液を除去するために使用されています。 </li><li>手術用顕微鏡を使用して、ブレグマが配置されており、1.0ミリメートルラウンドドリルいががブレグマでゼロにされるまで定位マニピュレータが調整されます。 </li><li>ドリルいが、その後1.6ミリメートル前部とブレグマ横5.2ミリメートルに移動されます。 </li><li>頭蓋骨を貫通いが穴が穿設されているためキャンULA配置します（ 図1）。過剰破片や血液が絶えず綿棒を使用してクリアされます。 </li></ol>この時点で、ガイドカニューレを挿入することができます（ステップ7）またはいが孔を介して直接、ET-1の注射は（ステップ16に直接進んでください）​​を行うことができる。 <ol start="7"><li> 3取り付けネジの隣の、いが穴が1.0ミリメートル倒立円錐ドリルいが（ 図1）を用いて 、頭蓋骨の部分的な厚さを貫通穿設されている。一つ穴が冠状縫合、矢状縫合に横1〜2ミリメートルの前方1〜2ミリメートル程度それぞれ前頭骨に掘削されています。一つ穴が冠状縫合の後方2〜3ミリメートルとガイドカニューレいが穴と同側の矢状縫合に横2〜3ミリメートル程度頭頂骨に掘削されています。三0から80×3/32取り付けねじはこれらいが穴に配置され、カニューレ内に保持セメントのサポートを提供します。ネジのみよう硬膜を損傷しないように2つまたは3つのターンを進めなければならない。 </lI&gt; <li>ガイドカニューレが配置されている定位カニューレホルダーとブレグマに配置されます。 </li><li>ガイドカニューレをブレグマでゼロにされるまで定位マニピュレータが調整されます。カニューレは、1.6ミリメートル前部とブレグマ横5.2ミリメートルの場所に位置しいが穴に移動されます。 </li><li>最後に、ガイドカニューレをブレグマ腹4.5ミリメートルの最終先端位置とのいが穴に下げられる。 </li><li>レーザードップラーフロープローブ配置（オプション） <ol class="lalpha"><li> LDFを用いた脳血流を監視するために、プローブホルダは、歯科用セメント、ガイドカニューレを固定する前に所定の位置に配置することができます。 </li><li>プローブホルダベースは小さな楔形のタブを除いて台座と同一平面にトリミングされています。 </li><li>プローブホルダは、その後、ガイドカニューレの後方と内側指向タブ（ 図1）を使用して横方向の頭蓋骨の尾根にちょうど内側に配置されます。 </li><li>プローブホルダとg用ガイドカニューレは歯科用セメントを用いて一緒に貼付されています。 </li></ol></li><li>歯科用セメントは、その後、所定の位置にカニューレを固定するために使用されています。セメントはすべての3つのネジで接触しており、カニューレの全塩基を取り囲んでいる。 </li><li>セメントは前カニューレホルダーの除去に完全に乾燥させてください。これは、約5分かかります。 </li></ol>これらのステップの後、外科的切開を閉じることができ、カニューレダミーは、ガイドカニューレにねじ込むこともできます。代わりに、ET-1誘発MCAOは、カニューレ移植手術からの回復期間の後ラットで行うことができます。この方法の場合は、ステップ19は次に実行されるべきであり、ステップ14から18は、後で実行することができます。ガイドカニューレの注入を実行し、同じ手術中のET-1を注入するには、ステップ14を次の実行する必要があります。 <ol start="14"><li>点滴注射は、ET-1（PBS中80μMのに希釈）でロードした後定位インジェクターに装着されています。 </li><li>ザ針の先端がガイドカニューレの縁にゼロにされるまで定位マニピュレータが調整されます。 </li><li>針の先端がガイドカニューレのリムに腹17.2ミリメートルの位置にガイドカニューレを介して下降する。ガイドカニューレを使用しない場合は、針の先端はブレグマでゼロ調整とブレグマ腹位置8.7ミリメートルにいが孔を通して下降させる。 </li><li> 80μMのET13μlの分あたり1μlの速度で注入されています。 </li><li>注入が完了し、その後徐々に除去された後に注射器を3分間そのままにしています。 </li><li>切開は3.0ナイロン縫合糸で閉じており、カニューレダミーカニューレにねじ込まれている。 </li><li>適切な鎮痛剤の用量（0.05 mg / kgですなわちブプレノルフィン）は回復期間中に痛みや不快感を最小限に抑えるために手術後に使用する必要があります。 </li><li>ラットは手術室から取り除かれ、柔らかい食物および水を自由に、簡単にアクセスして、低体温症を防ぐために暖かく、乾燥したリカバリ領域に配置されます。 </LI&gt; </ol>

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	<li>Stroke--1989. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendations+on+stroke+prevention,+diagnosis,+and+therapy.+Report+of+the+WHO+Task+Force+on+Stroke+and+other+Cerebrovascular+Disorders.">Recommendations on stroke prevention, diagnosis, and therapy. Report of the WHO Task Force on Stroke and other Cerebrovascular Disorders.</a> Stroke. 20, 1407-1431 (1989).</li><li>Lloyd-Jones, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics--2009+update:+a+report+from+the+American+Heart+Association+Statistics+Committee+and+Stroke+Statistics+Subcommittee.">Heart disease and stroke statistics--2009 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee.</a> Circulation. 119, 480-486 (2009).</li><li>Mohr, J. 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Physiol. 96 (1-7), 1084-1096 (2011).</li><li>Fisher, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+of+the+stroke+therapy+academic+industry+roundtable+preclinical+recommendations.">Update of the stroke therapy academic industry roundtable preclinical recommendations.</a> Stroke. 40, 2244-2250 (2009).</li></ol>

特別な利害関係は宣言されません。

ET-1誘発MCAOは、定期的に複数のラット系統で使用されている実験的虚血性脳卒中の確立されたモデルです。このモデル5、14を使用するときにこのようなラット系統、動物の年齢、体温、麻酔方法、およびオペレータの専門知識など、多くの変数が、梗塞体積の増加変動につながることができます。しかし、いくつかの研究者は、このモデルの利点は、比較的非侵襲的...

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td><ol><li>動物：8週齢、雄、手術時に250〜300グラムの重量を量るのSprague Dawleyラット（Charles River農場、ウィルミントン、MA、USA）。 </li><li>麻酔<ol class="lalpha"><li>吸入麻酔システム（VetEquip社、プレザントン、カリフォルニア州、米国） </li><li>イソフルラン麻酔（バクスター薬学、ディアフィールド、イリノイ州、アメリカ） </li></ol></li><li>定位システム（デヴィッド·インスツルメンツKopfは、タハンガ、CA、USA）を<ol class="lalpha"><li>小動物の定位システム</li><li>ラットの非破裂耳バー</li><li>ラット用ガス麻酔ヘッドホルダー</li></ol></li><li>温度調節<ol class="lalpha"><li> BAT-12マイクロプローブ温度計（世界プレシジョンインスツルメンツ社、サラソタ、フロリダ州、米国） </li><li> T /ポンプ、TP600サーマルブランケット（Gaymarインダストリーズ社、Orchard Park、ニューヨーク、アメリカ） </li></ol></li><li>手術器具<ol class="lalpha"><li>スカルペルハンドルと＃11ブレード、虹彩ピンセット、鉗子グレーフェ、スクリュードライバーブルドッグクランプリトラクター、26ゲージ針ベベル（ワールド·精密機器株式会社、サラソタ、フロリダ州、米国）と10μLシリンジ</li><li>マイクロモータ、ドリルと定位ホルダー、典型的なマニピュレーターインジェクター（Stoelting、ウッドデール、イリノイ、米国） </li><li> 1.0ミリメートルラウンドドリルいが、1.0ミリメートル倒立円錐ドリルいが（Roboz手術器具株式会社、ゲーサーズバーグ、メリーランド州、米国） </li></ol></li><li>外科用品<ol class="lalpha"><li> 2.4 mmのシャフトの長さと取り付けネジ0から80×3/32、21ゲージのガイドカニューレ[長い台座下4ミリメートル]とカニューレダミー（プラスチック1、ロアノーク、バージニア州、米国） </li><li>ジェット義歯アクリルと液体（ラング歯科製造株式会社、ホイーリング、イリノイ州、アメリカ） </li><li> 3.0ナイロン縫合糸（オアシス、メタワ、イリノイ、米国） </li><li>綿棒、Puralube眼軟膏（フィッシャーScientifiC、ピッツバーグ、PA、USA） </li><li>電気バリカン（オスター、プロビデンス、ロードアイランド州、米国） </li></ol></li><li>化学品<ol class="lalpha"><li>エンドセリン-1（アメリカンペプチド、サニーベール、カリフォルニア州、米国） </li><li>クロルヘキシジン2％（Agrilabs、セントジョセフ、ミズーリ州、米国） </li><li>ブプレノルフィン塩酸（ホスピーラ社、レイクフォレスト、イリノイ州、アメリカ） </li></ol></li><li>可視化装置<ol class="lalpha"><li>手術用顕微鏡（ザイラー音源と製造、セントルイス、ミズーリ州、米国） </li><li>光ファイバ照明装置（TechniQuip社、リヴァーモア、カリフォルニア州、米国） </li></ol></li><li>レーザードップラー血流計システム（ADInstruments社、コロラドスプリングズ、コロラド州、米国） <ol class="lalpha"><li>標準ペンシルプローブ</li><li>プローブホルダ</li><li>血流計</li><li> LabChart 7とPowerLabの4月30日</li></ol></li><li>梗塞体積の測定<ol class="lalpha"><li>ネズミ脳マトリックス（Zivic·ミラーラボ社、アリソンPark、ペンシルバニア、米国） </li><li> 2,3,5 - トリフェニルテトラゾリウムクロライド（シグマアルドリッチ社、セントルイス、ミズーリ州、米国）は、PBSに0.05％に希釈</li><li>フラットベッドスキャナ（エプソンパーフェクV30、エプソン·アメリカ社は、ロングビーチ、CA、USA）を</li><li>画像Jソフトウェア（ImageJの1.42qソフトウェア、米国国立衛生研究所、ベセスダ、MA、USA） </li></ol></li></ol></td></tr></tbody></table>

endothelin-1 induced middle cerebral artery occlusion model for ischemic stroke with laser doppler flowmetry guidance in rat

脳卒中は、2009年1、2に米国で推定700億ドルの原価計算、障害、世界中で死亡原因の第3位の数が原因の一つです。脳虚血のいくつかのモデルは、ストロークの人間の条件を模倣するために開発されてきた。それは、中大脳動脈（MCA）領域3における虚血性損傷からすべてのストロークの結果の80％にあることを示唆されている。 1990年代初頭に、エンドセリン-1（ET-1）4は開頭後にMCAの表面に直接隣接してそれを適用することにより、虚血を誘発するために使用されていました。その後、このモデルは局所脳虚血を生成するMCAにET-1を隣接の定位注入を使用して5に行われました。このモデルの主な利点は、迅速に手続きを実行する能力、ET-1の投与量を変更することによって、動脈の狭窄を制御する能力配信、脳に血液を供給するだけでなく、徐々にreperfusi頭蓋外の血管を操作する必要はありませんを含む率にすることは、より密接に5月7日 、ヒトでの再灌流を模倣しています。一方、ET-1のモデルは、開頭手術の必要性だけでなく、行程容積8の高い変動性を含むデメリットがあります。この変動は、ET-1の注入の間脳虚血を確認するためにレーザードップラーフローメトリー（LDF）の使用を低減することができる。ストローク変動に影響を与える要因としては、輸液の精度を含め、ET-1のバッチは6を使用していました 。もう一つの重要な考慮事項は、再灌流は、人間の脳梗塞における一般的な発生は、ET-1誘導MCAOが密接に多くの患者が閉塞9以下の数時間から数日の期間にわたって部分的な再灌流を持ってどこに人間の脳梗塞のことを模倣していてもよいために閉塞の持続時間ですが、ということです10。このプロトコルは、具体的にラットの虚血性脳卒中のためのET-1誘発MCAOモデルについて説明します。また、作業中は、特別な考慮事項と潜在的な欠点に注意を喚起します。

1。術後神経学的評価動物が意識を取り戻した後、テストの多種多様なバランス、握力、足置き、姿勢の非対称性と登山階段を含む神経障害を評価するために使用することができます。ヒマワリ種子タスクは、モータと梗塞容積7、12と有意な相関を持っている感覚機能の総評価である。開いて5ヒマワリの種を消費しながら、このタスクでは、ラットは時間が計測さ?...

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Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

脳虚血の動物モデルは、ストロークの人間の状態をシミュレートするために開発されてきた。このプロトコルは、ラットの虚血性脳卒中のエンドセリン-1（ET-1）誘発中大脳動脈閉塞（MCAO）モデルについて説明します。加えて、重要な考慮事項、利点、およびこのモデルの欠点が議論されている。

ラットにおけるレーザードップラー血流計の指針と虚血性脳卒中のエンドセリン-1誘発性中大脳動脈閉塞モデル

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

endothelin-1-induced-middle-cerebral-artery-occlusion-model-for

Research

JoVE Journal

Medicine

19.8K ビュー.  University of Florida. 脳虚血の動物モデルは、ストロークの人間の状態をシミュレートするために開発されてきた。このプロトコルは、ラットの虚血性脳卒中のエンドセリン-1（ET-1）誘発中大脳動脈閉塞（MCAO）モデルについて説明します。加えて、重要な考慮事項、利点、およびこのモデルの欠点が議論されている。

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Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.

Filamentous occlusion of the Middle cerebral artery is a common model for studying ischemic stroke in mice.

マウスにおけるモデリングのストローク - フィラメントモデルと中大脳動脈閉塞

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

医学

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

中大脳動脈閉塞のマウスモデル

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United States in 20091,2. The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model was developed by Koizumi4 in 1986 to simulate this 
impactful human pathology in the rat. A modification of the MCAO method was later presented by Longa3. Both techniques have been widely used to identify 
molecular mechanisms of brain injury resulting from ischemic stroke and potential therapeutic modalities5. This relatively noninvasive method in rats has been 
extended to use in mice to take advantage of transgenic and knockout strains6,7. To model focal cerebral ischemia, an intraluminal suture is advanced via 
the internal carotid artery to occlude the base of the MCA. Retracting the suture after a specified period of time mimics spontaneous reperfusion, but the 
suture can also be permanently retained. This video will be demonstrating the two major approaches for performing intraluminal MCAO procedure in mice in a 
stepwise fashion, as well as providing insights for potential drawbacks and pitfalls. The ischemic brain tissue will subsequently be stained by 
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to evaluate the extent of cerebral infarction8.

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is the most frequent used model among experimental ischemic stroke models. Here we will demonstrate the entire model in detail with the guide of Laser Doppler flowmetry, and its representative results.

マウスにおけるレーザードップラー流量計の指針と虚血性脳卒中に対する腔内中大脳動脈閉塞（MCAO）モデル

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We have established bilateral common carotid artery occlusion as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance to transient focal cerebral ischemia in C57Bl6/J mice. In this video, we will demonstrate the methodology used for this study.

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning (PC) &#x2013; a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We established bilateral common carotid artery occlusion (BCCAO) as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance (IT) to transient focal cerebral ischemia (induced by middle cerebral artery occlusion, MCAO) in C57Bl6/J mice.

局所脳虚血への早期虚血耐性を誘導するために適切な前処理刺激として二国間の総頚動脈閉塞

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be performed in many locations overlying the rat cerebrum, but is most easily carried out by creating a craniectomy over the readily accessible frontal or parietal bones. Most frequently, we have used this technique in combination with the endothelin-1 middle cerebral artery occlusion model of ischemic stroke to quantify the changes in middle cerebral artery vessel diameter that occur with injection of endothelin-1 into the brain parenchyma adjacent to the proximal MCA4, 5. In order to visualize the proximal portion of the MCA during endothelin -1 induced MCAO, we use a technique to create a cranial window through the temporal bone on the lateral aspect of the rat skull (Figure 1). Cerebral arteries can be visualized either with the dura intact or with the dura incised and retracted. Most commonly, we leave the dura intact during visualization since endothelin-1 induced MCAO involves delivery of the vasoconstricting peptide into the brain parenchyma. This bypasses the need to incise the dura directly over the visualized vessels for drug delivery. This protocol will describe how to create a cranial window to visualize cerebral arteries in a step-wise fashion, as well as how to avoid many of the potential pitfalls pertaining to this method.

This article describes a method for visualizing rat cerebral arteries through a cranial window using temporal craniectomy in order to view proximal portions of the middle cerebral artery (Figure 1). This versatile method can be combined with various techniques of drug delivery to measure cerebral artery reactivity in vivo.

エンドセリン-1誘発性中大脳動脈閉塞中大脳動脈を可視化するために頭蓋窓を利用

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

腔内中大脳動脈閉塞のラット脳卒中モデルにおける脳血流モニタリングのための最適化されたシステム

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical options are available for a small proportion of stroke patients in the acute phase. Current research is intensively searching for novel therapeutic strategies and is increasingly focusing on the sub-acute and chronic phase after stroke because more patients might be eligible for therapeutic interventions in a prolonged time window. These delayed mechanisms include important pathophysiological pathways such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity and regeneration. In order to analyze these mechanisms and to subsequently evaluate novel drug targets, experimental stroke models with clinical relevance, low mortality and high reproducibility are sought after. Moreover, mice are the smallest mammals in which a focal stroke lesion can be induced and for which a broad spectrum of transgenic models are available. Therefore, we describe here the mouse model of transcranial, permanent coagulation of the middle cerebral artery via electrocoagulation distal of the lenticulostriatal arteries, the so-called &#8220;coagulation model&#8221;. The resulting infarct in this model is located mainly in the cortex; the relative infarct volume in relation to brain size corresponds to the majority of human strokes. Moreover, the model fulfills the above-mentioned criteria of reproducibility and low mortality. In this video we demonstrate the surgical methods of stroke induction in the &#8220;coagulation model&#8221; and report histological and functional analysis tools.

Various murine models of middle cerebral artery occlusion (MCAO) are widely used in experimental brain research. Here, we demonstrate the model of transcranial permanent distal MCAO which produces consistent cortical infarction of a size corresponding to damage imposed by the majority of human ischemic strokes.

マウスにおけるモデリングのストローク：遠位中大脳動脈の永久的な凝固

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic stroke. However, the use of tPA is limited by its narrow therapeutic window and by increased risk of hemorrhagic transformation. There is an urgent need to develop suitable stroke models to study new thrombolytic agents and strategies for treatment of ischemic stroke. At present, two major types of ischemic stroke models have been developed in rats and mice: intraluminal suture MCAO and embolic MCAO. Although MCAO models via the intraluminal suture technique have been widely used in mechanism-driven stroke research, these suture models do not mimic the clinical situation and are not suitable for thrombolytic studies. Among these models, the embolic MCAO model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical investigation of thrombolytic therapy. This embolic model was first developed in rats by Overgaard et al.1 in 1992 and further characterized by Zhang et al. in 19972. Although embolic MCAO has gained increasing attention, there are technical problems faced by many laboratories. To meet increasing needs for thrombolytic research, we present a highly reproducible model of embolic MCAO in the rat, which can develop a predictable infarct volume within the MCA territory. In brief, a modified PE-50 tube is gently advanced from the external carotid artery (ECA) into the lumen of the internal carotid artery (ICA) until the tip of the catheter reaches the origin of the MCA. Through the catheter, a single homologous blood clot is placed at the origin of the MCA. To identify the success of MCA occlusion, regional cerebral blood flow was monitored, neurological deficits and infarct volumes were measured. The techniques presented in this paper should help investigators to overcome technical problems for establishing this model for stroke research.

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

ラットにおける同種血血栓による虚血性脳卒中のための塞栓中大脳動脈閉塞（MCAO）

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Surgical Approach for Middle Cerebral Artery Occlusion and Reperfusion Induced Stroke in Mice

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ischemic in origin and occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA). Currently the only Food and Drug Administration (FDA) approved drug for the treatment of this devastating disease is tissue plasminogen activator (tPA). However, tPA has a small therapeutic window for administration (3 - 6 hr), and is only effective in 4% of the patients who actually receive it. Current research focuses on understanding the pathophysiology of stroke in order to find potential therapeutic targets. Thus, reliable models are crucial, and the MCA occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) is deemed to be the most clinically relevant surgical model of ischemic stroke, and is fairly non-invasive and easily reproducible. Typically the MCAo model is used with rodents, especially with mice due to all the genetic variations available for this species. Here we describe (and present in the video) how to successfully perform the MCAo model (with reperfusion) in mice to generate reliable and reproducible data.

In order to understand the pathophysiology of stroke, it is important to use reliable models. This paper will describe one of the most frequently used stroke models in mice, termed the middle cerebral artery occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) with reperfusion.

マウスの中大脳動脈閉塞再灌流誘発性の脳卒中のための外科的アプローチ

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ...

Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Model of Neonatal Stroke in P10 Rats

A number of animal models have been used to study hypoxic-ischemic injury, traumatic injury, global hypoxia, or permanent ischemia in both the immature and mature brain. Stroke occurs commonly in the perinatal period in humans, and transient ischemia-reperfusion is the most common form of stroke in neonates. The reperfusion phase is a critical component of injury progression, which occurs over a period of days to weeks, and of the endogenous response to injury. This postnatal day 10 (p10) rat model of transient middle cerebral artery occlusion (tMCAO) creates a unilateral, non-hemorrhagic focal ischemia-reperfusion injury that can be utilized to study the mechanisms of focal injury and repair in the full-term-equivalent brain. The injury pattern that is produced by tMCAO is consistent and highly reproducible and can be confirmed with MRI or histological analyses. The severity of injury can be manipulated through changes in occlusion time and other methods that will be discussed.

Neonatal stroke is a significant cause of early brain injury requiring a translational model with consistent focal injury patterns and high reproducibility in order to enable study. This study describes the detailed surgical procedure for creating a non-hemorrhagic, unilateral focal ischemia-reperfusion injury in full-term-equivalent rodents.

P10ラットにおける新生児脳卒中の一過性中大脳動脈閉塞モデル

A number of animal models have been used to study hypoxic-ischemic injury, traumatic injury, global hypoxia, or permanent ischemia in both the immature ...