私たちは、博士に感謝します。流体力学の遺伝子導入に関するアドバイスをアレックスGelbardとウィレムOverwijk。この作品は、NIH（AI098099、SSW）、癌エピジェネティクスのためのMDアンダーソンセンター、炎症および癌のためのMDアンダーソンセンター（SSW）とREボブ·スミス教育基金（HSL）からの補助金によって支えられている。

制度上の承認は、マウスを含む、本明細書に記載されているすべての実験操作のために、事前に取得する必要があります。これらは、骨髄前駆細胞の単離のためのC57BL6マウスの使用を含む、IFNAR - / -養子造血前駆細胞の転写およびインビボでのサイトカインの過剰発現のためHGTの使用のためのレシピエントとしてマウス。適切な住宅や動物のケアにも研究者や機関が提供する必要があります。さらに、制度の承認は、流体力学的な遺伝子導入（ すなわち 、組換えDNAの承認）に使用されるプラスミドが必要な場合があります。ここに記載された研究は、UT MDアンダーソンがんセンターの施設内動物管理使用委員会によって承認された。 1。流体力学的遺伝子導入（HGT） このステップは、生体 5 の DC拡大のためのFlt3L循環誘導するためのCDPの養子移入に2日前までに行う必要があります。 PRepare少なくとも5レシピエントマウス/グループ。 <ol><li>効率的なHGTを達成するために、レシピエントIFNARの血管- / -マウス（CD45.2 +）を 5〜10分間の加熱ランプにマウスを曝露することによって拡張されるべきである。 </li><li>拘束装置内にマウスを置き、70％エタノールで尾を消毒する。 </li><li> 27 Gの針を用いて尾静脈に無菌PBS 2mlにコードするプラスミドのFlt3L5μgのを注入する。示されるように、対照コホートのために、尾静脈を介して、空のベクター（PORF）5μgのを注入する。 </li><li>尾静脈注射の有害な効果がないことを確認するために15〜30分間マウスを監視します。 2日間の住宅施設にマウスを返します。 </li></ol> 2。マウス骨髄から造血前駆細胞の分離このステップは、2日HGTから行ってください。受信者IFNARへの養子移入のための骨髄前駆細胞の供給源として、コンジェニックCD45.1 +マウスを使用- /- 動物（CD45.2 +）。このプロトコルでは、コンジェニック系統は、ドナーとレシピエント由来のDCを区別するために、ならびにによるMHCミスマッチに対する免疫媒介性枯渇を回避するために必要とされる。約10〜20マウスは、転移実験のために造血前駆細胞（10 5細胞/レシピエントマウス）の十分な数を提供するために必要とされるであろう。 <ol><li> CO 2窒息と頸椎脱臼により10ジェニックのCD45.1 +マウスを安楽死させる。 </li><li>解剖トレイ上の各枝肉を置き、70％エタノールで腹部と脚を殺菌。 </li><li>半ば腹部の切開を行い、脚の長さに沿って皮膚をカット、各脚に腹部から皮膚を通ってカット。 </li><li>静かにそれぞれの脚から皮膚を除去し、切断され、鋭利なハサミを使用して股関節の枝肉から足を外します。 </li><li>慎重に鋭い刃を使用して、それぞれの脚の大腿骨と脛骨から筋肉を取り外す。 </li><li>削除する両方の鋭いメスで大腿骨および脛骨の端部は、（10％の熱不活性化ウシ胎児血清、1％ペニシリン/ストレプトマイシン、1 mMピルビン酸ナトリウムおよび50μMのβ-メルカプトエタノールをRMPI）完全RPMIを含有する培養皿に骨を配置する。 </li><li> 27 Gの針に接続された完全RPMIの1ミリリットルを含む注射器を準備します。 </li><li>大腿骨や脛骨の一端に27 G針を挿入します。そっと骨に完全RPMIを注入することにより、大腿骨や脛骨から骨髄をフラッシュします。その骨髄細胞が骨から除去されていることを確認し、これは視覚的に濁っ追放媒体を検出することによって達成することができる。 </li><li>徹底的に骨髄細胞を除去するために、各大腿骨と脛骨3回洗い流す繰り返します。 </li><li>静かに培養皿の上下3-5Xを、細胞をピペッティングすることによって単一細胞懸濁液を準備します。 </li><li>新しいculturに滲出細胞を配置する、40μMの細胞ストレーナーを通して骨髄細胞を渡すことによって、破片を除去Eディッシュ。無菌注射器プランジャの端部と穏やかな圧力によってストレーナに表示されるすべての細胞塊を混乱させる。 </li><li>溶解製造者の指示に従って商業RBC溶解緩衝液で総骨髄細胞懸濁液中に存在する赤血球（RBC）。 2ミリリットルRBC溶解buffer/4-6×10 7個の細胞（1マウスから、一般的に細胞）と室温で5分間のインキュベーション時間を使用してください。 </li><li> （1×PBS + 2 mMのEDTA +1％FBS）、ペレット化細胞を遠心分離により穏やかに洗浄液を吸引する10ミリリットルFACS緩衝液に再懸濁し、穏やかに培地を吸引し、500×gで4分間の遠心分離によって細胞をペレット化することにより骨髄細胞を洗浄バッファ。 </li><li>ステップ2.13で説明したように2回の洗浄の合計のため、洗浄を繰り返します。 </li></ol> 3。蛍光活性化細胞のCDPを隔離するために選別（FACS） このステップは、初期の負の選択手順にMidiMACS電池セパレータとMacのLD列へのアクセスを必要とする蛍光標識抗体で染色した後、多色の前駆サブセットを浄化するために、少なくとも3レーザーでだけでなく、FACS装置。 <ol><li>ステップ2.14における2回目の洗浄の後、骨髄細胞を数える。ステップ2.13に記載のように遠心分離により細胞をペレット化し、FACS緩衝液30μlあたり4×10 7個の細胞の最終濃度を達成するために、FACS緩衝液に再懸濁する。 </li><li> FACSのための細胞を調製するために、系列陰性細胞を最初に磁気ビーズカラムクロマトグラフィーを用いて骨髄液から系統陽性細胞を除去するネガティブ選択技術によって濃縮される。 CD3、CD19、CD11cの、のCD11bおよびTER-119 ABS：負の選択手順については、造血系統マーカーを認識し、以下の市販のラット抗マウス抗体（ABS）の各1μgのを追加します。 Abは、FACS緩衝液中の30μlの細胞懸濁液に2μlの/抗体の量で添加されるべきである。 </li><li> 30 4℃で細胞懸濁液をインキュベート分。ステップ2.13で説明したようにインキュベートした後、FACS緩衝液10mlで細胞を2回洗浄します。 </li><li> FACS緩衝液中4×10 7 cells/40200μlの最終濃度を達成するために細胞を再懸濁。細胞懸濁液の各40μLあたりのヤギ抗ラットIgGを磁気マイクロビーズの20を添加する。穏やかに混合し、30分間、4℃でインキュベートする。ステップ2.13で説明したようにFACS緩衝液10mlで細胞を洗浄。 </li><li> FACS緩衝液500μl中に10 8の骨髄細胞まで再懸濁する。 </li><li>製造者の指示に従ってMidiMACS電池セパレータへのMACS LD列をロードし、2ミリリットルのFACS緩衝液でカラムを前すすぎ。 </li><li> FACS緩衝液2.5mlに5×10 8細胞まで装填カラムに骨髄細胞懸濁液を適用する。確保コレクションチューブ（15mlコニカルチューブ）をカラムの下に配置されている。コラムFACS緩衝/洗浄の2ミリリットルで3回洗浄し、について濃縮される列を通過した細胞を回収系統陰性細胞。カラムから溶出した物質で細胞を（洗浄スルー）カウントします。 </li><li> FACSにより造血前駆細胞サブセットの正の選択を実行するには、次の蛍光共役ABSで染色細胞：IL-7R（パシフィックブルー）のFlt3（PE）、SCA-1（PE.Cy7）、CD115（APC）、C-KIT （APC.Cy7）ABSに加え、CD3、CD19、CD11cの、のCD11b、F4/80及びTER119に対して向け系統マーカーのAbの混合物（すべてPerCP抗体のCy5.5で標識された）。総容量100μlで各抗体の0.5〜1μlを使用する。 20〜30分、4℃で細胞懸濁液をインキュベートする。 </li><li> FACS緩衝液中に再懸濁ステップ2.13に示されるように、×10 7細胞/ ml 2-3の濃度で細胞を洗浄する。細胞塊を除去するために、35μMセルストレーナーキャップチューブを介して細胞をフィルタリングします。この最後のステップは、FACS装置を詰まら避けることが重要です。 </li><li> FACSステージにFACSチューブに細胞懸濁液を置き、CDPが（LIN -のc-kit LO CD115 +のFlt3 +）を並べ替えるには指示されたマーカープロファイルに基づい。完全RPMIの5ミリリットルを含む15ミリリットルチューブに精製した細胞を収集する。 </li><li> FACSの実行終了時に選別された細胞の絶対数を記録します。養子移入実験のための無菌PBSにステップ2.13再懸濁に示されるように、遠心分離により細胞をペレット化。 </li></ol> 4。 CDPを養子移入このステップは、典型的には、レシピエントマウスが収容されている動物施設で行われる。 FACS機の位置に応じて、前の養子移入に動物施設に精製された前駆細胞集団の輸送を含み得る。前駆細胞の懸濁液は、無菌に維持し、氷上で輸送されるべきである。 <ol><li> 100μlの滅菌PBSの総容量で10 5、精製の​​CDPを希釈することにより、注射のための細胞懸濁液を準備します。 27のG針に取り付けられたシリンジ内の細胞懸濁液を置きます。 </li><li>受信者を公開IFNAR - / - </suのp&gt;尾静脈を介して効率的な注入を達成するために5〜10分間の加熱ランプマウス（CD45.2 +）。 </li><li>拘束装置内にマウスを置き、70％エタノールで尾を消毒する。 </li><li> 27 Gの針を用いて尾静脈に100μlのPBS中の10 5 FACS精製の​​CDPを注入する。 </li><li>尾静脈注射の有害な効果がないことを確認するために15〜30分間マウスを監視します。住宅施設にマウスを返します。 </li></ol> 5。 pDCの量のPPと測定物の単離<ol><li>養子移入次の7〜10日で、レシピエントマウスを安楽死させる。優しく切開により、マウスを開き、腸を公開します。 </li><li>腸全体を削除し、PBSに浸したペーパータオルの上に置きます。細かい鉗子やハサミを使用して、小腸の壁に沿って表示されているすべてのプロジェクト参加を収集します。 C57BL6およびIFNAR - / -マウスは、一般的に見られる孤立リンパ濾胞と異なる5月10日、PP /マウスを持っている小腸18に沿って。プロジェクト参加は非常に慎重にすべてのPPが特定され、解剖されていることを確認、単一のマウスの中に、多くの場合、構造的に異なることに注意してください。 </li><li> PBSを含むペトリ皿にのPPを置き、糞を削除するために鉗子を使用しています。プロジェクト参加の清掃に二回、この手順を繰り返します。 </li><li> 37℃で1時間激しく撹拌しながら50ミリリットルのフラスコ中の10ミリリットル1Xハンクス液（HBSS）中の1 mg / mlのコラゲナーゼIVとダイジェストのPP </li><li>無菌注射器プランジャとストレーナーを通して40μmのセルストレーナーと力セルの上の区画に消化されたPPを配置します。を15mlコニカルチューブ中のPPの細胞懸濁液を収集する。 </li><li> 37％パーコール液（RPMI培地中で37％パーコール）の6ミリリットルで5分間再懸濁用の500×gで遠心分離することにより、歪PP細胞をペレット化。穏やかパーコール段階勾配を形成するために、細胞懸濁液の下に（RPMI培地中で、70％パーコール）70％パーコール溶液6mlを置く。 </li><li> 20分Aの遠心細胞遠心機とT 800 XGが解消 。単核細胞を、70分の37％の界面に移動します。遠心分離後、単核細胞集団は、界面領域での慎重なピペット操作によって収集されるべきである。ペレットを遠心分離によって細胞を回収し、完全RPMI /洗浄、50mlの二回洗浄する。大容量は、完全なパーコール除去を確実にするために使用される。 </li><li> CD45.1（APC.Cy7）、CD45.2（PE：養子移入前駆細胞（CD45.1 +）またはレシピエントマウス（CD45.2 +）に由来するマウスのpDCを検出するために、以下の抗体を用いて収集されたPP細胞を染色。Cy7で）のCD11c（パシフィックブルー）のCD11b（PerCP抗体のCy5.5）、B220（APC）、シグレック-H（PE）およびPDCA-1（FITC）ABS。ステップ3.9および3.10に示すようにPP細胞のフローサイトメトリー解析を行う。 B220 +シグレックH + PDCA-1 +表現-そののCD11c +のCD11bでのpDCを識別します。 ％のpDC xに：絶対pDCの番号は以下の式によって決定することができるタルPP細胞数= PPのpDC。 </li></ol>

<ol>
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著者らは、競合する経済的利益を宣言していません。

（ - / -マウスなどIFNAR）について説明養子転写技術は、ここにPPのpDCが不足しているレシピエントマウスにおけるPPのpDCの人口のCDPの寄与を評価した。将来の実験では、それは、PPのpDCはのFlt3 +のCLPから派生するかどうか、特に、PPたpDCを生成する際に、他の前駆細胞サブセットの可能性を評価することが重要になります。この質問は、PPのpDCがPP積算5 IFNAR...

ここでは、一般的な樹状細胞前駆体（のCDP）はパイエル板（PP）の中の形質細胞様樹状細胞（PDC）の人口を生じさせることができるかどうかを評価するためのプロトコルを示しています。この方法を使用しての全体的な目標は、パイエル板（PPたpDC）中のpDCの発生調節を評価することであった。これが重要である理由は、PPのpDCは骨髄、血液および脾臓を含む他の組織に見出さのpDCは異なるので、それはPPのpDCに及び他のpDCの集団が発達および/または機能的に関連しているかどうかは不明であるということである。具体的には、pDCは広く、私はToll様受容体7と迅速なIFNの分泌1-3による9（TLR-7/9）の刺激に応答して、造血系内（IFN）生産インターフェロンプリンシパルタイプであることで知られています。しかし、PPのpDCは、私がTLRアゴニスト刺激4,5に応じて型IFNの産生が不足している。また、PPたpDCはまた、骨髄および脾臓で発見さたpDCと異なる型からの信号を必要とする私は（IFN）受容体（IFNAR1）をインターフェロンまたはIFNは彼らの開発および/ ​​または蓄積5用の分子STAT1シグナル伝達。これらのデータは、個別の調節機構がPPの他の器官のpDCに対するpDCに（ 例えば 、骨髄、脾臓）5を制御する可能性を示唆している。 この方法の開発につながった理論的根拠は、樹状細胞（DC）生物学の理解における最近の進歩に基づいていた。ほとんどは、全てではない、DCサブセットがFMS様チロシンキナーゼ3受容体（のFlt3）6-10を発現する造血前駆細胞から派生したが、DCの開発は古典的な骨髄およびリンパ経路に限定されるものではない。たとえば、のFlt3 +は骨髄系共通前駆細胞（CMPの、LIN - IL-7R - SCA-1 -のc-kit + CD34 +FcγRのLO / - ）のCDP（LIN -のc-kit LO CD115 +のFlt3 +）を生じさせる、whicHは、さらにPDCと従来のDC（のCDC）9,10に分化する。これとは対照的に、のFlt3 +リンパ球系共通前駆細胞（CLPの、LIN - IL-7R + SCA-1 LOのc-Kit LO）は pDCに11に、主に開発しています。したがって、従来の研究では、典型的な分析は、骨髄、脾臓および/または血液のpDCサブセットに制限されているがpDCには、のFlt3Lの調節下に少なくとも2つの異なる造血前駆細胞集団から生じる示す。このように、PPのpDCを生成前駆細胞集団（S）は、調査を必要とした。 PPのpDCの起源を理解することは、彼らが他のpDC集団と共通の発生経路を共有しているかどうかに光を当てる、または、PPでの生成中に別個の機構を利用します。 ここに記載されたアプローチのユニークな利点は、造血前駆細胞の養子移入の受容体としてのPPのpDCの深刻な不足を示しているマウスを使用することである。遺伝子を持つマウスまたはSTAT1（ のStat1 - / - ）をコードする遺伝子IFNAR1（ - / -マウスIFNAR）中チック欠失はPPのpDC 5の著しい減少を明らかにした。したがって、これらの株は、養子免疫伝達試験は、例えば、致死的照射のような強力な細胞アブレーションレジームの非存在下で行うことができるように、PP用のpDCが低減された環境を提供する。ここで紹介する方法のさらなる強さのFlt3Lの上昇循環量を刺激する流体力学的な遺伝子導入（HGT）を使用することである。これは、組換えタンパク質の注入に対して、 生体内でのFlt3Lを誘導するためのコスト効果的なアプローチを提供します。私たちの研究室にあるものを含む多数の研究は、実験条件5,12,13様々なサイトカイン量を誘導するためにHGTを採用しています。 DCの労働力と正確な免疫機能の分割は、免疫学の主要な関心事である。特に、pDCは、経口寛容および全身抗ウイルスの重要なメディエーターである応答は、まだ彼らはまた、自己免疫および癌14〜17の発展と持続性に貢献すると思われる。ここに記載されているプロトコルは、PPのpDCを規制発達のメカニズムをより十分に検討できるようになります。また、このアプローチは、研究がPP pDCの機能を評価することを可能にし、PPの内の他の集団の免疫調節および機能の理解に拡張することができる。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="867">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">C57BL/6J</td>
			<td style="width:201px;">JAX</td>
			<td style="width:177px;">664</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">B6.SJL</td>
			<td style="width:201px;">JAX</td>
			<td style="width:177px;">2014</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">RPMI</td>
			<td style="width:201px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:177px;">11875-093</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">15 ml conical tubes</td>
			<td style="width:201px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:177px;">352095</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">50 ml conical tubes</td>
			<td style="width:201px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:177px;">352070</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Sterile surgical tweezers</td>
			<td style="width:201px;"></td>
			<td style="width:177px;"></td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Sterile small pair scissors</td>
			<td style="width:201px;"></td>
			<td style="width:177px;"></td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Sterile large pair scissors</td>
			<td style="width:201px;"></td>
			<td style="width:177px;"></td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">40 &#956;m cell strainer</td>
			<td style="width:201px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:177px;">352340</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">35 &#956;m cell strainer cap tubes</td>
			<td style="width:201px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:177px;">352235</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">RBC lysing buffer</td>
			<td style="width:201px;">Sigma</td>
			<td style="width:177px;">R7757</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:260px;">FACS buffer</td>
			<td style="width:201px;"></td>
			<td style="width:177px;"></td>
			<td style="width:229px;">PBS, 2 mM EDTA, 1% FCS, filter sterilized</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Percoll</td>
			<td style="width:201px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:177px;">17089102</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">10XHBSS</td>
			<td style="width:201px;">Sigma</td>
			<td style="width:177px;">H4641</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Collagenase IV</td>
			<td style="width:201px;">Worthington</td>
			<td style="width:177px;">LS004188</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Goat ant-rat IgG microbeads</td>
			<td style="width:201px;">Milteyni Biotec</td>
			<td style="width:177px;">130-048-501</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">LD column</td>
			<td style="width:201px;">Milteyni Biotec</td>
			<td style="width:177px;">130-042-901</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Rat anti-D3</td>
			<td style="width:201px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:177px;">555273</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Rat anti-CD19</td>
			<td style="width:201px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:177px;">553783</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Rat anti-CD11b</td>
			<td style="width:201px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:177px;">553308</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Rat anti-CD11c</td>
			<td style="width:201px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:177px;">553799</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Rat anti-Ter119</td>
			<td style="width:201px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:177px;">553671</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Anti-CD3 (PerCP)</td>
			<td style="width:201px;">eBiosciences</td>
			<td style="width:177px;">45-0031</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Anti-CD19 (PerCP)</td>
			<td style="width:201px;">eBiosciences</td>
			<td style="width:177px;">45-0193</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Anti-CD11b (PerCP)</td>
			<td style="width:201px;">eBiosciences</td>
			<td style="width:177px;">45-0112</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Anti-CD11c (PerCP)</td>
			<td style="width:201px;">eBiosciences</td>
			<td style="width:177px;">45-0114</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Anti-F4/80 (PerCP)</td>
			<td style="width:201px;">eBiosciences</td>
			<td style="width:177px;">45-4801</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Anti-Ter119 (PerCP)</td>
			<td style="width:201px;">eBiosciences</td>
			<td style="width:177px;">45-5921</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Anti-Sca-1 (PE.Cy7)</td>
			<td style="width:201px;">eBiosciences</td>
			<td style="width:177px;">25-5981</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Anti-CD115 (APC)</td>
			<td style="width:201px;">eBiosciences</td>
			<td style="width:177px;">17-1152</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Anti-c-kit (APC.Cy7)&#160;</td>
			<td style="width:201px;">eBiosciences</td>
			<td style="width:177px;">47-1171</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Anti-IL-7R (Pacific Blue)</td>
			<td style="width:201px;">eBiosciences</td>
			<td style="width:177px;">48-1271</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Anti-Flt3 (PE)</td>
			<td style="width:201px;">eBiosciences</td>
			<td style="width:177px;">12-1351</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Anti-CD45.1 (APC.Cy7)</td>
			<td style="width:201px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:177px;">560579</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Anti-CD45.2 (PE.Cy7)</td>
			<td style="width:201px;">Biolegend</td>
			<td style="width:177px;">109830</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Anti-CD11c (Pacific Blue)</td>
			<td style="width:201px;">eBiosciences</td>
			<td style="width:177px;">48-0114</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Anti-B220 (APC)</td>
			<td style="width:201px;">eBiosciences</td>
			<td style="width:177px;">25-0452</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Anti-Siglec-H (PE)</td>
			<td style="width:201px;">eBiosciences</td>
			<td style="width:177px;">12-0333</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Anti-PDCA-1 (FITC)</td>
			<td style="width:201px;">eBiosciences</td>
			<td style="width:177px;">Nov-72</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Cell sorter</td>
			<td style="width:201px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:177px;"></td>
			<td style="width:229px;">e.g. BD Fortessa</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Heat lamp</td>
			<td style="width:201px;"></td>
			<td style="width:177px;"></td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">Mouse restrainer</td>
			<td style="width:201px;"></td>
			<td style="width:177px;"></td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">1 ml syringes</td>
			<td style="width:201px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:177px;">309602</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:260px;">27&#189; G needles (sterile)</td>
			<td style="width:201px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:177px;">305109</td>
			<td style="width:229px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing the development of murine plasmacytoid dendritic cells in peyer's patches using adoptive transfer of hematopoietic progenitors

このプロトコルは、腸のパイエル板（PP）に形質細胞様樹状細胞（PDC）を生成するために、精製された造血前駆細胞の能力を分析する方法について詳しく説明します。一般的な樹状細胞前駆体（のCDP、LIN -のc-kit LO CD115 +のFlt3 +）は 、FACSによりC57BL6マウスの骨髄から精製し、PPの大幅のpDCの人口が不足しているレシピエントマウスに移し、この場合、IFNAR - / -マウスは、転写レシピエントとして使用した。一部のマウスでは、樹状細胞増殖因子Flt3リガンド（Flt3Lを）の過剰発現は、Flt3Lをコードするプラスミドの流体力学的遺伝子導入（HGT）を用いて、従来のCDPの養子移入に施行された。のFlt3Lの過剰発現は、転送（または内因性）造血前駆細胞から発生するDC集団を拡張します。前駆転送後7〜10日で、養子移入前駆細胞から発生するのpDCは、上の受容細胞と区別された転送のCDPが+ CD45.1いると受信者がCD45.2 +のあることからpDCを持つCD45マーカー発現に基づい。 PP中のpDC集団に寄与するとのFlt3Lに応答する転写のCDPの能力は、レシピエントマウスからのPPの単一細胞懸濁液のフローサイトメトリーにより評価した。この方法は、他の前駆細胞集団は、PPのpDCを生成することができるかどうかを試験するために使用することができる。さらに、このアプローチは、HGTを介して循環するサイトカインを操作することによって、推定発達因子および/または適切なノックダウン、ノックアウトまたは過剰発現に前駆細胞サブセットを転送することにより、PP中のpDC発達に影響を与えると予測される因子の役割を調べるために使用することができる。この方法はまた、PPとのpDCはPP内の他の免疫サブセットの頻度または機能にどのように影響するかの分析を可能にすることができる。 - / -マウス、深刻な枯渇PP pDCを野生型マウスと比較して、このようにallowiを示し、この方法のユニークな特徴はIFNARの使用で致死照射からの交絡の影響がない状態でのPPのpDCのNG再構成。

我々の結果は、プロトコル2および3に詳述されるように、マウス骨髄細胞からのCDPの単離（ 図1）のためのゲート戦略を示している。 CDPは、全骨髄細胞の約0.1％を含み、およそ4-6×10 4のCDPは、一匹のマウスから単離することができる。養子移入すると、CDPははPDCとCDCは10に分化する。 <img alt="図1" fo:content-width="5in" fo...

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Assessing the Development of Murine Plasmacytoid Dendritic Cells in Peyer&#039;s Patches Using Adoptive Transfer of Hematopoietic Progenitors

このプロトコルは、FACSを介した細胞の分離、流体力学的遺伝子導入、およびパイエル板の免疫サブセットのフロー分析を含む技術を使用して、一般的な樹状細胞前駆体からのパイエル板での形質細胞様樹状細胞の分化を評価するための実験手順について説明します。

造血前駆細胞の養子移入を使用して、パイエル板におけるマウス形質細胞様樹状細胞の開発を評価

This protocol details a method to analyze the ability of purified hematopoietic progenitors to generate plasmacytoid dendritic cells (pDC) in intestinal ...

assessing-development-murine-plasmacytoid-dendritic-cells-peyer-s

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Assessing the Development of Murine Plasmacytoid Dendritic Cells in Peyer's Patches Using Adoptive Transfer of Hematopoietic Progenitors

11.1K ビュー.  The University of Texas MD Anderson Cancer Center. このプロトコルは、FACSを介した細胞の分離、流体力学的遺伝子導入、およびパイエル板の免疫サブセットのフロー分析を含む技術を使用して、一般的な樹状細胞前駆体からのパイエル板での形質細胞様樹状細胞の分化を評価するための実験手順について説明します。 

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Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into mouse tail veins and colonize in the lungs, thereby, resembling the last steps of tumor cell spontaneous metastasis: survival in the circulation, extravasation and colonization in the distal organs. From a therapeutic point of view, the experimental metastasis model is the simplest and ideal model since the target of therapies is often the end point of metastasis: established metastatic tumor in the distal organ. In this model, tumor cells are injected i.v into mouse tail veins and allowed to colonize and grow in the lungs. Tumor-specific CTLs are then injected i.v into the metastases-bearing mouse. The number and size of the lung metastases can be controlled by the number of tumor cells to be injected and the time of tumor growth. Therefore, various stages of metastasis, from minimal metastasis to extensive metastasis, can be modeled. Lung metastases are analyzed by inflation with ink, thus allowing easier visual observation and quantification.

An experimental lung metastasis and CTL immunotherapy mouse model for analysis of tumor cells-T cell interaction in vivo.

実験的転移とCTLの養子移入免疫療法のマウスモデル

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into ...

免疫・感染学

Isolating And Immunostaining Lymphocytes and Dendritic Cells from Murine Peyer's Patches

Peyer's patches (PPs) are integral components of the gut-associated lymphoid tissues (GALT) and play a central role in intestinal immunosurveillance and homeostasis. Particulate antigens and microbes in the intestinal lumen are continuously sampled by PP M cells in the follicle-associated epithelium (FAE) and transported to an underlying network of dendritic cells (DCs), macrophages, and lymphocytes. In this article, we describe protocols in which murine PPs are (i) dissociated into single cell suspensions and subjected to flow cytometry and (ii) prepared for cryosectioning and immunostaining. For flow cytometry, PPs are mechanically dissociated and then filtered through 70 &mu;m membranes to generate single cell suspensions free of epithelial cells and large debris. Starting with 20-25 PPs (from four mice), this quick and reproducible method yields a population of &gt;2.5 x 106 cells with &gt;90% cell viability. For cryosectioning, freshly isolated PPs are immersed in Optimal Cutting Temperature (OCT) medium, snap-frozen in liquid nitrogen, and then sectioned using a cryomicrotome. Tissue sections (5-12 &mu;m) are air-dried, fixed with acetone or methanol, and then subjected to immunolabeling.

Isolating And Immunostaining Lymphocytes and Dendritic Cells from Murine Peyer&#039;s Patches

There is an increasing interest in understanding the immunological functions of specific subpopulations of cells in Peyer's patches (PPs), the primary inductive sites of gut-associated lymphoid tissues. Here we outline parallel protocols for preparing PP single cell preparations for flow cytometric analysis and PP cryosections for immunostaining.

マウスのパイエル板のリンパ球や樹状細胞を単離し、免疫染色

Peyer's  patches (PPs) are integral components of the gut-associated lymphoid tissues  (GALT) and play a central role in intestinal immunosurveillance and ...

Accelerated Type 1 Diabetes Induction in Mice by Adoptive Transfer of Diabetogenic CD4+ T Cells

The nonobese diabetic (NOD) mouse spontaneously develops autoimmune diabetes after 12 weeks of age and is the most extensively studied animal model of human Type 1 diabetes (T1D). Cell transfer studies in irradiated recipient mice have established that T cells are pivotal in T1D pathogenesis in this model. We describe herein a simple method to rapidly induce T1D by adoptive transfer of purified, primary CD4+ T cells from pre-diabetic NOD mice transgenic for the islet-specific T cell receptor (TCR) BDC2.5 into NOD.SCID recipient mice. The major advantages of this technique are that isolation and adoptive transfer of diabetogenic T cells can be completed within the same day, irradiation of the recipients is not required, and a high incidence of T1D is elicited within 2 weeks after T cell transfer. Thus, studies of pathogenesis and therapeutic interventions in T1D can proceed at a faster rate than with methods that rely on heterogenous T cell populations or clones derived from diabetic NOD mice.

We provide a reproducible method to induce type 1 diabetes (T1D) in mice within two weeks by the adoptive transfer of islet antigen-specific, primary CD4+ T cells.

糖尿病CD4の養子移入+ T細胞によるマウスの加速された1型糖尿病の誘導

The nonobese diabetic (NOD) mouse spontaneously develops autoimmune diabetes after 12 weeks of age and is the most extensively studied animal model of ...

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

HIV-1 innate sensing requires direct contact of infected CD4+ T cells with plasmacytoid dendritic cells (pDCs). In order to study this process, the protocols described here use freshly isolated human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) or plasmacytoid dendritic cells (pDCs) to sense infections in either T cell line (MT4) or heterologous primary CD4+ T cells. In order to ensure proper sensing, it is essential that PBMC are isolated immediately after blood collection and that optimal percentage of infected T cells are used. Furthermore, multi-parametric flow cytometric staining can be used to confirm that PBMC samples contain the different cell lineages at physiological ratios. A number of controls can also be included to evaluate viability and functionality of pDCs. These include, the presence of specific surface markers, assessing cellular responses to known agonist of Toll-Like Receptors (TLR) pathways, and confirming a lack of spontaneous type-I interferon (IFN) production. In this system, freshly isolated PBMCs or pDCs are co-cultured with HIV-1 infected cells in 96 well plates for 18-22 hr. Supernatants from these co-cultures are then used to determine the levels of bioactive type-I IFNs by monitoring the activation of the ISGF3 pathway in HEK-Blue IFN-&#945;/&#946; cells. Prior and during co-culture conditions, target cells can be subjected to flow cytometric analysis to determine a number of parameters, including the percentage of infected cells, levels of specific surface markers, and differential killing of infected cells. Although, these protocols were initially developed to follow type-I IFN production, they could potentially be used to study other imuno-modulatory molecules released from pDCs and to gain further insight into the molecular mechanisms governing HIV-1 innate sensing.

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Unlike cell-free HIV-1 particles, infected CD4+ T cells are effectively sensed by plasmacytoid dendritic cells (pDCs). This manuscript describes a method where peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) or isolated pDCs are co-cultured with HIV-1 infected T cells to evaluate innate sensing by pDCs as assessed by release of type-I IFN.

HIV-1感染CD4の生得センシングを評価<sup&gt; +</sup&gt;使用して形質細胞様樹状細胞によるT細胞<em&gt;エクスビボ</em&gt;共培養系。

HIV-1 innate sensing requires direct contact of infected CD4+ T cells with plasmacytoid dendritic cells (pDCs). In order to study this process, the ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages and disadvantages. We describe here an experimental colitis model that is initiated by adoptive transfer of syngeneic splenic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipient mice. The CD4+CD45RBhigh T cell population that largely consists of na&#239;ve effector cells is capable of inducing chronic intestinal inflammation, closely resembling key aspects of human IBD. This method can be manipulated to study aspects of disease onset and progression. Additionally it can be used to study the function of innate, adaptive, and regulatory immune cell populations, and the role of environmental exposures, i.e., the microbiota, in intestinal inflammation. In this article we illustrate the methodology for inducing colitis with a step-by-step protocol. This includes a video demonstration of key technical aspects required to successfully develop this murine model of experimental colitis for research purposes.

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Here, we present a protocol to induce colonic inflammation in mice by adoptive transfer of syngeneic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipients. Clinical and histopathological features mimic human inflammatory bowel diseases. This method allows the study of the initiation of colonic inflammation and progression of disease.

エフェクターCD4の養子移入によるマウス腸の炎症の誘導<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt;高い</sup&gt;免疫不全マウスへのT細胞

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

In Vitro Generation of Murine Plasmacytoid Dendritic Cells from Common Lymphoid Progenitors using the AC-6 Feeder System

Plasmacytoid dendritic cells (pDCs) are powerful type I interferon (IFN-I) producing cells that are activated in response to infection or during inflammatory responses. Unfortunately, study of pDC function is hindered by their low frequency in lymphoid organs, and existing methods for in vitro DC generation predominantly favor the production of cDCs over pDCs. Here we present a unique approach to efficiently generate pDCs from common lymphoid progenitors (CLPs) in vitro. Specifically, the protocol described details how to purify CLPs from bone marrow and generate pDCs by coculturing with &#947;-irradiated AC-6 feeder cells in the presence of Flt3 ligand. A unique characteristic of this culture system is that the CLPs migrate underneath the AC-6 cells and become cobblestone area-forming cells, a critical step for expanding pDCs. Morphologically distinct DCs, namely pDCs and cDCs, were generated after approximately 2 weeks with a composition of 70-90% pDCs under optimal conditions. Typically, the number of pDCs generated by this method is roughly 100-fold of the number of CLPs seeded. Therefore, this is a novel system with which to robustly generate the large numbers of pDCs required to facilitate further studies into the development and function of these cells.

In Vitro Generation of Murine Plasmacytoid Dendritic Cells from Common Lymphoid Progenitors using the AC-6 Feeder System

In this study we present an in vitro culture system that can efficiently generate pDCs by co-culturing common lymphoid progenitors with AC-6 feeder cells in the presence of Flt3 ligand.

AC-6フィーダシステムを使用してリンパ球系共通前駆細胞からマウス形質細胞様樹状細胞のインビトロ生成に

Plasmacytoid dendritic cells (pDCs) are powerful type I interferon (IFN-I) producing cells that are activated in response to infection or during ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method enables researchers to better understand the characteristics of a single cell population without the influence of other cells. Compared to other methods of cell enrichment, such as magnetic-activated cell sorting (MCS), FACS is more flexible and accurate for cell separation due to the ability of phenotype detection by flow cytometry. In addition, FACS is usually capable of separating multiple cell populations simultaneously, which improves the efficiency and diversity of experiments. Although FACS has some limitations, it has been broadly used to purify cells for functional studies in both in vitro and in vivo settings. Here we report a protocol using fluorescence-activated cell sorting to isolate a very rare population of immune cells, plasmacytoid dendritic cells (pDC), with high purity from the bone marrow of lupus-prone mice for in vitro functional studies of pDC.

We report a protocol using fluorescence-activated cell sorting to isolate plasmacytoid dendritic cells (pDC) with high purity from the bone marrow of lupus-prone mice for functional studies of pDC.

マウスの骨髄から形質細胞様樹状細胞の精製のために、蛍光活性化細胞選別

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

Generation of Large Numbers of Myeloid Progenitors and Dendritic Cell Precursors from Murine Bone Marrow Using a Novel Cell Sorting Strategy

Cultures of monocyte-derived dendritic cells (moDC) generated from mouse bone marrow using Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor (GM-CSF) have recently been recognized to be more heterogeneous than previously appreciated. These cultures routinely contain moDC as well monocyte-derived macrophages (moMac), and even some less developed cells such as monocytes. The goal of this protocol is to provide a consistent method for identification and separation of the many cell types present in these cultures as they develop, so that their specific functions may be further investigated. The sorting strategy presented here separates cells first into four populations based on expression of Ly6C and CD115, both of which are expressed transiently by cells as they develop in GM-CSF-driven culture. These four populations include Common myeloid progenitors or CMP (Ly6C-, CD115-), granulocyte/macrophage progenitors or GMP (Ly6C+, CD115-), monocytes (Ly6C+, CD115+), and monocyte-derived macrophages or moMac (Ly6C-, CD115+). CD11c is also added to the sorting strategy to distinguish two populations within the Ly6C-, CD115- population: CMP (CD11c-) and moDC (CD11c+). Finally, two populations may be further distinguished within the Ly6C-, CD115+ population based on the level of MHC class II expression. MoMacs express lower levels of MHC class II, while a monocyte-derived DC precursor (moDP) expresses higher MHC class II. This method allows for the reliable isolation of several developmentally distinct populations in numbers sufficient for a variety of functional and developmental analyses. We highlight one such functional readout, the differential responses of these cell types to stimulation with Pathogen-Associated Molecular Patterns (PAMPs).

Here we provide a method for identifying and isolating large numbers of GM-CSF driven myeloid cells using high speed cell sorting. Five distinct populations (Common myeloid progenitors, granulocyte/macrophage progenitors, monocytes, monocyte-derived macrophages, and monocyte-derived DCs) can be identified based on Ly6C and CD115 expression.

大量の骨髄前駆細胞と新規セルソーティング戦略を使用してマウスの骨髄から樹状細胞前駆体の生成

Cultures of monocyte-derived dendritic cells (moDC) generated from mouse bone marrow using Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor (GM-CSF) have ...

Development and Validation of an Ultrasensitive Single Molecule Array Digital Enzyme-linked Immunosorbent Assay for Human Interferon-&#945;

The main aim of this protocol is to describe the development and validation of an interferon (IFN)-&#945; single molecule array digital Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA) assay. This system enables the quantification of human IFN-&#945; protein with unprecedented sensitivity, and with no cross-reactivity for other species of IFN.
The first key step of the protocol is the choice of the antibody pair, followed by the conjugation of the capture antibody to paramagnetic beads, and biotinylation of the detection antibody. Following this step, different parameters such as assay configuration, detector antibody concentration, and buffer composition can be modified until optimum sensitivity is achieved. Finally, specificity and reproducibility of the method are assessed to ensure confidence in the results. Here, we developed an IFN-&#945; single molecule array assay with a limit of detection of 0.69 fg/mL using high-affinity autoantibodies isolated from patients with biallelic mutations in the autoimmune regulator (AIRE) protein causing autoimmune polyendocrinopathy syndrome type 1/autoimmune polyendocrinopathy-candidiasis-ectodermal dystrophy (APS1/APECED). Importantly, these antibodies enabled detection of all 13 IFN-&#945; subtypes.
This new methodology allows the detection and quantification of IFN-&#945; protein in human biological samples at attomolar concentrations for the first time. Such a tool will be highly useful in monitoring the levels of this cytokine in human health and disease states, most particularly infection, autoimmunity, and autoinflammation.

Development and Validation of an Ultrasensitive Single Molecule Array Digital Enzyme-linked Immunosorbent Assay for Human Interferon-&amp;#945;

Here we present a protocol to describe the development and validation of a single molecule array digital ELISA assay, which enables the ultra-sensitive detection of all IFN-&#945; subtypes in human samples.

超高感度単一分子の開発と検証配列人間のインターフェロン-α のデジタルの酵素免疫測定法

The main aim of this protocol is to describe the development and validation of an interferon (IFN)-&#945; single molecule array digital Enzyme-Linked ...

Stereotactic Adoptive Transfer of Cytotoxic Immune Cells in Murine Models of Orthotopic Human Glioblastoma Multiforme Xenografts

Glioblastoma multiforme (GBM), the most frequent and aggressive primary brain cancer in adults, is generally associated with a poor prognosis, and scarce efficient therapies have been proposed over the last decade. Among the promising candidates for designing novel therapeutic strategies, cellular immunotherapies have been targeted to eliminate highly invasive and chemo-radioresistant tumor cells, likely involved in a rapid and fatal relapse of this cancer. Thus, administration(s) of allogeneic GBM-reactive immune cell effectors, such as human V&#978;9V&#948;2 T lymphocytes, in the vicinity of the tumor would represents a unique opportunity to deliver efficient and highly concentrated therapeutic agents directly into the site of brain malignancies. Here, we present a protocol for the preparation and the stereotaxic administration of allogeneic human lymphocytes in immunodeficient mice carrying orthotopic human primary brain tumors. This study provides a preclinical proof-of-concept for both the feasibility and the antitumor efficacy of these cellular immunotherapies that rely on stereotactic injections of allogeneic human lymphocytes within intrabrain tumor beds.

Here, we present a protocol for the preparation and the stereotaxic administration of allogeneic human lymphocytes in immunodeficient mice carrying orthotopic human primary brain tumors. This study provides a proof-of-concept for both the feasibility and the antitumor efficacy of intrabrain-delivered cellular immunotherapies.

同所性同種人間神経膠腫異種移植片のマウスモデルの細胞傷害性免疫細胞の定位の養子転送

Glioblastoma multiforme (GBM), the most frequent and aggressive primary brain cancer in adults, is generally associated with a poor prognosis, and scarce ...