The authors have no acknowledgements.

この研究は、すべての参加センターで地元の治験審査委員会によって承認されました。多施設試験のすべての被験者は、それぞれの機関でeTRISに参加するために書面によるインフォームドコンセントを提供しました。 1.画像の取得<ol><li>このような末梢血管コイル、体マトリクスコイルまたは流出コイルとしてMRVのための専門のフェーズドアレイコイルを用いて、1.5 TまたはT 3全身スキャナーのMRイメージングを実行します。他の体マトリックスコイルや脊椎コイルと一緒にこれらのコイルを使用してください。もし適切な専門のコイルが使用できない場合、代わりにボディコイルを使用しています。 注： などシーメンス交響曲、ソナタ、などの市販のスキャナーを使用してください<ol><li>画面の件名、スキャン前にMRIの安全性に関するアンケートを確認してください。ガウンに被写体の変化を持っています。 </li></ol></li><li>造影剤の注入のための被験者の肘正中静脈に静脈ラインを置きます。標準的な安全PROCに従ってくださいガドリニウムベースの造影剤を注入するためのedures。 </li><li>スキャンする領域上にMRI装置と位置の適切なコイルで仰臥位、足最初の位置に置き対象。必要に応じて、ベルクロストラップを使用したセキュアコイル。 <ol><li> MRIスキャン中にモーションアーチファクトを防ぐために締め被験者の脚/足。 </li><li>センタリングレーザーをオンにして、レーザー梁がちょうど被験者の膝（膝蓋骨）の下に配置されるまで、テーブルを移動します。スキャンのアイソセンタのためのこの位置を受け入れ、スキャナの穴の中心位置に患者テーブルを移動します。 </li></ol></li><li>クレアチニンクリアランス（CRCL）を測定し、体重に基づいて、被検体に使用する造影剤の量を決定します。もしCRCLは&lt;30ミリリットル/分、被験者は研究から除外されています。 CRCL、&gt; 30 ml /分未満で45ミリリットル/分での個人のために、造影剤の0.01ミリモル/ kgで使用されています。 CRCL&gt; 45 ml /分を有する個人が、&lt;60 ml /分、0.02ミリモル/ kgのgadofoのためsvesetが注入されます。正常な腎機能（クレアチニンクリアランス&gt; 60ミリリットル/分）を有する個体は、0.03ミリモル/ kgの用量は、（0.12ミリリットル/ kg）をgadofosveset三ナトリウムが使用されます。 MRI互換パワーインジェクタは、造影剤を注入するために使用されます。 </li><li> 表1に示し、MRIプロトコルの項で説明したように、約60分持続する単一の検査セッションの両方の脚と骨盤下部の二国間の撮影を行います。 注：前の解析のための中心コア研究室への画像の転送に患者データを匿名化。 </li></ol> 2. MRIプロトコル<ol><li>プロトコルウィンドウから各プロトコルステップを選択し、実行リストにドラッグすることで、スキャナコンソールから撮影プロトコルを実行します。準備ができたら、スキャン/実行、または同等のボタンを押してシーケンスを実行します。 </li><li> 2Dグラジエントエコーを取得する中間ふくらはぎの画像には3つの直交軸に、 表1のシーケンスパラメータを使用してベースの配列腸骨稜上およびローカライザ/斥候として使用します。 </li><li> 表1に指定されている各セグメント内のフライト（TOF）血管造影スキャンの時間を実行します 注：これらのスキャンは、長循環する造影剤が、このプロトコルで定常状態で使用されるように、静脈から動脈を区別するために役立つローカライザとして使用されます。動脈樹のこのビューには、非常に限られており、画像のみのアナリストは、静脈血管系から動脈を区別し、本格的な血管造影として機能していない助けるために提供しています。 </li><li>撮像ボリュームの劣ると優れた程度で低品質の画像を取得回避するために、3D T1強調グラディエントエコーのスキャン中10センチメートルによる重複頭部方向に足に3冠状40センチメートルセグメントを取得します。 注：これらの三つのセグメントを包含する：上記膝bにa）の半ばふくらはぎ）膝上は/骨盤下部の太もも、およびc）大腿部/骨盤腹部に1が 3取得場所とサンプル画像を示しています。図示。 </li><li>急性および慢性静脈血栓症を区別するために、T1W直接血栓イメージング（DTHI）および表1のパラメータを使用して3D勾配エコー（GRE）の配列を取得します。 注：これらの3スキャンもMRV取得のための造影前スキャンとして機能します。これらの買収の報道の程度は、図1に示した3つの場所で取得した最初のローカライザと同じです。GRE配列は、様々なスキャンプラットフォーム上と撮像電界強度を横切っても、容易に実現可能です。 </li></ol><img alt="図1" src="/files/ftp_upload/52761/52761fig1.jpg" /> 図1：イメージングのために使用される3駅の取得位置を示すサンプル画像は冠状方向及び軸方向の視野は、各ベッド位置を40 cmであった[取得：（上記の膝に半ばふくらはぎ）、（に膝上記もも/骨盤）、（もも/骨盤<html>各ベッド位置の間に10センチオーバーラップして]）腹部に。 （a）は軸方向の画像を、 （b）はサジタル像及び（c）のコロナル画像を表示します。赤い矢印は、DVTを示す。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52761/52761fig1highres.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、こちらをクリックしてください。</a> <ol start="6"><li> 2ミリリットル/秒の速度で静脈内に被験体への0.03ミリモル/ kgの（0.12ミリリットル/ kg）の用量で造影剤を（gadofosveset三ナトリウム）投与し、生理食塩水20mlで洗浄します。造影剤は、血液プール中で定常状態を確保するために5分間循環してみよう。 </li><li> MRVの画像を取得します。 3場所でポストコントラスト3Dグラジエントエコーシーケンスは、前述しました。 表1と表2のシーケンスパラメータを参照してください。血栓の位置とサイズを決定するために、これらの画像を使用してください。 </li></ol>ファイル/ ftp_upload / 52761 / 52761table1.jpg &quot;/&gt; 表1：直接血栓造影を含む造影剤、gadofosveset三ナトリウム、と下肢のMR静脈造影プロトコル。 <img alt="表2" src="/files/ftp_upload/52761/52761table2.jpg" /> 表2：プロトコルで取得した各配列に特異的な撮影パラメータ。 <ol start="8"><li>スキャンが完了した後、MRIスキャナから対象を削除し、静脈ラインを取り出します。ガウンの外に変更して、機能を終了するには、被写体を確認して下さい。 </li></ol> 3.画像解析<ol><li> 2訓練された画像のアナリストによって、このようなOsiriXのMD 20としてFDAが承認したオープンソースの画像処理ソフトウェアを実行する専用の画像解析ワークステーション上で画像解析を実行します。アナリストが3年以上の経験、それぞれの最小​​値を持っていることを確認します。 </li><li>一時的に画像を転送する前に、すべての画像をブラインド分析のためのアナリストワークステーション。 </li><li>放射線科医は、血栓の存在および位置のための各MRIスキャンを評価することを確認してください。分析を通して、ガイドラインとして使用する画像のアナリストに放射線科医の評価を提供します。 </li><li> 「インポート」を選択することで、画像処理ソフトに、被験者のMRI訪問の両方からすべてのDICOM画像をロードし、時間ポイント間の十分な空間カバレッジと登録を確実にするために各被験者のためのMRVシリーズの2つの撮像時点を比較します。 <ol><li> 3直交ビュー（アキシャル、コロナル、およびサジタル）の画像データの同時ブラウジングを提供するために、ビューアの「3D MPR」ツールを選択します。 注：画像処理ソフトウェアの3D MPRモード​​は、関心のある血管の閲覧を可能にします。 </li></ol></li><li> DVTが存在する場合、次の船を分析：外腸骨、大腿、浅大腿、大腿深、膝窩動脈、前脛骨、後脛骨I＆II、腓腹筋I＆II、およびI＆II静脈腓骨。すべての分析は、両方の時点からの画像内に存在する血管の領域に制限されます。 </li><li> 0-2は、両方のDTHIとMRV配列について分析可能であること解析不可能であると3-5で、0-5スケールで放射線科医の評価によって示されるように知られているDVT各静脈のための画像の品質を評価します。採点システムの内訳については、図2を参照してください。 </li></ol><img alt="図2" src="/files/ftp_upload/52761/52761fig2.jpg" /> 図2：既知のDVTと対象の各静脈のための画像の品質を評価するために使用されるスコアリングシステムの崩壊。 <ol start="7"><li> MRV分析のために、個々の容器を分析します。 3Dは、それぞれの静脈のために湾曲した経路を生成してファイルに保存するには、アナリストによってトレース、各静脈の中心線以下の輪郭を使用し、多断面再構成を湾曲した後、。 <ol><li> 3次元空間内の血栓の位置を確立します。カーブMPR面から、3Dベジエパスが表示されます。 </li><li> 「作成モード」で「輪郭パス」ツールを選択することにより、静脈の中心線を描きます。 </li><li>興味のある容器全体をまっすぐに直交MPRビューのいずれかを繰り返してポイントを置きます。 </li><li>容器は完全に「編集モード」に真っ直ぐされていることを確認する際に必要な調整を行います</li><li>輪郭パスを正確に血管の中心で描写されている場合、ファイルをエクスポートするには、「湾曲した経路」アイコンを選択して保存します</li><li> （ 図3）を湾曲経路に垂直な1ミリメートルの軸方向のスライスを生成し、DICOMファイルとして保存します。湾曲した経路を観察し、血管をまっすぐにし、MRVの画像からDVTを定量化するための軸方向の画像を対応します。 注：3DカーブMPRビューアでレンダリングされた画像は、その後、私をエクスポートする必要がありますnはDICO​​M形式と画像の新シリーズとしてデータベースに追加されました。 </li></ol></li></ol><img alt="図3" src="/files/ftp_upload/52761/52761fig3.jpg" /> 図3：MRV配列に示すサンプルDVT（I、左パネル）湾曲した経路（黄色の線）が分析されている静脈に続く輪郭を示しています。容器分析される（赤い点線）（III、右パネル）の中心線に沿って（II、中央パネル）真っ直ぐ容器は縦断面上の黄色の線（A、B、C）で示される位置で分析される静脈に対して軸スライス垂直示します。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52761/52761fig3highres.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、こちらをクリックしてください。</a> <ol start="7"><li><ol start="7"><li>これらの軸方向のDICOM画像の手動セグメント領域上関心は「閉じた多角形ROIツール」を使用することにより（ 図4参照）、血栓を包含する。 「エクスポートのROIに続く「ROI」ドロップダウンメニューと「プラグイン」メニューに移動して、ROIの測定基準を保存して選択し、「ROIツール」にある「このシリーズのすべてのROIを保存」を選択してファイルに利益の領域を保存します&quot;。これは、CSV形式で保存する必要があります。 </li></ol></li></ol><img alt="図4" src="/files/ftp_upload/52761/52761fig4.jpg" /> 図4：金利（緑）の手動でセグメント化された領域は、軸再フォーマットDICOM画像に血栓を網羅示されている <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52761/52761fig4highres.jpg" target="_blank">。この図の拡大版を表示するには、こちらをクリックしてください。</a> <ol start="7"><li><ol start="8"><li> ARを乗算することにより血栓容積を計算します<html>特注Matlabのスクリプトを使用して、スライス厚（1ミリメートル）によって各分析スライス上EA。各容器内の血栓のボリュームを追加することで、各被験者の総血栓体積を計算します。 </li></ol></li><li> DTHI分析のために、MRVによってセグメントDVT領域内の造影前T1W 3Dグラジエントエコースキャン13の明るい領域として新鮮な血栓を識別します。 <ol><li>軸方向のプレコントラスト画像では、 図5に示すように、手動で関心領域（ROI）を描画することにより、新鮮な血栓の体積を計算する。 図6において、MRV画像と併せてDTHIにより測定DVTを示すサンプル画像が示されています。 </li><li>互いに並んで造影前と造影後のシーケンスを開きます。 「軸」ビューを選択し、「閉じた多角形のROIツール」を使用して、目的の血管に沿って明るい領域を描きます。 </li></ol></li></ol>ES / ftp_upload / 52761 / 52761fig5.jpg &quot;/&gt; 図5：DTHIイメージングシーケンスに示すサンプルDVT（a）のコロナル画像、（b）はアキシャル画像、およびプレコントラスト画像上の目的の（c）の軸方向の画像表示領域（緑）がトレースの周りに新鮮な血栓（青矢印）。 DTHI画像前造影剤の注入を取得し、明るいシグナルを生成するために血栓の満たさヘモグロビン含有量に依存していています。 <img alt="図6" src="/files/ftp_upload/52761/52761fig6.jpg" /> 図6：DTHIイメージングシーケンスに示すサンプルDVT左のパネルは、全DVT（緑の矢印）を示す信号ボイドとMRVの画像を示します。新鮮な血栓（青い矢印）の存在を示す明るい信号にDTHI画像を対応する右のパネルショー。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52761/52761fig6highres.jpg" target="_blank">表示するには、こちらをクリックしてください</a>この図の拡大版。 再現性の評価4。 <ol><li>分析の再現性のための10の被験者のサブセットを評価します。 </li><li>観察者間の変動性を評価するために、2つの別個の画像分析者（一次および二次リーダー）により、上記のように、分析を実行します</li><li>主な読者はまた、3ヶ月の結果のイントラオブザーバーの変動を評価するための第1の分析後の第2の画像解析を行うことを確認してください。 </li><li>イントラクラス相関係数（ICC）を計算し、インターとイントラオブザーバーの再現性を評価するためのブランド·アルトマン分析を行います。ブランド·アルトマン分析にバイアスを探すために1標本t検定を実施しています。 ICC&gt; 0.9およびブランド·アルトマン分析上の無バイアスが許容できると考えています。 </li></ol>

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Venkatesh Mani has received research grants from Novartis. Nadia Alie, Sarayu Ramachandran, Cecilia Besa, Philip Robson and Bachir Taouli have nothing to disclose. Michele Mercuri and Michael Grosso are employees of Daiichi Sankyo. Greg Piazza has received research grants from Daiichi Sankyo, BMS, EKOS, and the Thrombosis Research Institute. Samuel Goldhaber has received grants from BMS, Daiichi Sankyo, EKOS, NHLBI and the Thrombosis Research Institute. He is a consultant for Ariad, Bayer, Boehringer Ingelheim, Bristol Myers Squibb, Daiichi Sankyo, Genentech, Janssen, Merck, Pfizer and Portola. Zahi Fayad has received research grants from Daiichi Sankyo, Roche, GlaxoSmithKline, Merck, VBL Therapeutics, Novartis, Bristol-Myers Squibb, and Via Pharmaceuticals.

この研究は、多施設の設定で血栓容積を定量化するための分析の再現性、コントラスト剤としてgadofosvesetの三ナトリウムを用いたMR静脈造影の深部静脈血栓症の定量化の実現可能性を実証しました。総血栓容積を計算するために、主要な方法は、MRVは、血栓量を測定するために、スキャン後のコントラストを利用しました。使用した二次方法はT1W MR画像13,14に明るいシグナルを生成す?...

静脈血栓塞栓症（VTE）は、毎年1米国では300,000-600,000人に影響を与えます。深部静脈血栓症（DVT）は、VTEの最も一般的なプレゼンテーションで、最も一般的にふくらはぎ、太ももや骨盤の静脈に影響を与えます。この疾患の徴候や症状が2,3非特異的であるため、DVTを有する被験者の診断、管理、およびフォローアップは、もっぱら臨床検査に基づいてすることはできません。 （例えば、Dダイマーなど）の血液検査はDVTの診断を除外することができますが、撮影がDVT 4のプレゼンスを確立するために必要です。圧縮超音波（CUS）は、現在、疑わしい急性DVTの診断において最も一般的に使用される画像化試験です。 CUSは安価であり、急性DVT 5を検出するための高感度かつ特異性を有します。しかし、CUSは確実に骨盤6に深部静脈性を評価することはできません。さらに、CUSは直接betw区別する際に重要である血栓量及び組成を、定量化することはできませんEEN急性DVTと（以下塞栓する可能性が高い）と治療効果7の評価のための慢性DVT（肺塞栓症（PE）の潜在的な供給源）。 コンピュータ断層撮影（CT）、磁気共鳴イメージング（MRI）とは異なり、電離放射線送達し、シリアル試験は、血栓の発生または退行を評価するのに適しているしません。 CUSと比較すると、MRIは、骨盤DVTを検出することができ、より正確に、より良いPEのリスクを評価するために、近位（膝窩静脈と上）とDVT 8（膝窩静脈以下）遠位脚部を定義することができます。 MRIは、血栓の年齢や組織を特徴付けることができ、および慢性DVT 9-11（参考文献が更新された）から急性差別化に役立つことがあります。血栓量、治療する疾患の発生および応答を評価するための重要な測定基準の定量化は、MRイメージングと実現可能です。現在の磁気共鳴静脈造影プロトコールは、ガドリニウム（Gdの）ベースの造影剤12の注入後に行われます。これらの注射後すぐに浸出し、正しく血栓13,14を視覚化するために必要な静脈拡張相を捕捉するために慎重なタイミングを必要とする低分子量分子です。 概念実証研究、エドキサバン血栓削減イメージング研究（eTRIS）は、オープンラベルのデザインを利用して、治療に一日一回エドキサバン60mgを、続いて10日間一日一回エドキサバン90mgのの有効性と安全性を検討しました急性の、症候性DVT（ClinicalTrials.gov識別子：NCT01662908）。 eTRISは、治療開始時に付随する低分子量ヘパリン（LMWヘパリン）なしで、エドキサバンの単独療法かどうかをアドレスからパーセント（％）の変化によって評価されるように、DVTを有する被験者におけるLMWヘパリン/ワルファリン療法による標準治療よりも有効です日14-21時（MRIによって測定される）血栓ボリューム/サイズのベースライン。 eTRISのもう一つの目的は、簡単なMRを開発し、検証することでしたDVTにおける血栓量の定量化のための静脈造影（MRV）の画像取得と解析プロトコル。多設定で現在のMRVプロトコルが直面するいくつかの課題を克服するために、我々は（gadofosveset三ナトリウム）、最近、FDA承認、長期循環、ガドリニウムベースの血液プール造影剤を利用しました。 MRVのための細胞外のGdベースのキレート（ 例えば、Gdの-DTPA）の使用に比べ、gadofosvesetは買収の任意のタイミングなしに、簡単なMR取得スキームの使用を可能にする、かなり長い循環時間を持っています。 Gadofosveset三ナトリウムは、静脈内注射後15,16、2-3時間、循環血液プールMRI造影剤です。その安全性プロファイルは、従来の血管外細胞外MRI造影剤17と同様です。これは、1時間の期間にわたって血管系の定常状態の撮像を可能にします。したがって、画像取得のないオペレータ依存タイミングは、造影剤注入後に必要とされません。付加的利点この造影剤を使用することは、小分子（分子量857 Da）で18であることであるとさえ完全に閉塞血栓の側面に浸透することができ、それにより、MRVの周辺地域からDVTの優れたコントラストを提供し、DVTの定量的な計算を可能にしますボリューム。以前の研究ではgadofosvesetの三ナトリウム19を用いたMRボリューム補間ブレスホールド検査（VIBE）静脈造影を用いて可視化する静脈の評価者間信頼性を確立しています。ここでは、深部静脈血栓症を評価し、エンドポイントとしてMRIで測定DVTのボリュームを使うように設定する多施設臨床試験において同様のアプローチを使用しています。 eTRISはDVTのボリュームを評価するための長期循環のGdベースの血液プール造影剤を使用して、ここで提案MRVイメージングアプローチの分析の実現可能性と再現性を評価するための理想的なプラットフォームを提供します。また、新鮮なDVT前の程度を定量化するために、直接血栓イメージング（DTHI）アプローチの使用を評価します造影剤の注入。 エドキサバン単独療法群またはヘパリン/ワルファリン群、および無作為化後14〜21日の間の第2への無作為化後36時間以内に最初の二つのMRI検査は、研究の過程で行われました。全ての画像の分析は、集中型コア研究所によって行われました。新鮮な血栓の容積は、任意の造影剤の注入前脚と下部骨盤に直接血栓イメージング（DTHI）から計算されます。 （新鮮な古い）総血栓ボリュームは脚と骨盤下部にある静脈のポストコントラスト磁気共鳴静脈造影（MRV）の画像から計算されます。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ablavar (gadofosveset trisodium)</td>
			<td>Lantheus</td>
			<td></td>
			<td>Contrast Agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5T or 3T Scanners</td>
			<td>GE, Siemens, or Phillips</td>
			<td></td>
			<td>GE(Horizon, Signa, Hdx, 750), Siemens (Symphony, Avanto, Sonata, Trio, Aera) or Philips (Intera, Achieva)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a multicenter mri protocol for the evaluation and quantification of deep vein thrombosis

我々は、磁気共鳴静脈造影（MRV）は、急性症候性下肢深部静脈血栓症のヘパリン/ワルファリン療法でエドキサバン単独療法を比較した多施設無作為化試験における治療の有効性のための主要な基準として総血栓体積変化を定量化するgadofosveset（DVTとのアプローチを評価しました）治療。また、新鮮な血栓を定量化する（造影剤を使用せずに、DTHI）直接血栓イメージング法を用いました。それから、多施設試験設定におけるDVTの定量化のための3次元磁気共鳴静脈造影法と直接血栓イメージングを用いた解析手法と適用の再現性を評価しようとしました。エドキサバン血栓削減イメージング研究（eTRIS）に参加する10のランダムに選択科目から、全体の下肢深部静脈系の総血栓ボリュームが左右定量しました。被験者は、（直接T前に3D-T1W勾配エコーシーケンスを使用して画像化しましたhrombusイメージング、DTHI）とgadofosveset三ナトリウム（磁気共鳴静脈造影、MRV）の0.03ミリモル/ kgを注射後5分。対応する軸方向湾曲多平面再フォーマット画像におけるDVTのマージンは、手動静脈血栓の容積測定値を得るために、二人の観察者によって描かれました。 DTHI新鮮な血栓の体積を計算するために使用されたのに対し、MRVは、DVTの総体積を計算するために使用されました。クラス内相関（ICC）およびブランドアルトマン分析は、分析の間およびイントラオブザーバーの変動を比較しました。インターとイントラオブザーバーの変動のためのICCは、MRV画像のブランド - アルトマン解析のバイアスなしで（それぞれ、150および0.98、P &lt;0.001）優れていました。 DTHIイメージの場合、結果は、ブランド·アルトマンプロット上の観察者間の結果のためのバイアスを、（ICC =それぞれ0.88と0.95、P &lt;0.001）、わずかに低かったです。本研究では、良好な細胞内でとで、gadofosveset三ナトリウムとMRVを使用してDVTに血栓量推定の実現可能性を示しました。多設定でターオブザーバー再現。

再現性評価の目的のために、ベースラインとスキャンは別々のケースとしてプールし、分析したフォローアップ。 10のランダムに選択科目（2訪問ずつ）から、MRV手法を用いて同定されたDVTで59隻とDTHIによって識別される新鮮な血栓を持つ29隻がありました。再現性の測定基準について分析し、これらの10のランダムに選択科目のサブセットでは、DVTとの血管が（両方のMRVとDTHI画像の主観的な?...

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A Multicenter MRI Protocol for the Evaluation and Quantification of Deep Vein Thrombosis

The goal of this study is to use magnetic resonance venography with long-circulating gadolinium-based contrast agent and direct thrombus imaging for quantitative evaluation of DVT volume in a multicenter, clinical trial setting. Inter- and intra-observer variability assessments were conducted, and reproducibility of the protocol was determined.

深部静脈血栓症の評価と定量化のための多施設MRIプロトコル

We evaluated a magnetic resonance venography (MRV) approach with gadofosveset to quantify total thrombus volume changes as the principal criterion for ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

17.0K ビュー.  Icahn School of Medicine at Mount Sinai. The goal of this study is to use magnetic resonance venography with long-circulating gadolinium-based contrast agent and direct thrombus imaging for quantitative evaluation of DVT volume in a multicenter, clinical trial setting. Inter- and intra-observer variability assessments were conducted, and reproducibility of the protocol was determined.

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Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the functions of proteins involved in oncogenic progression or help to discover new tumor suppressors. In addition, injecting cancer cells into mice with different genotypes might provide a better understanding of the importance of the stromal compartment. Many models may be useful to investigate certain aspects of disease progression but do not recapitulate the entire cancerous process. In contrast, breast cancer cells engraftment to the mammary fat pad of mice better recapitulates the location of the disease and presence of the proper stromal compartment and therefore better mimics human cancerous disease. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into mice orthotopically and explain how to collect tissues to analyse the tumor milieu and metastasis to distant organs. Using this model, many aspects (growth, angiogenesis, and metastasis) of cancer can be investigated simply by providing a proper environment for tumor cells to grow.

Cancer is a complex disease that is influenced by the tissue surrounding the tumor as well as local pro- and anti-inflammatory mediators. Therefore, orthotropic injection models, rather than subcutaneous models may be useful to study cancer progression in a manner that better mimics human pathology.

腫瘍増殖を研究するためにマウスの乳房脂肪パッド中に乳癌細胞の同所注入。

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

医学

Quantification of the Immunosuppressant Tacrolimus on Dried Blood Spots Using LC-MS/MS

The calcineurin inhibitor tacrolimus is the cornerstone of most immunosuppressive treatment protocols after solid organ transplantation in the United States. Tacrolimus is a narrow therapeutic index drug and as such requires therapeutic drug monitoring and dose adjustment based on its whole blood trough concentrations. To facilitate home therapeutic drug and adherence monitoring, the collection of dried blood spots is an attractive concept. After a finger stick, the patient collects a blood drop on filter paper at home. After the blood is dried, it is mailed to the analytical laboratory where tacrolimus is quantified using high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) in combination with a simple manual protein precipitation step and online column extraction.
For tacrolimus analysis, a 6-mm disc is punched from the saturated center of the blood spot. The blood spot is homogenized using a bullet blender and then proteins are precipitated with methanol/0.2 M ZnSO4 containing the internal standard D2,13C-tacrolimus. After vortexing and centrifugation, 100 &#181;l of supernatant is injected into an online extraction column and washed with 5 ml/min of 0.1 formic acid/acetonitrile (7:3, v:v) for 1 min. Hereafter, the switching valve is activated and the analytes are back-flushed onto the analytical column (and separated using a 0.1% formic acid/acetonitrile gradient). Tacrolimus is quantified in the positive multi reaction mode (MRM) using a tandem mass spectrometer.
The assay is linear from 1 to 50 ng/ml. Inter-assay variability (3.6%-6.1%) and accuracy (91.7%-101.6%) as assessed over 20 days meet acceptance criteria. Average extraction recovery is 95.5%. There are no relevant carry-over, matrix interferences and matrix effects. Tacrolimus is stable in dried blood spots at RT and at +4 &#176;C for 1 week. Extracted samples in the autosampler are stable at +4 &#176;C for at least 72 hr.

Here we describe a high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) assay to quantify the immunosuppressant tacrolimus in dried blood spots using a simple manual protein precipitation step and online column extraction.

LC-MS / MSを用いて乾燥血液スポット上で免疫抑制タクロリムスの定量化

The calcineurin inhibitor tacrolimus is the cornerstone of most immunosuppressive treatment protocols after solid organ transplantation in the United ...

Using Saccadometry with Deep Brain Stimulation to Study Normal and Pathological Brain Function

The oculomotor system involves a large number of brain areas including parts of the basal ganglia, and various neurodegenerative diseases including Parkinson's and Huntington's can disrupt it. People with Parkinson's disease, for example, tend to have increased saccadic latencies. Consequently, the quantitative measurement of saccadic eye movements has received considerable attention as a potential biomarker for neurodegenerative conditions. A lot more can be learned about the brain in both health and disease by observing what happens to eye movements when the function of specific brain areas is perturbed. Deep brain stimulation is a surgical intervention used for the management of a range of neurological conditions including Parkinson's disease, in which stimulating electrodes are placed in specific brain areas including several sites in the basal ganglia. Eye movement measurements can then be made with the stimulator systems both off and on and the results compared. With suitable experimental design, this approach can be used to study the pathophysiology of the disease being treated, the mechanism by which DBS exerts it beneficial effects, and even aspects of normal neurophysiology.

This paper describes the use of quantitative measurement of eye movements in conjunction with stimulation of focal areas of the deep brain in order to study physiology, pathophysiology, and the mechanisms of deep brain stimulation.

正常および病的脳機能を研究するために脳深部刺激でSaccadometryを使用します

The oculomotor system involves a large number of brain areas including parts of the basal ganglia, and various neurodegenerative diseases including ...

In Vivo Evaluation of Fracture Callus Development During Bone Healing in Mice Using an MRI-compatible Osteosynthesis Device for the Mouse Femur

Endochondral fracture healing is a complex process involving the development of fibrous, cartilaginous, and osseous tissue in the fracture callus. The amount of the different tissues in the callus provides important information on the fracture healing progress. Available in vivo techniques to longitudinally monitor the callus tissue development in preclinical fracture-healing studies using small animals include digital radiography and &#181;CT imaging. However, both techniques are only able to distinguish between mineralized and non-mineralized tissue. Consequently, it is impossible to discriminate cartilage from fibrous tissue. In contrast, magnetic resonance imaging (MRI) visualizes anatomical structures based on their water content and might therefore be able to noninvasively identify soft tissue and cartilage in the fracture callus. Here, we report the use of an MRI-compatible external fixator for the mouse femur to allow MRI scans during bone regeneration in mice. The experiments demonstrated that the fixator and a custom-made mounting device allow repetitive MRI scans, thus enabling longitudinal analysis of fracture-callus tissue development.

In Vivo Evaluation of Fracture Callus Development During Bone Healing in Mice Using an MRI-compatible Osteosynthesis Device for the Mouse Femur

The evaluation of tissue development in the fracture callus during endochondral bone healing is essential to monitor the healing process. Here, we report the use of a magnetic resonance imaging (MRI)-compatible external fixator for the mouse femur to allow MRI scans during bone regeneration in mice.

生体内で破壊カルス開発マウス大腿骨の骨、MRI 対応のデバイスを用いたマウスの骨治癒過程の評価

Endochondral fracture healing is a complex process involving the development of fibrous, cartilaginous, and osseous tissue in the fracture callus. The ...

Quantitative [18F]-Naf-PET-MRI Analysis for the Evaluation of Dynamic Bone Turnover in a Patient with Facetogenic Low Back Pain

Imaging techniques that reflect dynamic bone turnover may aid in characterizing a wide range of bone pathologies. Bone is a dynamic tissue undergoing continuous remodeling with the competing activity of osteoblasts, which produce the new bone matrix, and osteoclasts, whose function is to eliminate mineralized bone. [18F]-NaF is a positron emission tomography (PET) radiotracer that enables visualization of bone metabolism. [18F]-NaF is chemically absorbed into hydroxyapatite in the bone matrix by osteoblasts and can thus noninvasively detect osteoblastic activity, which is occult to conventional imaging techniques. Kinetic modeling of dynamic [18F]-NaF-PET data provides detailed quantitative measures of bone metabolism. Conventional semi-quantitative PET data, which utilizes standardized uptake values (SUVs) as a measure of radiotracer activity, is referred to as a static technique due to its snapshot of tracer uptake in time.&#160; Kinetic modeling, however, utilizes dynamic image data where tracer levels are continuously acquired providing tracer uptake temporal resolution. From the kinetic modeling of dynamic data, quantitative values like blood flow and metabolic rate (i.e., potentially informative metrics of tracer dynamics) can be extracted, all with respect to the measured activity in the image data. When combined with dual modality PET-MRI, region-specific kinetic data can be correlated with anatomically registered high-resolution structural and pathologic information afforded by MRI. The goal of this methodological manuscript is to outline detailed techniques for performing and analyzing dynamic [18F]-NaF-PET-MRI data. The lumbar facet joint is a common site of degenerative arthritis disease and a common cause for axial low back pain.&#160; Recent studies suggest [18F]-NaF-PET may serve as a useful biomarker of painful facetogenic disease.&#160; The human lumbar facet joint will, therefore, be used as a prototypical region of interest for dynamic [18F]-NaF-PET-MRI analysis in this manuscript.

Quantitative [18F]-Naf-PET-MRI Analysis for the Evaluation of Dynamic Bone Turnover in a Patient with Facetogenic Low Back Pain

Imaging techniques that reflect dynamic bone turnover may aid in characterizing a wide range of bone pathologies. We present detailed methodologies for performing and analyzing dynamic [18F]-NaF-PET-MRI data in a patient with facetogenic low back pain using the lumbar facet joints as a prototypical region of interest.

顔面性腰痛患者における動的骨回転率の評価に関する定量的[18F]-Naf-PET-MRI分析

Imaging techniques that reflect dynamic bone turnover may aid in characterizing a wide range of bone pathologies. Bone is a dynamic tissue undergoing ...

Quantification of Optic Nerve Cross Sectional Area on MRI: A Novel Protocol using Fiji Software

Optic nerve assessment is an important aspect of glaucoma diagnosis and follow-up. This project describes a protocol for a unified methodology of optic nerve cross-sectional assessment and quantification using 3 T MRI for image acquisition and ImageJ's Fiji software for image processing quantification. Image acquisition was performed using 3 T MRI, with proper instructions for the patient to ensure straight fixation during imaging. A T2-weighted fat suppressed sequence was used. A coronal cut taken 3 mm behind the globe and perpendicular to the optic nerve axis should be uploaded to the software. Using the threshold function, the white matter area of the optic nerve is selected and quantified, thus, eliminating inter-individual measurement bias. We also described the normal limits for the optic nerve cross-sectional area according to age, based on previously published literature. We used the described protocol to assess optic nerve of a suspected glaucoma patient. The optic nerve cross-sectional area was found to be within the normal limits, a finding further confirmed via optical coherence tomography of the optic nerve.

We provided a detailed protocol for a standardized method of optic nerve assessment and quantification using MRI, utilizing a widely available imaging sequence, and open access software for image analysis. Following this standardized protocol would provide meaningful data for comparison between different patients and different studies.

MRIにおける視神経断面領域の定量化:フィジーソフトウェアを用いた新規プロトコル

Optic nerve assessment is an important aspect of glaucoma diagnosis and follow-up. This project describes a protocol for a unified methodology of optic ...

Repetitive Blood Sampling from the Subclavian Vein of Conscious Rat

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to detect drug exposure. The rat blood sampling method determines the quality of the plasma and further affects the precision of the test results. The subclavian vein blood collection method described in this protocol collects blood samples repeatedly in the conscious state of animals to meet the needs of PK and TK tests. The skills of restraint handling and appropriate procedure of needle incision ensure the success rate of blood collection. It is easy to operate while ensuring the quality of plasma and at the same time catering to animal welfare. However, this method requires skilled operation, and an improper one may cause animal weakness, pain, lameness, and even mortality. The current method has been used in the testing facility for a 4-week oral toxicity study in Sprague Dawley (SD) rats with TK. The maximum amount of blood collected within 24 h did not exceed 20% of the animal's total blood. The animals' body weight was more than 200 g for males and females. The data showed that the animals' bodyweight increased steadily every week, and the clinical observation was normal after repetitive sample collection.

The present protocol describes a simple and efficient method for collecting blood from the subclavian vein in rats. It enables rapid, timely, and easily identifiable sampling without anesthesia and obtains high-quality blood through repetitive sample collection.

意識性ラットの鎖骨下静脈からの反復採血

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to ...

A Real-World High-Intensity Interval Training Protocol for Cardiorespiratory Fitness Improvement

High-Intensity Interval Training (HIIT) has emerged as an interesting time-efficient approach to increase exercise adherence and improve health. However, few studies have tested the efficiency of HIIT protocols in a &#34;real world&#34; setting, e.g., HIIT protocols designed for outdoor spaces without specialized equipment. This study presents a &#34;real world&#34; training protocol, named &#34;beep training&#34;, and compares the efficiency of a HIIT regiment versus a traditional long-duration Moderate-Intensity Continuous Training (MICT) regiment using this beep training protocol on VO2 max of overweight untrained men. Twenty-two subjects performed outdoor running with MICT (n = 11) or HIIT (n = 11). Cardiorespiratory fitness was assessed before and after training protocols using a metabolic analyzer. Both training protocols were performed 3 days a week for 8 weeks using the Beep Test results. The MICT group performed the exercise program at 60%-75% of the maximum speed of the 20 m shuttle test (Vmax) and with a progression of the distance of 3,500-5,000 m. The HIIT group performed the interval exercise with 7-10 bouts of 200 m at 85%-100% of the maximum speed of the 20 m shuttle test (Vmax), interspersed with 1 min of passive recovery. Although the HIIT group presented a significantly lower training volume than the MICT group (p &#60; 0.05) after 8 weeks of beep training, HIIT was superior to MICT in improving VO2 max (MICT: ~4.1%; HIIT: ~7.3%; p &#60; 0.05). The &#34;real world&#34; HIIT regiment based on beep training protocol is a time-efficient, low-cost, and easy-to-implement protocol for overweight untrained men.

This study presents a low-cost and easy-to-implement "real world" high-intensity interval training (HIIT) protocol for scientific research and discusses its efficiency for cardiorespiratory fitness.

心肺機能改善のための現実世界の高強度インターバルトレーニングプロトコル

High-Intensity Interval Training (HIIT) has emerged as an interesting time-efficient approach to increase exercise adherence and improve health. However, ...

Establishment and Evaluation of a Porcine Vein Graft Disease Model

Venous graft disease (VGD) is the leading cause of coronary artery bypass graft (CABG) failure. Large animal models of CABG-VGD are needed for the investigation of disease mechanisms and the development of therapeutic strategies. 
To perform the surgery, we enter the cardiac chamber through the third intercostal space and carefully dissect the internal mammary vein and immerse it in normal saline. The right main coronary artery is then treated for ischemia. The target vessel is incised, a shunt plug is placed, and the distal end of the graft vein is anastomosed. The ascending aorta is partially blocked, and the proximal end of the graft vein is anastomosed after perforation. The graft vein is checked for patency, and the proximal right coronary artery is ligated. 
CABG surgery is performed in minipigs to harvest the left internal mammary vein for its use as a vascular graft. Serum biochemical tests are used to evaluate the physiological status of the animals after surgery. Ultrasound examination shows that the proximal, middle, and distal end of the graft vessel are unobstructed. In the surgical model, turbulent blood flow in the graft is observed upon histological examination after the CABG surgery, and venous graft stenosis associated with intimal hyperplasia is observed in the graft. The study here provides detailed surgical procedures for the establishment of a repeatable CABG-induced VGD model.

In this protocol, novel pig vein bypass grafting was performed through a small incision in the left chest wall without cardiopulmonary bypass. A postoperative pathology study was done, which showed intimal thickening.

ブタ静脈移植病モデルの確立と評価

Venous graft disease (VGD) is the leading cause of coronary artery bypass graft (CABG) failure. Large animal models of CABG-VGD are needed for the ...

Point-Of-Care Ultrasound Screening for Proximal Lower Extremity Deep Venous Thrombosis

Acute lower extremity deep venous thrombosis (DVT) is a serious vascular disorder that requires accurate and early diagnosis to prevent life-threatening sequelae. While whole leg compression ultrasound with color and spectral Doppler is commonly performed in radiology and vascular labs, point-of-care ultrasound (POCUS) is becoming more common in the acute care setting. Providers appropriately trained in focused POCUS can perform a rapid bedside examination with high sensitivity and specificity in critically ill patients. This paper describes a simplified yet validated approach to POCUS by describing a three-zone protocol for lower extremity DVT POCUS image acquisition. The protocol explains the steps in obtaining vascular images at six compression points in the lower extremity. Beginning at the level of the proximal thigh and moving distally to the popliteal space, the protocol guides the user through each of the compression points in a stepwise manner: from the common femoral vein to the femoral and deep femoral vein bifurcation, and, finally, to the popliteal vein. Further, a visual aid is provided that may assist providers during real-time image acquisition. The goal in presenting this protocol is to help make proximal lower extremity DVT exams more accessible and efficient for POCUS users at the patient&#39;s bedside.

Traditionally, lower extremity deep venous thrombosis (DVT) is diagnosed by radiology-performed venous duplex ultrasound. Providers appropriately trained in focused point-of-care ultrasound (POCUS) can perform a rapid bedside examination with high sensitivity and specificity in critically ill patients. We describe the scanning technique for focused POCUS DVT lower extremity examination.

近位下肢深部静脈血栓症のためのポイントオブケア超音波スクリーニング

Acute lower extremity deep venous thrombosis (DVT) is a serious vascular disorder that requires accurate and early diagnosis to prevent life-threatening ...

Methods Article

深部静脈血栓症の評価と定量化のための多施設MRIプロトコル