成人再生療法のための機械的微細化

脂肪吸引から間質血管分画(SVF)を得るためにはコラゲラーゼによる消化が必要であり、生物学的汚染のリスクが高まる。コラゲターゼなしでSVFを得るためのより良い方法を開発する必要があります。これらの技術は、単純な機械的プロセスを通じて、そのネイティブの細胞外マトリックスでSVFを得ることを可能にします。

手順をデモンストレーションするのは、私たちの研究室の卒業生であるXihang Chenです。脂肪サンプルを得た後、リポアズパイアを1本の50ミリリットルチューブに移し、収穫した脂肪を10分間平衡化させます。次に、広い先端ピペットを使用して、チューブの最上層から新しい50ミリリットルチューブに脂肪を引き出し、遠心分離によって脂肪を回転させます。

チューブの上層はコールマン脂肪分画です。コールマン脂肪の上の2/3を新しい15ミリリットルチューブに移します。この部分は低密度脂肪と考えられる。

コールマン脂肪の下3分の1を2番目の15ミリリットルチューブに移します。この部分は高密度脂肪と考えられる。低密度脂肪から細胞外マトリックス間質血管画分ゲルを生成するには、女性から女性のルアーロックコネクタに接続された2つの20ミリリットルのシリンジを低密度脂肪の10ミリリットル間間シフトに使用する。

これは、アディポサイトを破壊するための重要なステップです。インターシリンジのシフトが行われる速度と時間は、最終製品の品質に寄与します。最後のシフト間セッションの後、遠心分離によって脂肪を収集し、15ミリリットルのチューブに上部の油層を移します。

次に、粘着性の中中細胞外マトリックス間質血管画分ゲル層を新しい15ミリリットル円錐形チューブに移します。高密度脂肪から細胞外マトリックス間質血管画分ゲルを生成するには、低密度油分率の2ミリリットルを高密度脂肪サンプルの5ミリリットルに加える。エマルション内で凝集が観察されるまで実証したように混合脂肪をシフトする。

遠心分離によってフロクレートを収集し、上部の油層を捨てます。次に、粘着性のある中間層を収集し、低密度細胞外マトリックス間質血管画分ゲルサンプルとこの画分を混合します。コールマン脂肪を細胞外マトリックス間質血管画分ゲルに処理した後、廃棄された油の体積は最終体積の80%を占め、油層の下に保存された脂肪組織の20%だけが細胞外マトリックス間質血管画分ゲルとみなされる。

細胞外マトリックス間質血管画分ゲルは、27ゲージの細かい針を通過することを可能にする滑らかな液体のような質感を有する。しかし、コールマン脂肪は、18ゲージカニューレを通過できる大きな繊維を持つ一体型脂肪構造で構成されています。移植後3日目には、複数の細胞内脂質滴を有する多数の小型の前脂肪細胞、広範な血管結合組織、および浸潤した炎症細胞が多数現れる。

15日目から、炎症細胞の数は徐々に減少し始め、アディポサイトは成熟し始める。90日目までに、移植片の血管化結合組織の大部分は成熟した有数細胞に置き換えられた。細胞外マトリックス間質血管画分ゲル移植片はまた、移植の3日後にいくつかのペリリピン陽性脂肪細胞を含み、小さなサイズの前脂肪細胞を有し、複数の細胞内脂質滴が15日目に出現し始める。

1日90の細胞外マトリックス間質血管画分ゲル移植片切片の各分野は、多数のペリリピン陽性脂肪細胞および新たに形成された血管を示す。フローサイトメトリーは、製品中の細胞集団を決定するために行うことができる。走査電子顕微鏡とは、製品の微細構造を可視化するために行うことができる。

この技術は、外科医および研究者が脂肪組織から天然の細胞外マトリックス繊維を有する高濃度のSVF細胞を有する産物を得るための簡単な方法を提供する。