血栓芽細胞学および濁度アッセイは、血栓の特徴付けのための2つの単純で独特な方法である。これらの手法を組み合わせることで、凝固変数が血栓の特徴に与える影響をより包括的に理解できます。このアッセイの両方は、エンドポイント血栓分析を提供するだけでなく、時間の経過とともにフィブリン血栓形成を誘致するだけでなく、これらの技術は、血栓症患者の線維溶解状態の信頼性の高い診断を提供することができる生理学的に関連する合成血栓プラットフォームの開発に役立つ可能性があり、血栓の濁度を時間の経過とともに監視するために、350〜70ナノメートルの吸収範囲を有する任意の市販の利用可能な分光計を使用する。
分光計をオンにして、対応する解析ソフトウェアを開きます。次に、プレート 1 を選択し、プレート設定タブを開きます。時間の経過に応じ動的な吸光度を監視するには、ABS と運動をクリックします。
波長タブで550ナノメートルを選択し、タイミングタブに切り替え、30秒間隔で合計ランタイムを60分に調整し、それらを強調表示して目的の井戸を選択します。ピペット140マイクロリットルのPBSをUV透過96ウェルプレートの1ウェルに入した。その後、トロンビンと混合の10マイクロリットルを追加し、すぐに50マイクロリットルのフィブリノーゲンをウェルに加えて凝固を開始し、ピペットの最初のストップのみを使用してピペットを5回上下に加え、気泡を作らないように注意します。
プレートホルダにプレートを置き、ソフトウェアで読み取りをクリックして濁度読み取りを開始します。読み取りが終了すると、濁度データを取得し、時間の経過に伴う吸収物の変化をプロットすることによって濁度トレース曲線を取得し、時間の経過とともに曲線の最大吸収率値を取ることによって最大濁度を導き出し、最大濁度を0.9倍にして90%最大濁度を算出する。血栓開始から90%最大濁度までの時間を計算することによって、最大濁りまでの時間を導き出します。
血栓芽細胞検査またはTEGアナライザをオンにし、温度が摂氏37度で安定するのを待ってから、TEGソフトウェアを開き、IDセクションの下に実験名を作成します。TEG タブをクリックし、画面のプロンプトに従って、すべてのチャネルに対して eTest テストを実行します。次に、すべてのチェックが完了したら、レバーをロード位置に戻します。
情報ページで[完了]をクリックし、使用するチャンネルのサンプル情報を入力します。対応するチャネルに透明なコーティングされていない TEG カップを配置します。キャリアを上までスライドさせ、カップ底を5回押してピンをトーションロッドに固定し、キャリアを下げ、クリックするまでカップを下に押し込みます。
ピペット20マイクロリットルのトロンビン溶液をTEGカップに入れ、その後、340マイクロリットルのフィブリノーゲンをカップに加えて凝固を開始し、360マイクロリットルの凝固液を得る。カップの内容物を上下に5回ピペットで混ぜます。カップに積まれたキャリアを上にスライドさせて、レバーを読み取り位置に移動し、ソフトウェアの開始をクリックしてTEG読み取りを開始します。
読み取りが完了したら、パラメーターを取得し、時間の経過に伴う振幅をプロットして TEG トレース 曲線を取得します。ソフトウェアから最大振幅までの時間として血栓歪みとTMAを示す最大振幅としてMAを選択します。異なるフィブリノーゲンレベルでヒトおよびウシフィブリン血栓の代表的な濁度およびTEGトレーシング曲線がここに示されている。
トレーシングカーブは、血栓開始後のラグ期間の後、凝固濁または血栓の振幅が時間の経過とともに増加し、血栓形成の終わりにはずれくなることを示しています。最大濁度および最大濁度までの時間は濁度に由来する2つのパラメータであり、最大振幅および最大振幅までの時間はTEGに由来する。凝固液中のフィブリノーゲンの高いレベルでは、4つの値がすべて増加する。
最大濁度は、フィブリン繊維の厚さとフィブリンネットワーク密度を示す血栓構造の光学的尺度です。最大振幅は絶対的な血栓歪みを反映する機械的な尺度ですが、2つの値を組み合わせることで、血栓の微細構造に関する無料の洞察が得られます。この手順は、主にフィブリン重合に影響を与える変数を調べるための単純化された凝固モデルを示す。
このモデルは他のパラメータを研究するために追加の凝固因子を含めることによってカスタマイズすることができる。凝固モデルは抗血栓薬の存在の血栓形成および幻滅を監視するために臨床血漿サンプルを使用して容易に変更することができる。結果は、患者の治療管理を導くことができる。
