乳酸菌の培養・増殖・生存率:品質管理の視点から

私たちのプロトコルは、品質管理チェックとして純度を保証するため重要です。また、乳酸菌発酵における厳しい発酵性能と収量の一貫性を促進します。この技術の主な利点は、細胞の純度、生存率、機能性を介して乳酸菌の発酵性能を高めることができることです。

この技術はユーザーフレンドリーであり、多くの技術的要件なしに基本的な機器のみを使用するため、誰でも簡単に実行できます。フィリップ・イェボアは私たちの大学院研究助手であり、彼は手順を実演します。まず、乳酸菌またはLAB株の調製したグリセロールストックを、マイナス80°Cの超低温冷凍庫から2ミリリットルの遠沈管に入れます。

使用前に解凍しないでください。遠心管の開口部を70%アルコールで洗浄して消毒し、使用前に穏やかにボルテックスします。約250マイクロリットルのストックLAB培養物を遠心分離管から新鮮な2ミリリットルのMRS試験管にピペットで入れます。

試験管を穏やかにボルテックスし、パラフィルム化し、摂氏42度で12〜16時間一晩嫌気的にインキュベートします。次に、2ミリリットルのMRS試験管から一晩培養した培養物から新鮮な7ミリリットルのMRS試験管に約500マイクロリットルを取り、それらをボルテックスし、摂氏42度で12〜16時間一晩嫌気的にインキュベートします。UV可視分光光度計で610ナノメートルで培養物の光学密度または成長を測定し、0.7〜0.9の許容結果を記録することにより、微生物の増殖を評価します。

7ミリリットルのMRSチューブからMRSおよびMRCMPYR寒天プレートに一晩培養し、摂氏42度で72時間嫌気的にインキュベートします。寒天プレートから単離されたコロニーを選び、それらを新鮮な7ミリリットルのMRS試験管に移し、穏やかにボルテックスし、摂氏42度で12〜16時間一晩嫌気的にインキュベートします。単離した菌株を入れた寒天プレートを4°Cの冷蔵庫で1週間保管する。

次に、610ナノメートルのストリークプレートから分離されたLAB培養の7ミリリットルMRS試験管から光学密度を測定および確認し、関連するすべての実験の作業培養として使用します。9ミリリットルのペプトン水を使用して、最後の7ミリリットルのMRS試験管から成長したLAB培養物の10倍の汚染を行い、1対10の比率を取得します。すべての発酵実験に適した連続妄想から約250マイクロリットルを取り、それらを新鮮な7ミリリットルのMRSブロスに移し、摂氏42度で16時間嫌気的にインキュベートすることにより、菌株を含むブロスを活性化します。

この手順を繰り返して、LAB培養からの生存可能で優れた細胞増殖を確保します。ここでは、品質管理プロトコールを用いて培養したS9及びLB6ラクトバチルス・ブルガリカス株及び品質管理プロトコールなしで培養したS9ラクトバチルス・ブルガリカス株の細胞形態増殖を示す。菌株は三重に縞模様になり、摂氏42度で72時間嫌気的にインキュベートされました。

この手順を試みるときは、相互汚染を防ぐために、冷凍庫からストックカルチャーチューブを70%アルコールで消毒してください。成長培養物の光学密度測定は常に0.7〜0.9の間でなければなりません。このプロトコルに従って、効率的なLAB発酵または培養物の優れた使用によるバイオプロセシング操作を達成することができます。