Organotypic Collagen I Assay: A Malleable Platform to Assess Cell Behaviour in a 3-Dimensional Context

Cell migration is fundamental to many aspects of biology, including development, wound healing, the cellular responses of the immune system, and ...

University of Glasgow

&#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xB2EE;&#xC740; &#xAE30;&#xBCF8; hepatocyte &#xAC04; &#xC140; &#xB77C;&#xC778; &#xD615; &#xAC04;&#xC5FC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC640; hepatocyte &#xD568;&#xC218;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC140; &#xB77C;&#xC778; &#xAC04;&#xC7A5; &#xC885;&#xC591;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xD558; &#xACE0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Hepatocyte&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC04; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778;.

L&iacute;neas de la c&eacute;lula del h&iacute;gado muy parecidas a los hepatocitos primarios son esenciales para la investigaci&oacute;n sobre el virus de la hepatitis y la funci&oacute;n del hepatocito. Actualmente utiliza l&iacute;neas se derivan de los tumores hep&aacute;ticos y han alterado la expresi&oacute;n g&eacute;nica de la c&eacute;lula.

L&iacute;neas de la c&eacute;lula del h&iacute;gado para el estudio de las funciones de los hepatocitos y respuesta inmunol&oacute;gica.

&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EBF;&#x76F8;&#x8FD1;&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x662F;&#x809D;&#x708E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4E0E;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x5F53;&#x524D;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x884C;&#x6D3E;&#x751F;&#x4E8E;&#x809D;&#x80BF;&#x7624;&#x5E76;&#x6539;&#x53D8;&#x4E86;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;

Liver cell lines closely resembling primary hepatocyte are essential for research on hepatitis viruses and hepatocyte function. Currently used cell lines are derived from hepatic tumours and have altered gene expression.

Liver cell lines for the study of hepatocyte functions and immunological response.

Les lign&eacute;es de cellules h&eacute;patiques ressemblant &eacute;troitement &agrave; des h&eacute;patocytes primaires sont essentielles pour la recherche sur le virus de l&#39;h&eacute;patite et de la fonction de l&#39;h&eacute;patocyte. Actuellement utilis&eacute; cell lines sont d&eacute;riv&eacute;es de tumeurs h&eacute;patiques et ont modifi&eacute; l&#39;expression des g&egrave;nes.

Lign&eacute;es de cellules du foie pour l&#39;&eacute;tude des fonctions de l&#39;h&eacute;patocyte et r&eacute;ponse immunologique.

Leber-Zelllinien f&#xFC;r die Untersuchung der Leberzellen Funktionen und immunologische Reaktion hervorrufen.

Linee cellulari del fegato molto somiglianti a epatociti primari sono essenziali per la ricerca sul virus dell&#39;epatite e la funzione degli epatociti. Attualmente usato cella linee derivate da tumori epatici e hanno modificato l&#39;espressione genica.

Linee cellulari del fegato per lo studio delle funzioni degli epatociti e risposta immunologica.

&#x578B;&#x809D;&#x708E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3068;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x5BC6;&#x63A5;&#x4E3B;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x304C;&#x6B20;&#x304B;&#x305B;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x809D;&#x816B;&#x760D;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;&#x5909;&#x5316;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3002;

&#x5BAB;&#x9888;&#x4E0D;&#x5178;&#x578B;&#x589E;&#x751F;&#x662F;&#x764C;&#x524D;&#x75C5;&#x53D8;&#x4E0E;&#x4EBA;&#x4E73;&#x5934;&#x7624;&#x75C5;&#x6BD2; (HPV) &#x611F;&#x67D3;&#xFF0C;&#x4E45;&#x800C;&#x4E45;&#x4E4B;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5C06;&#x764C;&#x75C7;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x4EE5;&#x5F80;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x7F1D;&#x9699;&#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x5BAB;&#x9888;&#x764C;&#x548C;&#x764C;&#x524D;&#x4E0D;&#x5178;&#x578B;&#x589E;&#x751F;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x95F4;&#x9699;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D; 43 &#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x5728;&#x589E;&#x751F;&#x7684;&#x5B50;&#x5BAB;&#x9888;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5176;&#x4ED6;&#x7F1D;&#x9699;&#x6709;&#x6CA1;&#x6709;&#x53D7;&#x5230;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x8868;&#x660E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x4E73;&#x5934;&#x7624;&#x75C5;&#x6BD2;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x76AE;&#x80A4;&#x75A3; &mdash; &mdash; &#x548C;&#x5176;&#x4ED6; hyperproliferative &#x76AE;&#x80A4;&#x6761;&#x4EF6; &mdash; &mdash; &#x67D0;&#x4E9B;&#x7F1D;&#x9699;&#xFF0C;&#x5927;&#x5E45;&#x4E0A;&#x8C03;&#x4E2D;&#x663E;&#x793A;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684; connexin26&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x6267;&#x884C;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x67D3;&#x8272;&#x6297;&#x539F;&#x68C0;&#x7D22;&#x7684;&#x77F3;&#x8721;&#x5305;&#x57CB;&#x7684;&#x5BAB;&#x9888;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6837;&#x672C;&#x540E;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#xFF0C;connexin26 &#x548C; connexin30&#xFF0C;&#x7F1D;&#x9699;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D; 43&#xFF0C;&#x9664;&#x4E86;&#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x9274;&#x522B;&#x6B63;&#x5E38;&#x4EBA;&#x5B50;&#x5BAB;&#x9888;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5728;&#x589E;&#x751F;&#x7684; ectocervix&#xFF0C;&#x6240;&#x6709;&#x7F1D;&#x9699;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D;&#x7814;&#x7A76;&#x663E;&#x793A;&#x76F8;&#x6BD4;&#x76F8;&#x90BB;&#x6B63;&#x5E38;&#x7684;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6781;&#x5176;&#x5DE8;&#x5927;&#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x3002;&#x88AB;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x7F1D;&#x9699;&#x4E2D;&#x89D2;&#x8D28;&#x5F62;&#x6210;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x548C;&#x764C;&#x53D8;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x7B80;&#x5316;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x7F1D;&#x9699;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x5BAB;&#x9888;&#x4E0D;&#x5178;&#x578B;&#x589E;&#x751F;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

Cervical dysplasia is a premalignant lesion associated with human papillomavirus (HPV) infection which, over time, can turn cancerous. Previous studies have indicated that loss of gap junctions may be a feature of cervical cancer and premalignant dysplasia. Loss of the gap junction protein connexin43 has been demonstrated in dysplastic cervix, but other connexins have not been investigated. In contrast we previously showed that HPV-associated cutaneous warts--and other hyperproliferative skin conditions--display a dramatic upregulation of certain connexins, in particular connexin26. By performing immunofluorescence staining after antigen retrieval of paraffin-embedded cervical tissue samples, this study reports for the first time that connexin26 and connexin30, in addition to connexin43, are expressed in differentiating cells of normal human cervical epithelia. Moreover, in dysplastic ectocervix, all connexins studied display a dramatic loss of expression compared to adjacent normal epithelia. The role of connexins in keratinocyte differentiation and carcinogenesis is discussed.

Reduced expression of multiple gap junction proteins is a feature of cervical dysplasia.

Dysplasie du col ut&eacute;rin est une l&eacute;sion premalignant associ&eacute;e &agrave; une infection de virus du papillome humain (VPH) qui, au fil du temps, peut se transformer canc&eacute;reuse. Des &eacute;tudes ant&eacute;rieures ont indiqu&eacute; que la perte de jonctions peut &ecirc;tre une caract&eacute;ristique du cancer du col ut&eacute;rin et dysplasie pr&eacute;canc&eacute;reuses. Perte de la connexin43 de prot&eacute;ine gap junction a &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute;e dans le col de l&#39;ut&eacute;rus dysplasique, mais les autres connexines n&#39;ont pas &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;s. En revanche nous a montr&eacute; que les verrues cutan&eacute;es associ&eacute;es au VPH--et autres HYPERPROLIF&Eacute;RATIVES affections de la peau--pr&eacute;c&eacute;demment affichent une augmentation dramatique de certains connexines, en particulier connexin26. En effectuant l&#39;immunofluorescence souillant apr&egrave;s recherche d&#39;antig&egrave;ne d&#39;&eacute;chantillons de tissus cervicaux paraffine, cette &eacute;tude rend compte pour la premi&egrave;re fois que connexin26 et connexin30, en plus de connexin43, sont exprim&eacute;es dans la diff&eacute;renciation des cellules de l&#39;&eacute;pith&eacute;lium de col de l&#39;ut&eacute;rus humain normal. En outre, dans exocol dysplasique, tous les connexines &eacute;tudi&eacute;s affichent une perte dramatique d&#39;expression par rapport &agrave; adjacent &eacute;pith&eacute;lium normal. On discute du r&ocirc;le des connexines dans la diff&eacute;renciation des k&eacute;ratinocytes et la carcinogen&egrave;se.

R&eacute;duction de l&#39;expression des prot&eacute;ines des jonctions lacunaires multiples est une caract&eacute;ristique de la dysplasie cervicale.

Reduzierte Expression von mehreren Gap Junction-Proteine &#x200B;&#x200B;ist eine Funktion von Dysplasien der Zervix.

Displasia cervicale &egrave; una lesione precancerose associata con infezione da papillomavirus umano (HPV) che, nel tempo, pu&ograve; girare cancerose. Studi precedenti hanno indicato che la perdita di giunzioni di gap pu&ograve; essere una caratteristica del cancro cervicale e precancerose displasia. Perdita della gap junction protein connexin43 &egrave; stata dimostrata in displastica della cervice, ma non sono state indagate altre connexins. In contrasto in precedenza hanno mostrato che le verruche cutanee HPV-associati - e altri iperproliferative della pelle condizioni - visualizziamo una drammatica upregulation di alcuni connexins, in particolare connexin26. Eseguendo immunofluorescenza colorazione dopo il ricupero dell&#39;antigene di campioni paraffina-incastonati del tessuto cervicale, questo studio riporta per la prima volta che connexin26 e connexin30, oltre connexin43, sono espressi nel differenziare le cellule dell&#39;epitelio cervicale umano normale. Inoltre, nella displasia Portio, tutti connexins studiato visualizzare una drammatica perdita di espressione rispetto all&#39;epitelio normale adiacente. Viene discusso il ruolo di connexins nella differenziazione dei cheratinociti e carcinogenesi.

Ridotta espressione delle proteine di giunzione pi&ugrave; divario &egrave; una caratteristica della displasia cervicale.

&#x5B50;&#x5BAE;&#x9838;&#x90E8;&#x7570;&#x5F62;&#x6210;&#x306F;&#x3001;&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x304B;&#x3051;&#x3066;&#x3001;&#x764C;&#x6027;&#x56DE;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x30D2;&#x30C8;&#x30D1;&#x30D4; &#x30ED;&#x30FC;&#x30DE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; (HPV) &#x611F;&#x67D3;&#x306B;&#x4F34;&#x3046;&#x524D;&#x764C;&#x75C5;&#x5909;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x30AE;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x304C;&#x5B50;&#x5BAE;&#x9838;&#x764C;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x524D;&#x764C;&#x7570;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AE;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; connexin43 &#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306F;&#x7570;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x5B50;&#x5BAE;&#x9838;&#x90E8;&#x306E;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x4ED6;&#x30B3;&#x30CD;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x6211;&#x3005; &#x4EE5;&#x524D;&#x76AE;&#x819A;&#x3001;&#x6761;&#x4EF6; &#xFF0D; &#x306B; HPV &#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x76AE;&#x819A;&#x75A3;&#x8D05;--&#x3068;&#x4ED6;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x5287;&#x7684;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x7279;&#x5B9A;&#x30B3;&#x30CD;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E; connexin26 &#x3067;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x86CD;&#x5149;&#x67D3;&#x8272;&#x5F8C;&#x9838;&#x90E8;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x30D1;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x5305;&#x57CB;&#x8A66;&#x6599;&#x306E;&#x6297;&#x539F;&#x691C;&#x7D22;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x521D;&#x3081;&#x3066;&#x305D;&#x306E; connexin26 &#x3068; connexin30&#x3001;connexin43&#x3001;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x5B50;&#x5BAE;&#x9838;&#x90E8;&#x4E0A;&#x76AE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x8868;&#x73FE;&#x306E;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x7570;&#x5F62;&#x6210; ectocervix &#x3067;&#x5B66;&#x3093;&#x3060;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30B3;&#x30CD;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x306B;&#x96A3;&#x63A5;&#x3059;&#x308B;&#x6B63;&#x5E38;&#x4E0A;&#x76AE;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x5F0F;&#x306E;&#x5287;&#x7684;&#x306A;&#x640D;&#x5931;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D2;&#x30C8;&#x30B1;&#x30E9;&#x30C1;&#x30CE; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x767A;&#x304C;&#x3093;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B3;&#x30CD;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30AE;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x5B50;&#x5BAE;&#x9838;&#x90E8;&#x7570;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#xC790; &#xAD81; &#xACBD;&#xBD80; dysplasia &#xC2DC;&#xAC04;&#xC774; &#xC9C0;&#xB0A8;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC554; &#xB3CC; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC778;&#xAC04; &#xC720; &#xB450; &#xC885; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (HPV) &#xAC10;&#xC5FC;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; premalignant &#xBCD1; &#xBCC0;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xAC2D; &#xC811;&#xD569;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4; &#xC790; &#xAD81; &#xACBD;&#xBD80; &#xC554;, premalignant &#xBC1C;&#xC721;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD45C;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAC2D; &#xC815;&#xC158; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; connexin43&#xC758; &#xC190;&#xC2E4; dysplastic &#xC790; &#xAD81; &#xACBD;&#xBD80;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC785;&#xC99D; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB2E4;&#xB978; connexins &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740;. &#xBC18;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC815; connexin26&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC815; connexins&#xC758; &#xADF9;&#xC801;&#xC778; upregulation&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD53C;&#xBD80; &#xC0AC;&#xB9C8;&#xADC0; HPV &#xAD00;&#xB828;-&#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; hyperproliferative &#xD53C;&#xBD80; &#xC870;&#xAC74;-&#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xBA74;&#xC5ED; &#xD615;&#xAD11; &#xAC80;&#xC0AC; &#xC790; &#xAD81; &#xACBD;&#xBD80; &#xC870;&#xC9C1; &#xD30C;&#xB77C;&#xD540; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC758; &#xD56D; &#xC6D0; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xD6C4; &#xC5BC;&#xB8E9;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD558; &#xC5EC;&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBCF4;&#xACE0; &#xCC98;&#xC74C; &#xADF8; connexin26 &#xBC0F; connexin30, connexin43, &#xC774;&#xC678;&#xC5D0; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC790; &#xAD81; &#xACBD;&#xBD80; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, dysplastic ectocervix, &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xB4E0; connexins &#xC778;&#xC811; &#xD55C; &#xC815;&#xC0C1; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC2DD;&#xC758; &#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xC190;&#xC2E4; &#xD45C;&#xC2DC;. Connexins keratinocyte &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xBC0F; &#xBC1C;&#xC554;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC790; &#xAD81; &#xACBD;&#xBD80; dysplasia&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC2D; &#xC815;&#xC158; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAC10;&#xC18C; &#xB41C; &#xC2DD;&#xC774;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Displasia cervical es una lesi&oacute;n premaligna asociada con la infecci&oacute;n del virus del papiloma humano (VPH) que, con el tiempo, puede resultar cancerosa. Estudios previos han indicado que la p&eacute;rdida de uniones comunicantes puede ser una caracter&iacute;stica de displasia premaligna y c&aacute;ncer de cuello uterino. P&eacute;rdida de la brecha cruce prote&iacute;na connexin43 se ha demostrado en cuello uterino displ&aacute;stico, pero no han sido investigados otros conexinas. En cambio previamente demostr&oacute; que las verrugas cut&aacute;neas asociadas a VPH--y otro hyperproliferative condiciones de la piel--disponemos un dram&aacute;tico upregulation de ciertos conexinas, en particular connexin26. Realizando la inmunofluorescencia que manchaba despu&eacute;s de la recuperaci&oacute;n de ant&iacute;geno de las muestras de tejido del cuello uterino parafina, este estudio divulga por primera vez connexin26 y connexin30, adem&aacute;s de connexin43, se expresan en la diferenciaci&oacute;n de las c&eacute;lulas del epitelio cervical humano normal. Por otra parte, en el ectoc&eacute;rvix displ&aacute;stico, todos conexinas estudiadas Mostrar una p&eacute;rdida dram&aacute;tica de expresi&oacute;n comparado con epitelio normal adyacente. Se discute el papel de conexinas en la diferenciaci&oacute;n de los queratinocitos y carcinog&eacute;nesis.

Expresi&oacute;n reducida de m&uacute;ltiples prote&iacute;nas de uni&oacute;n de la brecha es una caracter&iacute;stica de la displasia cervical.

&#x89C2;&#x5BDF;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x5206;&#x5B50;&#x884C;&#x4E3A;&#x671F;&#x95F4;&#x764C;&#x75C7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5165;&#x4FB5;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x4ECD;&#x7136;&#x662F;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x5927;&#x7684;&#x6311;&#x6218;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x6211;&#x4EEC;&#x7406;&#x89E3;&#x8F6C;&#x79FB;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5C55;&#x793A; RhoA &#x6D3B;&#x52A8;&#x5728;&#x80F0;&#x817A;&#x764C;&#x7684;&#x6D3B;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x80F6;&#x7247;&#x97F3;&#x54C1; &#xFF08;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x6210;&#x50CF;&#x663E;&#x5FAE;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;) &#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x9996;&#x6B21;&#x3002;&#x521B;&#x9F20;&#x6807;&#x5728;&#x80F0;&#x817A;&#x5BFC;&#x7BA1;&#x817A;&#x764C; (PDAC) &#x7EC6;&#x80DE;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; p53 &#x7684;&#x9A71;&#x52A8; &#xFF08;p53(R172H))&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x5728;&#x524D;&#x7F18; RhoA &#x6D3B;&#x6027;&#x9AD8;&#x79BB;&#x6563;&#x5206;&#x6570;&#x548C;&#x80CC;&#x9762;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5185;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x5728;&#x4E8C;&#x7EF4;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x517B;&#x3002;&#x503C;&#x5F97;&#x6CE8;&#x610F;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x6C60;&#x7684;&#x79EF;&#x6781; RhoA &#x6CA1;&#x65E0;&#x521B; p53(fl) &#x6316;&#x7A7A; PDAC &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5173;&#x8054;&#x5176;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x5DEE;&#x521B;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; dasatanib&#xFF0C;&#x4E34;&#x5E8A;&#x4E0A;&#x6838;&#x51C6;&#x7684;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x4FB5;&#x88AD;&#x4EE3;&#x7406;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x5904;&#x4E8E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#xFF0C;&#x5728;&#x6B64;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x4E86;&#x8BF4;&#x660E;&#x7A7A;&#x95F4;&#x8C03;&#x8282; RhoA &#x529F;&#x80FD;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3002;Dasatanib &#x6291;&#x5236; RhoA &#x5728; p53(R172H) &#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5185;&#x4E24;&#x6781;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6548;&#x679C;&#x662F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x57FA;&#x5E95; RhoA &#x6D3B;&#x52A8;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x5B9A;&#x91CF;&#x4F53;&#x5185;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x6210;&#x50CF;&#x6240;&#x793A; RhoA &#x4E0D;&#x4EC5;&#x662F;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684;&#x5165;&#x4FB5;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E14;&#x8FD8;&#x8BE5;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE; RhoA &#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x5176;&#x5168;&#x7403;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x7A7A;&#x95F4;&#x89C4;&#x4F8B;&#xFF0C;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x63A7;&#x5236;&#x5165;&#x4FB5;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x63ED;&#x793A;&#x7684;&#x80F6;&#x7247;&#x70E6;&#x607C;&#x5B9E;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x5728;&#x836F;&#x7269;&#x6CBB;&#x7597;&#x4E2D;&#x751F;&#x6D3B;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#xFF0C;&#x5206;&#x6790;&#x52A8;&#x6001;&#x751F;&#x7269;&#x6807;&#x5FD7;&#x7269;&#x548C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x663E;&#x793A;&#x5982;&#x4F55;&#x79BB;&#x6563;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x5206;&#x5B50;&#x6C60;&#x53EF;&#x80FD;&#x5DEE;&#x5F02;&#x64CD;&#x7EB5;&#x7684;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x4FB5;&#x88AD;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x524D;&#x666F;&#x3002;

&#x7A7A;&#x95F4;&#x9A71;&#x52A8;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; p53 &#x7684;&#x80F0;&#x817A;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5165;&#x4FB5;&#x671F;&#x95F4;&#x8C03;&#x8282; RhoA &#x6D3B;&#x6027;&#x3002;

The ability to observe changes in molecular behavior during cancer cell invasion in vivo remains a major challenge to our understanding of the metastatic process. Here, we demonstrate for the first time, an analysis of RhoA activity at a subcellular level using FLIM-FRET (fluorescence lifetime imaging microscopy-fluorescence resonance energy transfer) imaging in a live animal model of pancreatic cancer. In invasive mouse pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) cells driven by mutant p53 (p53(R172H)), we observed a discrete fraction of high RhoA activity at both the leading edge and rear of cells in vivo which was absent in two-dimensional in vitro cultures. Notably, this pool of active RhoA was absent in noninvasive p53(fl) knockout PDAC cells, correlating with their poor invasive potential in vivo. We used dasatanib, a clinically approved anti-invasive agent that is active in this model, to illustrate the functional importance of spatially regulated RhoA. Dasatanib inhibited the activity of RhoA at the poles of p53(R172H) cells in vivo and this effect was independent of basal RhoA activity within the cell body. Taken together, quantitative in vivo fluorescence lifetime imaging illustrated that RhoA is not only necessary for invasion, but also that subcellular spatial regulation of RhoA activity, as opposed to its global activity, is likely to govern invasion efficiency in vivo. Our findings reveal the utility of FLIM-FRET in analyzing dynamic biomarkers during drug treatment in living animals, and they also show how discrete intracellular molecular pools might be differentially manipulated by future anti-invasive therapies.

Spatial regulation of RhoA activity during pancreatic cancer cell invasion driven by mutant p53.

La capacit&#xE9; &#xE0; observer des changements dans le comportement mol&#xE9;culaire lors de l&#x26;#39;invasion des cellules canc&#xE9;reuses in vivo reste un d&#xE9;fi majeur pour notre compr&#xE9;hension du processus m&#xE9;tastatique. Ici, nous d&#xE9;montrons pour la premi&#xE8;re fois, une analyse de l&#x26;#39;activit&#xE9; de RhoA &#xE0; un niveau subcellulaire utilisant FLIM-FRET (fluorescence imagerie par microscopie de fluorescence &#xE0; vie Resonance Energy Transfer) d&#x26;#39;imagerie dans un mod&#xE8;le animal vivant d&#x26;#39;un cancer du pancr&#xE9;as. En envahissantes souris pancr&#xE9;atiques canalaires ad&#xE9;nocarcinome (PDAC) entra&#xEE;n&#xE9;s par les cellules p53 mutante (p53 (R172H)), nous avons observ&#xE9; une fraction discr&#xE8;te de RhoA de haute activit&#xE9; &#xE0; la fois l&#x26;#39;avant-garde et &#xE0; l&#x26;#39;arri&#xE8;re des cellules in vivo, qui &#xE9;tait absent en deux dimensions in vitro cultures. Notamment, ce bassin de RhoA actif &#xE9;tait absent dans p53 non invasive (fl) des cellules knock-out PDAC, en corr&#xE9;lation avec leur potentiel invasif in vivo les pauvres. Nous avons utilis&#xE9; dasatanib, une clinique a approuv&#xE9; un agent anti-invasif qui est actif dans ce mod&#xE8;le, pour illustrer l&#x26;#39;importance fonctionnelle de RhoA dans l&#x26;#39;espace r&#xE9;glement&#xE9;. Dasatanib inhib&#xE9; l&#x26;#39;activit&#xE9; de RhoA dans les p&#xF4;les de p53 (R172H) des cellules in vivo et cet effet &#xE9;tait ind&#xE9;pendant de l&#x26;#39;activit&#xE9; basale RhoA dans le corps de la cellule. Pris dans leur ensemble, quantitative l&#x26;#39;imagerie in vivo de vie de fluorescence montr&#xE9; que RhoA est non seulement n&#xE9;cessaire pour l&#x26;#39;invasion, mais aussi que la r&#xE9;glementation subcellulaire spatiale de l&#x26;#39;activit&#xE9; de RhoA, par opposition &#xE0; son activit&#xE9; globale, est susceptible de r&#xE9;gir l&#x26;#39;efficacit&#xE9; in vivo l&#x26;#39;invasion. Nos r&#xE9;sultats r&#xE9;v&#xE8;lent l&#x26;#39;utilit&#xE9; de FLIM-FRET dans l&#x26;#39;analyse de biomarqueurs dynamiques pendant le traitement chez les animaux vivants, et ils montrent aussi comment discrets intracellulaires piscines mol&#xE9;culaires pourraient &#xEA;tre diff&#xE9;rentiellement manipul&#xE9; par les futures th&#xE9;rapies anti-invasifs.

R&#xE8;glement spatiale de l&#x26;#39;activit&#xE9; de RhoA Pendant l&#x26;#39;invasion des cellules cancer du pancr&#xE9;as Pouss&#xE9; par la p53 mutante

Die M&ouml;glichkeit, &Auml;nderungen im molekularen Verhalten w&auml;hrend Krebs Zelle Invasion in-vivo zu beobachten bleibt eine gro&szlig;e Herausforderung f&uuml;r unser Verst&auml;ndnis des metastasierenden Prozesses. Hier zeigen wir zum ersten Mal, eine Analyse der RhoA Aktivit&auml;t auf eine subzellul&auml;re Ebene mithilfe von FLIM-FRET (Fluoreszenz Lifetime imaging Mikroskopie-Fluoreszenz-Resonanz-Energie-Transfer) Bildgebung in einem Leben Tiermodell von Bauchspeicheldr&uuml;senkrebs. Invasive Maus Zellen pankreatische duktale Adenokarzinom (PDAC) getrieben von mutierten p53 (p53(R172H)), wir beobachteten eine diskrete Bruchteil der hohe RhoA-Aktivit&auml;t an der Spitze und hinten von Zellen in-vivo die abwesend war in zweidimensionalen in-vitro-Kulturen. Vor allem, diesen Pool an aktiven RhoA fehlte in nicht-invasive p53(fl) k.o. PDAC Zellen, Korrelation mit ihren Armen invasive Potential in-vivo. Wir verwendeten Dasatanib, einen klinisch zugelassenen anti-invasive Agent, der in diesem Modell die funktionelle Bedeutung des r&auml;umlich geregelten RhoA veranschaulichen aktiv ist. Dasatanib gehemmt die Aktivit&auml;t von RhoA an den Polen der p53(R172H) Zellen in-vivo und dieser Effekt war unabh&auml;ngig von basalen RhoA-Aktivit&auml;t innerhalb der Zelle K&ouml;rper. Zusammengenommen, quantitative in Vivo illustriert Fluoreszenz-Lebensdauer-Bildgebung, dass RhoA ist nicht nur notwendig f&uuml;r Invasion, sondern auch subzellulare r&auml;umliche Verordnung RhoA Aktivit&auml;t, im Gegensatz zu ihrer weltweiten T&auml;tigkeit, ist wahrscheinlich zu regieren Einmarsch Effizienz in-vivo. Unsere Ergebnisse zeigen den Nutzen der FLIM-Bund bei der Analyse von dynamischen Biomarker w&auml;hrend medikament&ouml;se Behandlung bei lebenden Tieren, und sie zeigen auch wie diskrete intrazellul&auml;re Molekulare Becken k&ouml;nnte durch zuk&uuml;nftige anti-invasive Therapien differentiell manipuliert werden.

R&auml;umliche Regelung der RhoA T&auml;tigkeit w&auml;hrend Bauchspeicheldr&uuml;senkrebs Zelle Invasion von mutierten p53 getrieben.

La capacit&agrave; di osservare i cambiamenti nel comportamento molecolare durante l&#39;invasione delle cellule di cancro in vivo rimane una sfida importante per la nostra comprensione del processo metastatico. Qui, noi dimostrare per la prima volta, un&#39;analisi dell&#39;attivit&agrave; di RhoA a livello subcellulare utilizzando FLIM-FRET imaging (vita di fluorescenza imaging microscopia di fluorescenza resonance energy transfer) in un modello animale diretta del cancro del pancreas. In mouse invasivo adenocarcinoma pancreatico duttale (PDAC) cellule guidato da p53 mutante (p53(R172H)), abbiamo osservato una discreta frazione di alta attivit&agrave; RhoA leading edge e posteriore delle cellule in vivo, che era assente in colture in vitro bidimensionale. In particolare, questo pool di RhoA attivo era assente in cellule di PDAC ko p53(fl) non invasiva, correlazione con la loro scarsa potenzialit&agrave; invasiva in vivo. Abbiamo usato dasatanib, un agente anti-invasive clinicamente che &egrave; attivo in questo modello, per illustrare l&#39;importanza funzionale di RhoA spazialmente regolamentato. Dasatanib inibito l&#39;attivit&agrave; di RhoA ai poli del p53(R172H) cellule in vivo e questo effetto &egrave; stato indipendente del basale RhoA attivit&agrave; all&#39;interno del corpo cellulare. Presi insieme, quantitativa in vivo imaging di vita di fluorescenza illustrato che RhoA &egrave; non solo necessario per invasione, ma anche quello sottocellulare regolamento spaziale di attivit&agrave; RhoA, in contrasto con la sua attivit&agrave; globale, &egrave; probabile che governano l&#39;efficienza di invasione in vivo. I nostri risultati rivelano l&#39;utilit&agrave; dei FLIM-FRET nell&#39;analizzare i biomarcatori dinamici durante il trattamento farmacologico in animali viventi, e mostrano anche come discrete piscine molecolare intracellulare potrebbe essere manipolato differenzialmente da terapie future anti-invasive.

Regolamento spaziale di RhoA attivit&agrave; durante invasione di cellule cancro al pancreas guidato da p53 mutante.

in vivo&#x3067;&#x306E;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D78;&#x6F64;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x6319;&#x52D5;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x306F;&#x3001;&#x8EE2;&#x79FB;&#x904E;&#x7A0B;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x3078;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x8AB2;&#x984C;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x81B5;&#x81D3;&#x764C;&#x306E;&#x751F;&#x304D;&#x305F;&#x52D5;&#x7269;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;FLIM-FRET&#xFF08;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#xFF09;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;RhoA&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x521D;&#x3081;&#x3066;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5909;&#x7570;&#x578B;p53&#xFF08;p53&#x306E;&#xFF08;R172H&#xFF09;&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x99C6;&#x52D5;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x4F4E;&#x4FB5;&#x8972;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x81B5;&#x7BA1;&#x817A;&#x764C;&#xFF08;PDAC&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;in vitro&#x3067;&#x4E8C;&#x6B21;&#x5143;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5148;&#x5C0E;&#x7AEF;&#x3068;&#x5F8C;&#x90E8;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x9AD8;&#x3044;RhoA&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x96E2;&#x6563;&#x7684;&#x306A;&#x5272;&#x5408;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x6587;&#x5316;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;RhoA&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8CA7;&#x3057;&#x3044;&#x4FB5;&#x8972;&#x6027;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x3001;&#x975E;&#x4FB5;&#x8972;&#x7684;&#x306A;p53&#x306E;&#xFF08;&#x30D5;&#x30ED;&#x30EA;&#x30C0;&#x5DDE;&#xFF09;&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;PDAC&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306B;&#x8ABF;&#x7BC0;RhoA&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;dasatanib&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x306B;&#x627F;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6297;&#x6D78;&#x6F64;&#x5264;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; Dasatanib&#x306F;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x306E;p53&#x306E;&#x6975;&#xFF08;R172H&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;RhoA&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x672C;&#x4F53;&#x5185;&#x306E;&#x57FA;&#x5E95;RhoA&#x6D3B;&#x6027;&#x3068;&#x306F;&#x7121;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x306F;&#x3001;RhoA&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x4FB5;&#x7565;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x306A;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306B;&#x53CD;&#x5BFE;&#x3057;RhoA&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x305D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306A;&#x898F;&#x5236;&#x306F;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x4FB5;&#x5165;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x652F;&#x914D;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4ECA;&#x56DE;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x304D;&#x305F;&#x52D5;&#x7269;&#x3067;&#x306E;&#x85AC;&#x7269;&#x6CBB;&#x7642;&#x4E2D;&#x306B;&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;FLIM-FRET&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x96E2;&#x6563;&#x7684;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x5DEE;&#x4ECA;&#x5F8C;&#x306E;&#x6297;&#x4F4E;&#x4FB5;&#x8972;&#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5909;&#x7570;&#x578B;p53&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x99C6;&#x52D5;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x81B5;&#x81D3;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D78;&#x6F64;&#x6642;&#x306E;RhoA&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306A;&#x898F;&#x5236;

&#xBCC0;&#xACBD; &#xB0B4;&#xC6A9;&#xC744; &#xAD00;&#xCC30; &#xBD84;&#xC790; &#xD589;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC; &#xCE68;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xB2A5;&#xB825; &#xC804;&#xC774;&#xC131; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC8FC;&#xC694; &#xB3C4;&#xC804; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCC98;&#xC74C; subcellular &#xC218;&#xC900;&#xC758; FLIM &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; (&#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;) &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCDCC;&#xC7A5;&#xC554;&#xC758; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; RhoA &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCE68;&#xB7B5; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xCDCC; &#xC7A5; ductal &#xC120; (PDAC) &#xC554; &#xC138;&#xD3EC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; p53&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD6C;&#xB3D9; (p53(R172H)), &#xC55E; &#xAC00;&#xC7A5;&#xC790;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB192;&#xC740; RhoA &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xBD84;&#xC218; &#xBC0F; &#xACB0; &#xC11D; &#xD558;&#xB294; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC140;&#xC758; &#xD6C4;&#xBA74; &#xAD00;&#xCC30; 2 &#xCC28;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xC678; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C;. &#xD65C;&#xC131; Rhoa&#xC774;&#xC774; &#xD480; &#xACB0; &#xC11D; &#xD588;&#xB2E4; &#xD2B9;&#xD788;, vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBD88; &#xC30D; &#xD55C; &#xCE68;&#xB7B5; &#xC801; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xACFC; &#xBE44; &#xCE68; &#xD22C; &#xC801;&#xC778; p53(fl) &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; PDAC &#xC140;&#xC5D0;. Dasatanib, &#xACF5;&#xAC04;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; Rhoa&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574;&#xC774; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xB294; &#xC784;&#xC0C1; &#xC2B9;&#xC778;&#xB41C; anti-invasive &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Dasatanib p53(R172H) &#xC140; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; Rhoa&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC800;&#xD574; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC140; &#xBCF8;&#xBB38; &#xB0B4; &#xAE30;&#xC800; RhoA &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xB3C5;&#xB9BD; &#xD588;&#xB2E4;. Vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC591;&#xC801; &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740; &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC77C;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD2B8; RhoA, &#xCE68;&#xACF5;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC18;&#xB300;&#xB85C; RhoA &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; subcellular &#xACF5;&#xAC04; &#xADDC;&#xC815;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;, &#xCE68;&#xACF5; &#xD6A8;&#xC728; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C0;&#xBC30; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xB192;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC57D;&#xBB3C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xB3D9;&#xC801; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; FLIM-&#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xBD84;&#xC790; &#xD480; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xCC28;&#xB3D9; &#xBBF8;&#xB798; anti-invasive &#xC694;&#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC870;&#xC791; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCDCC;&#xC7A5;&#xC554; &#xC138;&#xD3EC; &#xCE68;&#xACF5; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; p53&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD6C;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; RhoA &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801; &#xADDC;&#xC815;.

La capacidad de observar los cambios en el comportamiento molecular durante la invasi&#xF3;n de las c&#xE9;lulas cancerosas in vivo sigue siendo un reto importante para nuestra comprensi&#xF3;n del proceso metast&#xE1;sico. En este caso, hemos demostrado por primera vez, un an&#xE1;lisis de la actividad de RhoA a nivel subcelular utilizando Flim-FRET (microscop&#xED;a de fluorescencia de imagen de por vida-resonancia de fluorescencia la transferencia de energ&#xED;a) de im&#xE1;genes en un modelo animal en vivo de c&#xE1;ncer de p&#xE1;ncreas. En invasoras rat&#xF3;n de adenocarcinoma pancre&#xE1;tico ductal (PDAC) impulsados &#x200B;&#x200B;por c&#xE9;lulas mutantes de p53 (p53 (R172H)), se observ&#xF3; una fracci&#xF3;n discreta de alta actividad de RhoA, tanto en el borde delantero y trasero de las c&#xE9;lulas in vivo que estuvo ausente en dos dimensiones in vitro culturas. En particular, este grupo de activos RhoA estuvo ausente en p53 no invasiva (FL), las c&#xE9;lulas knockout PDAC, en correlaci&#xF3;n con su potencial pobres invasiva in vivo. Se utiliz&#xF3; dasatanib, una cl&#xED;nica aprobada anti-invasiva agente que est&#xE1; activa en este modelo, para ilustrar la importancia funcional de RhoA espacialmente regulado. Dasatanib inhiben la actividad de RhoA en los polos de p53 (R172H) las c&#xE9;lulas in vivo, y este efecto fue independiente de la actividad de RhoA basal dentro del cuerpo celular. Tomados en conjunto, cuantitativo de im&#xE1;genes in vivo de fluorescencia vida ilustra que RhoA no s&#xF3;lo es necesaria para la invasi&#xF3;n, sino tambi&#xE9;n que la regulaci&#xF3;n subcelular espacial de la actividad de RhoA, en oposici&#xF3;n a su actividad global, es probable que gobiernan la eficiencia invasi&#xF3;n in vivo. Nuestros resultados ponen de manifiesto la utilidad de Flim-FRET en el an&#xE1;lisis de biomarcadores din&#xE1;micos durante el tratamiento de drogas en animales vivos, y tambi&#xE9;n mostrar c&#xF3;mo discretos piscinas moleculares intracelulares podr&#xED;a ser diferente manipulados por el futuro de lucha contra la invasi&#xF3;n terapias.

Mike Edward

Section of Dermatology,
School of Medicine,
Section of Dermatology, School of Medicine

University of Glasgow

Organotypic Collagen I Assay: A Malleable Platform to Assess Cell Behaviour in a 3-Dimensional Context

Mike Edward

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University of Glasgow

Organotypic Collagen I Assay: A Malleable Platform to Assess Cell Behaviour in a 3-Dimensional Context

Section of Dermatology,
School of Medicine,
Section of Dermatology, School of Medicine