5-Bromo-2'-Deoxyuridine (BrdU) Labeling of Mitochondrial DNA in HeLa Cells

미토콘드리아 표지를 시작하기 위해 10% 소 태아 혈청 또는 FBS와 함께 DMEM에서 BrdU의 20마이크로몰 용액을 준비합니다. 그런 다음 미토콘드리아 추적 염료를 추가하여 최종 농도를 1.1마이크로몰로 조정합니다. 15시간 후, 10 마이크로리터의 미토콘드리아 추적 염료 용액을 웰을 함유하는 헬라 세포 현탁액에 첨가한다.

세포를 1시간 동안 배양한다. 새로 합성된 DNA 분자를 BrdU로 표지하는 데 사용되는 조건은 HeLa 세포의 미토콘드리아에서 BrdU 표지된 DNA의 검출을 가능하게 했습니다. 항-BrdU 항체로 얻은 신호는 특이적이었고 BrdU로 처리된 세포에서만 관찰되었습니다.

BrdU 처리에 관계없이, 제로 행 세포의 미토콘드리아에서 항 BrdU 또는 항 DNA 항체 신호는 검출되지 않았다. 항-BrdU 항체로부터의 형광 신호를 정량화한 결과, BrdU로 처리된 로우 제로 세포는 BrdU로 처리되지 않은 세포와 동일한 낮은 수준의 형광을 보인 반면, 모 라인 A549 및 HeLa에 대한 신호는 50배 더 높았다.