Microfluidic Shear Apparatus Setup for Single-Cell Fluid Shear Assay

전단 분석 점성 유동 매체를 준비하여 프로토콜을 시작합니다. 이렇게 하려면 자기 교반 또는 핫 플레이트를 사용하여 섭씨 60-70도에서 약 10-20분 동안 기본 배양 배지를 예열합니다. 매체를 지속적으로 교반하면서 메틸셀룰로오스를 부드럽게 첨가하여 메틸셀룰로오스 입자가 응고되지 않고 빠르게 분산되도록 합니다.

이 과정을 약 15-24시간 동안 계속하여 배지와 셀룰로오스의 투명하고 균질한 혼합을 보장합니다. 전단 장치를 설정하려면 고무 개스킷을 유로에 부착하여 유동 챔버와 페트리 접시 사이의 연결을 고정하고 단일 셀의 제어된 균일한 흐름을 보장합니다. 고무 개스킷은 원하는 유량 프로파일과 관찰 영역에 따라 다양한 크기로 제공됩니다.

다음으로, 점성 배양 배지의 주입 및 회수를 위해 프로그래밍 가능한 주사기 펌프에 연결된 60 또는 100 밀리리터 이중 주사기로 구성된 전단 분석 시스템을 설정합니다. 준비된 점성 유동 매체로 주사기를 채우고 채워진 주사기를 주사기 펌프의 해당 위치에 부착합니다. 그런 다음 빈 주사기를 주사기 펌프의 다른 주사기 위치에 부착합니다.

1/16인치 튜빙 및 튜빙 커넥터를 사용하여 두 주사기를 플로우 챔버에 연결합니다. 지정된 속도로 일정량의 유체를 주입 및 배출하도록 펌프를 프로그래밍하고 해당 주사기를 선택합니다. 예제 프로그램이 화면에 표시됩니다.

전단을 준비하기 위해 페트리 접시에서 세포 배양 배지를 흡인합니다. 다음으로, 고무 개스킷이 있는 유동 챔버를 부착된 셀이 들어 있는 페트리 접시에 삽입하고 고정합니다. 접시에 세포가 있는 장착된 미세유체 유동 챔버를 디스플레이 모니터에 연결된 도립 현미경에 놓습니다.

이제 단일 셀에 유체 전단 응력을 가하고 그에 따른 세포 변형을 광학적으로 모니터링할 준비가 되었습니다.