멸균 PBS에서 Anopheles 모기의 번데기에서 최소 20개의 고환을 절제하는 것으로 시작합니다. 고환을 PBS의 신선한 한 방울이 들어 있는 깨끗한 현미경 슬라이드로 옮깁니다. P1000 보드 여과 팁 또는 해부 바늘 팁을 사용하여 PBST에 3.7% 포름알데히드가 포함된 배아 접시에 고환을 옮깁니다.
실온에서 10분간 배양합니다. 그런 다음 PBST에서 고환을 실온에서 5분 동안 세척합니다. RNase A가 들어 있는 배아 접시에 고환을 옮기고 섭씨 37도에서 30분 동안 배양합니다.
RNA 용액을 제거하고 침투 용액 1mL를 추가합니다. 침투 용액에 고환을 실온에서 10분 동안 배양합니다. 그런 다음 고환과 PBST를 각각 5분씩 두 번씩 씻습니다.
표지된 DNA 프로브를 사용하여 20 내지 30 마이크로리터의 혼성화 용액을 함유하는 1.5 밀리리터 튜브에 고환을 옮긴다. 혼잡을 허용하기 위해 어둠 속에서 섭씨 37도에서 밤새 혼합물을 배양합니다. AP 1000 화이트 보어 필터 팁을 사용하여 고환을 배아 접시에 옮긴 다음 두 개의 XSSC에서 5분 동안 세척합니다.
SSC를 제거한 다음 DAPI가 포함된 시중에서 판매되는 장착 매체를 사용하여 젖빛 유리 슬라이드에 고환을 장착합니다. 커버 슬립 실란트로 슬라이드를 밀봉하고 어두운 곳에서 실온에서 2시간 동안 배양합니다. 좋은 수준의 교잡은 정자 형성 전반에 걸쳐 표적 염색체의 시각화를 허용했습니다.
표지된 성염색체의 쌍은 프리바이오틱스(prebiotic) 및 근단계(myotic stage)에서 볼 수 있습니다. X 또는 Y 베어링 정자는 화살표 모양의 성숙한 정자의 마지막 단계까지 DNA 응축의 다른 수준으로 표시된 정자 형성 전반에 걸쳐 추적 될 수 있습니다.
