먼저 마취된 동물을 입체 프레임으로 옮긴 다음 머리를 코콘과 이어 바에 고정합니다. 동물의 맥박, 맥박 산소 포화도, 혈압 및 체온을 측정하기 위해 프로브를 놓습니다. 눈 연고를 바릅니다.
제모 크림으로 모발을 제거하고 요오드와 알코올의 세 가지 통로로 두피를 무균 청소하십시오. 말기 연구의 경우 수술용 가위를 사용하여 두피를 제거하고 두개골을 양고기 봉합사에서 꼬리 방향으로 약 3mm, 브레그마 정면에서 3mm 정도 노출시킵니다. 두피를 정수리로 절제하여 양쪽 측두근 안쪽을 노출시킵니다.
그런 다음 두개골이 깨끗하고 건조하도록 남아 있는 피하 결합 조직을 제거하여 자극 전극을 적용합니다. 다음으로, 두개골과 접촉할 전극 측면에 전도성 젤을 바릅니다. 이 측두근에 전극을 놓고 간헐적인 부분의 가장자리 주위에 수술용 초강력 접착제로 고정합니다.
그런 다음 리도카인 페이스트를 전극을 건드리지 않고 양쪽 측두근과 두피에 바릅니다. 두개외 자극 전극의 임피던스를 테스트합니다. 그런 다음 두개내 기록 전극이 없는 레이저 스페클 이미징 장치 아래에 마우스를 놓습니다.
두 개의 두개골 tACS 전극 사이에 자극을 가하려면 정전류를 전달하는 상용 인체 호환 자극 장치를 사용하십시오. 자극하기 전에 명확한 기준선을 얻으십시오. 두개골 양쪽의 다양한 진폭에서 짧은 시간 동안 온/오프 자극을 적용합니다.
자극 후 명확한 기준선을 확인하십시오. 두개외 자극 전극을 두개골 양쪽으로 4mm 측면으로 배치한 후 정중선의 양쪽에 2mm, 서로 4mm 간격을 두고 시상 봉합사와 직교하는 버 구멍의 위치를 표시합니다. 그런 다음 유리 전극용 버 구멍 두 개를 뚫습니다.
이 버 구멍을 멸균 미네랄 오일로 채워 두개외 전극에서 두개골로 전류가 침투하는 것을 방지합니다. 그런 다음 풀링된 유리 마이크로 전극에 0.2몰 염화나트륨을 채우고 마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 시상 봉합사에 측면으로 배치된 두 개의 버 구멍에 넣습니다. 유리 마이크로 전극을 버 구멍에 넣습니다.
다음으로, 버 구멍을 삽입한 후 두개외 자극 전극의 임피던스를 테스트하여 뇌로의 전류 흐름을 방해하지 않는지 확인합니다. 두개외 자극으로 인한 뇌 혈류를 측정하려면 두개내 기록 전극이 있는 레이저 스페클 이미징 장치 아래에 마우스를 놓습니다. 뇌에 삽입되면 다양한 대칭 깊이에서 깊이 프로파일을 수행하여 이러한 유리 미세 전극이 대뇌 피질 내에서 약 1mm가 되도록 합니다.
디지타이징 시스템을 사용하여 충분히 안정적인 기준선 기간 동안 도플러 프로브와 마이크로 전극의 연속 데이터를 기록합니다. 그런 다음 온/오프 자극을 적용하고 추가 두개골 자극을 테스트합니다. 확산 우울증을 유도하기 위한 실험을 위해 두개골 오른쪽에 세 번째 버 구멍을 추가하고, 관상 봉합사에 1.5mm, 후방 전두엽 봉합사에 1mm를 추가합니다.
나중에 적용할 수 있도록 이 버 구멍을 KCL로 채우십시오. 저강도 tACS에 대한 응답으로, 두개내 직접 DC 전기 기록 및 대뇌 혈류의 양측 레이저 도플러 기록에 대한 데이터를 획득했습니다. 0.75 밀리암페어 자극에 대한 반응으로 작은 반응이 관찰된 반면, 1 밀리암페어 자극에 대한 반응으로 더 큰 반응이 관찰되었습니다.
전기 및 뇌 혈류 흔적 모두에서 반응은 두개골의 오른쪽과 왼쪽 사이에서 비대칭적이었습니다. 발작 중 대뇌 혈류의 레이저 스페클 두개골 영상은 자극에 대한 반응으로 혈류가 증가했음을 보여주었고, 이는 피질 전체에 고르게 확산되었습니다. 자극 후 혈류는 기준선으로 돌아왔습니다.
