Mounting the Mouse on the Live Imaging Insert for Intravital Imaging

마취된 마우스를 도립 현미경 스테이지에 설치된 라이브 이미징 인서트에 놓기 전에 부착된 노즈 콘이 있는 이소플루란 튜빙을 인서트의 모서리 튜빙 브래킷을 통해 끼웁니다. 부착된 항문 온도계 프로브가 있는 컨트롤러에 열판을 꽂고 전원을 켠 후 마취된 마우스를 유도 챔버에서 열판으로 옮깁니다. 그런 다음 노즈콘을 마우스에 고정합니다.

항문 프로브를 동물에 삽입하고 컨트롤러를 조정하여 약 섭씨 36도의 안정적인 체온을 유지합니다. 올바른 위치에 있는 마우스를 플라스틱 랩으로 덮어 체온을 가두고 체온을 높입니다. 머리가 커버 슬립 디스크와 정렬되도록 마우스를 배치하고 금속 이어 클립이나 테이프를 사용하여 귀를 유리 커버 슬립 중앙에 고정합니다.

이미징을 완료한 후 전자 기화기에서 Low Flow 옵션을 선택하여 이소플루란 전달을 중단합니다. 보행이 가능해질 때까지 마우스를 가열 패드로 옮깁니다. 커버 슬립 디스크를 제거한 후 렌즈 용지와 렌즈 용액으로 깨끗이 닦으십시오.

재사용을 위해 긁히지 않도록 적절하게 보관하십시오. 그런 다음 인서트 브래킷에서 마취 튜브를 분리하고 현미경 스테이지에서 인서트의 나사를 풉니다. 형광 라벨링된 살아있는 쥐 귀 조직의 획득된 Z 스택은 시간 경과에 따른 x, y 및 z축의 드리프트를 최소화하여 맞춤형 3D 프린팅 라이브 이미징 인서트를 검증했습니다.

성인 수컷 쥐의 mCherry 양성 쥐 귀 표피 세포에 대한 3시간 타임랩스 동영상의 시점은 장시간 동안 초점이 유지되는 단일 z 평면을 보여주었습니다. 성인 암컷 쥐의 GFP 양성 귀 피부 섬유아세포의 또 다른 3시간 타임랩스 동영상에서도 유사한 관찰이 이루어졌습니다.