3D 프린팅된 생물반응기를 사용하여 관류 배양을 위한 샘플을 준비합니다. 층류 캐비닛에서 분리된 돼지 경동맥 샘플을 냉간 운송 매체에 넣습니다. 메스 칼날을 사용하여 과도한 결합 조직을 제거하고 조직 끝을 다듬습니다.
그런 다음 차가운 운송 매체에서 티슈를 두 번 씻으십시오. 다음으로, 조직을 수송 매체에 넣어 최소 30분 동안 궤도 셰이커에 올려 최종 세척합니다. 그 후, 세척된 동맥의 비분지 세그먼트를 두 개의 가시 루어 연결부를 사용하여 제작된 생물반응기 시스템에 연결합니다.
그리고 혈관 실리콘 타이로 만든 혈관 결합을 사용하여 고정합니다. 첫 번째 루어 연결부에 부착된 작은 주사기를 사용하여 동맥을 통해 매체를 부드럽게 흐르게 하여 개통성을 보장합니다. 제작된 삽입물에 동맥을 고정한 후 반응 공간을 관류 매체로 채웁니다.
그런 다음 루미널 순환 루프를 매체로 조심스럽게 채워 시스템에 남아 있는 공기를 제거합니다. 마지막으로 반응 공간을 조립된 관류 시스템에 연결하여 순환을 완료합니다. 관류 배양을 수행하려면 관류 시스템을 인큐베이터에 넣습니다.
연동 펌프에 연결한 후 압력 센서와 같은 추가 수집 시스템을 연결합니다. 시스템이 분당 약 10-15밀리리터의 낮은 매체 유량으로 밤새 평형을 이루도록 합니다. 다음 날, 분당 35밀리리터의 최종 유속에 도달할 때까지 유량을 점진적으로 증가시킵니다.
3일마다 새 배지가 있는 주사기 하나를 펌프에 더 가까운 배지 교환 포트에 연결하고 빈 주사기를 저장소에 더 가까운 포트에 연결하여 사용한 배지를 수집하여 매체의 50%를 교체합니다. 실험 후 멸균 수술용 가위를 사용하여 생물 반응기에 연결된 조직 말단을 다듬어 반응 챔버에서 조직을 수확합니다. 내피 및 평활근 특이적 마커를 사용한 컨포칼 이미징은 동맥의 정상적인 구조가 수확 시점부터 세척 및 처리, 관류 배양 후에도 내내 잘 보존되고 유지되는 것으로 나타났습니다.
그러나 처리 중 잘못된 취급으로 인해 배양 전에 내피가 손실되고 갑작스러운 고유량 시작과 같은 비생리적 배양 조건을 적용하면 발광 손상이 나타났습니다. 수확 시점 및 관류 배양 7일 후 헤마톡실린 및 에오신 염색 및 면역형광 염색을 사용한 조직의 조직학적 평가는 혈관 벽에서 세포의 형태 및 전체 분포가 전체적으로 유지되었음을 밝혔습니다.
