Surgical Protocol for the Selective Photoconversion of Lung Metastases

수술을 위해 마우스를 준비한 후 흉골 왼쪽 7mm, 늑골하 가장자리 위 약 7mm의 표적 부위를 식별합니다. 집게를 사용하여 확인된 부위 위로 피부를 들어 올리고 날카로운 미세 절개 가위를 사용하여 10mm를 원형으로 절개하여 피부만 자릅니다. 그런 다음 흉곽 위의 연조직을 제거하고 소작 펜을 사용하여 양쪽 끝의 주요 혈관을 소작합니다.

집게로 여섯 번째 또는 일곱 번째 갈비뼈를 들어 올리고 뭉툭한 미세 해부 가위의 한 날을 사용하여 늑간 근육을 뚫습니다. 이제 가위를 부드럽게 돌려 폐 조직과 갈비뼈와의 접촉을 피하면서 늑간 공간을 약 10mm 절개합니다. 손목이나 손에서 압축 공기를 섬세하게 방출하여 적절한 흐름 강도를 결정하고 노즐에서 이물질을 제거합니다.

그런 다음 폐 손상을 방지하기 위해 절개 부위에 짧은 공기를 뿌립니다. 집게를 사용하여 여섯 번째 또는 일곱 번째 갈비뼈를 들어 올리고 칼날이 흉벽과 평행한 늑간 절개부에 견인기를 삽입합니다. 그런 다음 손잡이를 조심스럽게 풀어 견인기가 열리고 폐가 서서히 드러나도록 합니다.

이제 37도로 데운 멸균 PBS를 노출된 폐 조직에 2-3방울 떨어뜨려 건조를 방지합니다. 마우스 위에 작은 컷아웃이 있는 알루미늄 호일 조각을 오버레이하여 노출된 폐 조직 바로 위에 놓습니다. 컷아웃에 표적 폐 사진 변환을 위해 열린 흉부와 주변 조직만 표시되는지 확인합니다.

그런 다음 마우스와 알루미늄 호일 위에 컷아웃이 있는 상자를 놓고 컷아웃이 노출된 폐와 정렬되도록 합니다. 그리고 사진으로 변환 램프를 상자의 컷아웃 바로 위에 놓습니다. 그런 다음 광변환 램프를 작동시켜 노출된 폐 조직을 6분 동안 연속적으로 비춥니다.

사진 변환 후 램프를 비활성화하고 램프 상자와 알루미늄 호일 마스크를 마우스에서 멀리 떨어뜨립니다. 손목에서 공기를 배출하여 폐와 흉벽을 분리한 후 흉부 절개부에서 공기를 배출합니다. 견인기 손잡이를 단단히 잡고 꽉 쥐면 날이 닫힙니다.

닫힌 견인기를 늑간 공간에서 조심스럽게 움직여 폐 조직에 닿지 않도록 합니다. 그런 다음 5-0 실크 봉합사를 사용하여 간단한 연속 봉합 패턴으로 늑간 절개 부위를 봉합하여 절개 부위 양쪽의 갈비뼈가 통합되도록 합니다. 봉합사를 단단히 당겨 상처 가장자리가 정렬되도록 하여 흉벽의 무결성을 다시 확립합니다.

끝을 네 번 매듭을 지어 봉합사를 고정합니다. 봉합사 꼬리를 매듭에 최대한 가깝게 자르고 수술용 스테이플을 사용하여 피부를 닫습니다. 흉강에서 과도한 공기를 제거하려면 xiphoid 돌기 아래에 28 게이지 바늘이 있는 1밀리리터 주사기를 삽입합니다.

주사기를 약 1밀리리터로 다시 당깁니다. 마우스에서 주사기를 제거하고 공기를 배출합니다. 청색광에 노출되기 전에 폐 전이를 발현하는 노출된 Dendra2의 이미지가 표시됩니다.

폐 전이를 발현하는 Dendra2를 청색광에 노출시킨 결과, 6분 노출이 생체 외 및 생체 내 샘플 모두에서 사진 변환 채널에서 가장 밝은 신호를 생성한다는 것을 보여주었습니다. 청색광에 노출된 상태에서 수술을 받은 마우스의 세 가지 조직 유형 모두에서 사진 변환 및 비사진 변환 세포가 확인되었습니다. 청색광에 노출되지 않고 수술을 받은 마우스의 조직에서는 광변환되지 않은 종양 세포만이 발견되었습니다.