직경 3.5mm의 생검 펀치를 준비하는 것으로 시작합니다. 가장자리에서 5mm 떨어진 펀치 샤프트에 점을 표시합니다. 펀치를 고정하고 2단 속도 회전 도구를 사용하여 샤프트의 표시된 말단부를 절단합니다.
샤프트를 3.5mm 깊이로 자르고 마지막 1.5mm를 부착한 상태로 두고 팁을 90도로 구부립니다. 다음으로 900ml의 증류수에 PBS를 준비하고 pH를 7.4로 조정합니다. 그런 다음 증류수를 추가하여 용액을 1리터의 최종 부피로 가져옵니다.
화학 후드 아래에 45ml의 PBS에 파라폼 알데히드 2g을 녹여 4% 파라폼 알데히드 용액을 준비하고 pH를 65도로 조정하면서 섭씨 7.4도까지 가열합니다. 파라포름 알데히드가 완전히 용해되면 용액의 최종 부피를 50밀리리터로 조정합니다. 투여를 위한 주사 가능한 마취 칵테일의 정확한 부피를 결정하기 위해 마우스의 무게를 측정합니다.
마취가 시행되면 표준 설치류 수술 원칙에 따라 마우스를 수술대 위에 놓습니다. 그런 다음 설치류의 머리 아래에 5mm 높이의 베개를 옆으로 욕창 자세로 놓습니다. 수술용 눈 창으로 안구 표면을 충분히 말리고 속눈썹을 깔끔하게 다듬습니다.
마취된 마우스를 최적으로 볼 수 있도록 수술용 현미경을 조정하고 타이머를 30초로 설정합니다. 그런 다음 엄지와 검지를 사용하여 쥐의 눈꺼풀을 크게 벌리고 수술용 현미경을 사용하여 가장자리 부위 둘레를 검사합니다. 이제 멸균된 펀치 트레핀을 아래쪽 압력을 가하지 않고 눈 축과 평행하게 조심스럽게 잡습니다.
기기를 회전하지 말고 펀치 트레핀의 축을 지구본의 축과 평행하게 유지하십시오. 수술 보조원에게 수산화나트륨 용액 3방울을 펀치 트레핀 구멍에 넣도록 요청합니다. 30초 후, 각막과 각막을 5mL의 PBS를 사용하여 세척합니다.
그런 다음 범용 pH 지시약 용지를 사용하여 손상된 눈의 각막 표면에서 pH 값이 7에서 7.5 사이인지 확인합니다. 시술 후 펀치 트레핀과 수술 테이블을 70 % 에탄올로 세척, 건조 및 소독하십시오. 세극등 생체현미경으로 마취된 쥐의 눈을 검사하고 카메라를 사용하여 이미지를 캡처합니다.
그런 다음 0.1% 형광 점안액을 바르고 여분의 형광액을 면 어플리케이터에 적십니다. 코발트 블루 필터를 사용하여 각막 상피 결손의 존재 가능성을 평가하고 사진을 찍습니다. 그런 다음 손상된 안구 표면에 삼중 항생제 안과 연고를 바릅니다.
내측 결막과 만져지는 결막 전체를 보존하면서 눈의 핵을 형성합니다. 수술용 현미경으로 카룬클과 피부 사이의 접합부를 섬세하게 절개합니다. 치아 집게를 사용하여 카uncle을 집어넣고 만져지는 결막 아래로 수술용 가위를 안내하여 족근판과의 접합부로 향하도록 합니다.
유착선을 따라 외안각을 향해 결막을 자릅니다. 그런 다음 수술용 가위를 결막하 평면에서 결막과 하족골판의 접합부로 돌립니다. 이제 엄지와 검지를 사용하여 코 쪽에서 위 눈꺼풀과 아래 눈꺼풀을 집어넣습니다.
수축하면서 구부러진 팁 핀셋의 끝을 돌출된 눈물샘 뒤로 안내하여 시신경 쪽으로 이동합니다. 시신경을 단단히 잡고 구체를 추출합니다. 나중에 PBS로 지구본을 헹구고 고정 용액으로 옮깁니다.
마우스 모델에서 각막 및 변부 알칼리 손상 후 마우스 눈의 상처 치유 과정을 보여줍니다. 각막 부종은 0일과 2일에 두드러지는 반면, 섬유증은 부상 후 2주차에 더 뚜렷하게 나타납니다. 상피 결손은 12-14일 내에 구심성 패턴으로 결막 상피 세포 이동에 의해 치유되었습니다.
그러나 다친 눈의 50%는 2주차가 끝날 때 지속적인 상피 결손이 발생했습니다.
