Patch-Clamp Recording to Study the Electrical Responses of Motor Neurons to Spinal Cord Stimulation

시작하려면 준비된 척수 조각을 기록 챔버에 놓습니다. 그런 다음 적절한 척수 자극기 위치 지정을 위해 음극의 등쪽 정중선 근처에 마이크로 조작 시스템의 양극을 등쪽 뿌리 입구 영역에 가깝게 배치합니다. 이제 60X 대물 렌즈로 전환하여 눈에 보이는 핵 없이 매끄럽고 밝은 표면을 가진 건강한 뉴런을 식별합니다.

적외선 강도를 약간 낮추고 형광등을 켜고 광 필터를 광대역 자외선 여기 옵션으로 조정합니다. 이제 적절한 Fluoro-Gold-positive 운동 뉴런을 선택하고 뉴런 근처에 올 때까지 전극을 서서히 낮춥니다. 피펫이 표면에 닿을 때 팁 레벨에서 작은 멤브레인 움푹 들어간 곳을 찾아 이전에 적용된 양압을 해제합니다.

그런 다음 주사기를 사용하여 피펫에 음압을 가하고 소프트웨어 인터페이스에서 저항 값이 기가옴으로 상승할 때까지 기다립니다. 멤브레인 전위를 마이너스 70밀리볼트로 고정합니다. 빠른 커패시턴스 보상 버튼을 누르십시오 ampliifier의 소프트웨어 인터페이스를 누른 다음 짧은 음압을 가하여 세포막을 파열시키고 ampliifier의 소프트웨어 인터페이스에서 느린 커패시턴스 보상 버튼을 누릅니다.

진폭을 1-10밀리암페어 사이로 유지하면서 1-2초 동안 척수 자극을 가합니다. 첫 번째 활동 전위가 관찰될 때까지 자극 진폭을 점진적으로 증가시켜 모터 임계값을 결정합니다. 전류 클램프 모드에서 레오베이스 주위에 5초의 탈분극 전류 주입을 사용하여 지연된 모터 뉴런과 즉시 발화하는 모터 뉴런을 구별합니다.

척수 자극을 끈 후 막 전위를 계속 기록하여 자발적인 활동 전위 발화를 포착합니다. 척수 자극의 진폭이 증가하면, 막 전위가 증가하고, 활동 전위가 매 10 내지 20 펄스마다 촉발되었다. 척수 자극이 꺼진 후, 뉴런은 짧은 시간 동안 일련의 자발적인 활동 전위를 발화시켰다.

그런 다음 휴지막 전위는 마이너스 65 밀리 볼트로 돌아 왔습니다.