시작하려면 마취된 쥐의 팔다리를 접착 테이프로 고정합니다. 복부의 피부를 위로 잡고 흉부 둘레를 따라 조심스럽게 잘라 완전히 노출시킵니다. 안과 가위로 우심방을 작게 자르고 즉시 좌심실 정점에 관류 22 게이지 바늘을 삽입합니다.
그런 다음 주사기를 통해 30-50밀리리터의 심장 관류액을 밀어 넣습니다. 우심방의 유출액이 완전히 맑아지면 동일한 양의 4% PFA 용액을 주입합니다. 조직과 장기를 해부하고 섭씨 4도에서 4% PFA로 하룻밤 동안 고정합니다.
조직 석회질 제거를 유도합니다. 고정된 심장 조직을 10ml의 EDTA 용액에 담아 섭씨 37도의 쉐이킹 테이블 위에 놓습니다. 약 이틀 동안 배양하고 매일 수액을 갈아줍니다.
조직 탈색을 위해 고정 종아리 뼈를 20 % Quadrol 용액의 25 밀리리터에 넣습니다. 섭씨 37도의 쉐이킹 테이블에서 하루 동안 배양하고 한 번 액체를 갈아줍니다. 다음으로, 조직을 30 % Tertiary-Butanol 또는 TB 용액에 순차적으로 놓습니다.
그런 다음 50%TB 용액을 사용한 다음 70%TB 용액을 사용하여 그라디언트 탈지를 수행합니다. 그런 다음 섭씨 37도의 쉐이킹 테이블에서 샘플과 TB PEG 용액을 6시간 동안 탈수합니다. 마지막으로 BB PEG 용액에 완전히 탈수된 조직을 섭씨 37도의 쉐이킹 테이블 위에 놓습니다.
2-4시간의 배양 후 조직은 투명하게 변합니다. PEGASOS 조직 투명화 방법은 투명한 조직을 만들었습니다. 전체 마운트 EDU 염색으로 투명화된 조직은 라벨링이 효율적이고 잘 보존되었음을 보여주었습니다.
대조군에서는 여러 EDU 양성 세포가 봉합사 전체에 확산적으로 분포되어 있었습니다. 봉합사 확장 1일 후, 봉합사의 중간과 가장자리에서 증식하는 세포가 관찰되었습니다. 봉합사가 넓어짐에 따라 증식하는 세포의 수는 시간이 지남에 따라 감소했습니다.
녹색으로 표지된 세포는 골수에 있는 작고 둥근 세포로, EDU 양성 봉합 세포와 달랐습니다.
