Mouse Liver Operation and Perfusion for Studying Hepatic Metabolism

시작하려면 마취된 C57 Black/6 JRj 마우스를 놓습니다. 가열된 수술대에 누워있습니다. 발가락 꼬집기에 대한 반사 반응이 없는지 확인합니다.

머리카락이 가위에 달라붙는 것을 방지하기 위해 마우스에 70% 에탄올을 뿌립니다. 가위를 사용하여 기저부를 절개하고 흉곽 양쪽을 위쪽으로 절단하여 복강을 노출시킵니다. 면봉을 사용하여 내장을 오른쪽으로 움직여 문맥을 노출시킵니다.

구부러진 집게를 사용하여 문맥 아래에 두 개의 합자를 놓고 각 합자를 느슨하게 묶습니다. 그런 다음 0.7mm 카테터를 문맥에 삽입합니다. 구멍이 뚫리면 카테터에서 바늘을 제거하고 카테터 끝이 간에 가까워질 때까지 카테터를 정맥을 통해 안내합니다.

그런 다음 합자를 조입니다. 간을 관찰하십시오. 롤러 펌프의 유량을 설정하고 프로퓨전 튜브를 부착합니다.

섭씨 37도에서 간의 풍부함을 시작합니다. 간이 창백해지면 가위로 흉곽과 횡격막을 자릅니다. 그런 다음 미세한 점포를 사용하여 suprahepatic inferior vena cava 아래에 합자를 놓습니다.

그런 다음 심장의 우심방을 통해 하대정맥상에 카테터를 삽입합니다. 구멍이 뚫리면 바늘을 제거하고 카테터를 간에 더 가까운 정맥을 통해 안내합니다. 그런 다음 합자를 조입니다.

관류 유출수 수집용 튜브를 부착하고 모든 튜브를 방수 테이프로 고정합니다. 혈관 cl 사용amp 어댑터, 혈관 cl을 놓습니다.amp 죽은 혼합물을 방지하기 위해 오른쪽 신장 정맥 바로 위의 infrahepatic vena cava를 가로질러 합니다. 다음으로 관류 유량을 분당 3.5밀리리터로 높입니다.

타이머 및 압력 기록을 시작합니다. 식염수를 적신 멸균 드레이프로 간을 덮고 30분 동안 평형을 이루고 폐수의 양을 측정합니다. 30분 평형 후 분획 분취기에서 첫 번째 기준선 샘플 수집에 대한 실험을 시작합니다.

버블 트랩을 정기적으로 모니터링하고 비어있을 때 관류 완충액으로 다시 채우십시오. 완충액 샘플이 장기에 들어가기 직전에 3방향 마개를 통해 그리고 하대정맥에 삽입된 수집 카테터에서 채취합니다. 혈액 가스 분석기를 사용하여 수집된 샘플을 측정하여 장기가 대사적으로 활성화되어 있는지 확인합니다.

베이스라인 관류 15분 후 주사기 펌프를 사용하여 원하는 유속으로 3방향 스톱콕을 통해 테스트 물질을 주입하여 첫 번째 자극을 시작합니다. 시뮬레이션 후 두 번째 자극을 시작하기 전에 20-30분 동안 기준선 샘플을 수집합니다. 두 개의 자극 기간 각각에 앞서 꾸준한 기준선 기간을 가진 관류된 간에서 요소의 생성은 혼합 아미노산을 사용한 두 번의 연속 자극에 대한 요소의 반응이 일관적임을 시사했습니다.

포도당과 에스테르화되지 않은 지방산의 꾸준한 기초 방출이 관찰되었습니다. 글루카곤 주입 중 포도당 및 비 ED 지방산이 강력하게 증가하기 전에. 기초 상태와 글루카곤 주입 중 평균값은 글루카곤이 간 당과정분해 및 지방 분해를 빠르게 자극한다는 것을 시사합니다.

그러나 꾸준한 기초 기간이 없으면 요소 반응을 다음 요소와 구별하는 것이 불가능해집니다.