주위 세포를 표지하려면 인공 뇌척수액 또는 ACSF에 형광 염료 TO-PRO-3을 첨가합니다. 이제 갓 썰어낸 쥐의 뇌를 염료가 듬뿍 들어간 ACSF에 넣어 실온의 어두운 환경에서 20분 동안 배양합니다. 다음으로, 브레인 슬라이스가 있는 나일론 메쉬 스트레이너를 6웰 플레이트 헹굼 챔버로 옮깁니다.
뇌 절편을 챔버에서 10분 동안 그대로 두십시오. 중요하지 않은 pericyte에 라벨을 붙이려면 TO-PRO-3 태그가 부착된 뇌 절편을 섭씨 37도에서 어두운 곳에서 30분 동안 접합 이솔렉틴 B4에 배양합니다. 배양 후 뇌 절편을 인공 뇌척수액으로 15분 동안 헹굽니다.
다음으로, 5%의 이산화탄소와 95%의 산소로 가스를 주입한 ACSF에 뇌 절편을 넣습니다. 여기에 섭씨 37도에서 37마이크로몰 농도의 요오드화 프로피듐을 첨가합니다. 염료 흡수를 중단하고 배경 라벨링을 최소화하려면 ACSF에서 15분 동안 준비제를 헹굽니다.
정상적인 생리적 조건에서 뇌 주위세포는 세포 사멸을 경험하지 않습니다. 프로피듐 요오드화물로 염색되지 않은 생존 가능한 주위세포가 검출되었습니다. SAH 모델은 미세혈관 내에서 중요한 주위 세포여야 합니다.
비필수 주위세포(non-vital pericyte)도 검출되었습니다. 프로피듐 요오드화물(Propidium iodide)로 표지된 비생명 주위 세포(non-vital pericyte)는 전체 미세혈관에 부착된 상태로 남아 있었습니다.
