시작하려면 희생된 쥐의 피부를 두개골 입구에서 시작하여 정면 부위로 뻗어 조심스럽게 절개합니다. 가위를 사용하여 연수막을 손상시키지 않고 두개골을 섬세하게 들어 올려 제거하고 뇌 전체를 수집합니다. 뇌 전체를 세척 버퍼에 담그고 부드럽게 씻어내어 표면 혈액을 제거합니다.
뇌를 자르지 않고 멸균된 페트리 접시에 옮깁니다. 그런 다음 현미경으로 미세한 핀셋을 사용하여 뇌 표면에서 렙토메닝을 추출합니다. 멸균 마이크로 가위를 사용하여 렙토메닝 조직을 조각으로 자릅니다.
주어진 성분을 사용하여 소화 효소 혼합물을 복구하십시오. 혼합물 10mL를 조각에 넣고 섭씨 37도에서 15분 동안 배양합니다. 부드럽게 저어 튜브 바닥에서 조각을 분리합니다.
그런 다음 10밀리리터의 중지 버퍼를 추가합니다. 서스펜션을 섭씨 4도에서 5분 동안 300g으로 원심분리합니다. 그리고 피펫을 사용하여 상층액을 조심스럽게 제거합니다.
10밀리리터의 콜드 PBS를 추가하고 70미크론 스트레이너를 통해 덩어리를 여과하여 멸균된 50밀리리터 튜브에 넣습니다. 평방 센티미터당 10개에서 5번째 세포를 5밀리리터의 배양 배지가 있는 피브로넥틴 코팅된 T25 플라스크에 넣고 섭씨 37도에서 5% 이산화탄소로 24시간 동안 배양합니다. 배양 후 배지를 새 배지로 교체하여 부착되지 않은 세포를 제거합니다.
