Extraction and Analysis of DNA from the Cellular Component of the Eye Humor

DNA 추출을 수행하려면 먼저 눈액에서 얻은 세포 펠릿에 적절한 양의 세포 용해 용액을 첨가합니다. 용액을 위아래로 피펫팅하여 완전히 섞습니다. 세포가 완전히 용해되면 단백질 침전물 용액을 추가하여 전체 부피의 1/3을 구성합니다.

이제 20-30초 동안 소용돌이치고 세게 섞습니다. 그런 다음 실온에서 3000g으로 3분 동안 탈수합니다. 한편, 300마이크로리터의 이소프로판올을 깨끗한 마이크로 원심분리기 튜브에 옮깁니다.

원심분리가 완료되면 상층액을 이소프로판올이 들어 있는 튜브에 조심스럽게 피펫팅합니다. 다음으로 튜브에 1.5마이크로리터의 글리코겐을 넣고 튜브를 뒤집어 완전히 섞습니다. 영하 20도의 튜브를 냉동실에 한 시간 또는 밤새 넣어 DNA 침전을 촉진합니다.

냉동 후 실온에서 3000g에서 5분 동안 튜브를 원심분리합니다. 그런 다음 이소프로판올을 피펫팅합니다. 펠릿을 씻으려면 0.5 % 에탄올 70 밀리리터를 첨가하십시오.

균일한 세척을 위해 튜브를 부드럽게 뒤집습니다. 그런 다음 실온에서 3000g에서 1분 동안 튜브를 회전시킵니다. 원심분리기 튜브에서 상층액을 폐기합니다.

이제 깨끗한 거즈에 튜브를 뒤집어 용액을 배출하고 펠릿을 건조시킵니다. 마이크로 원심분리기에서 빠르게 회전한 후 끝이 가는 일회용 피펫 팁을 사용하여 남은 에탄올 방울을 피펫팅합니다. 다음으로, 건조된 DNA 펠릿에 45마이크로리터의 DNA 수화 용액을 추가합니다.

그런 다음 섭씨 50도로 설정된 가열 블록에 튜브를 놓습니다. 안구액의 세포 성분과 세포가 없는 성분의 DNA 수율은 비슷했습니다. 유리체 망막 림프종 관련 돌연변이의 세포 및 cell-free 성분에 대한 PCR 분석을 수행했습니다.

더 높은 돌연변이율은 낮아진 주기 임계값에 의해 입증된 바와 같이 cell-free 구성 요소에서 존재했습니다.