시작하려면 집게를 사용하여 안락사된 쥐의 절개된 턱밑 타액선에서 지방과 결합 조직을 제거합니다. 그런 다음 얼음처럼 차가운 HBSS 용액이 있는 수집 튜브에 글랜드를 넣습니다. 그런 다음 집게를 사용하여 샘을 1cm 정사각형 조각으로 자릅니다.
4% 아가로스를 섭씨 50도로 가열하고 용액을 35mm 접시에 붓습니다. 소량의 아가로스 용액을 별도의 접시에 붓고 글랜드 조각을 넣으십시오. 그런 다음 여분의 아가로스에 있는 조각을 휘저어 코팅합니다.
다음으로 아가로스를 곁들인 첫 번째 접시에 4-6개의 글랜드 조각을 평평하게 놓습니다. 접시에 뚜껑을 덮고 아이스박스에 옮기고 접시에 얼음을 덮어 식히고 굳힙니다. 샘 조각을 절단하려면 먼저 메스를 사용하여 샘이 내장된 아가로스 블록 주위를 조심스럽게 자릅니다.
다음으로, 아가로스 블록에 슈퍼 접착제 한 방울을 바르고 비브라톰 단계에 부착합니다. 이제 1% 페니실린 스트렙토마이신이 함유된 얼음처럼 차가운 PBS로 비브라톰 챔버를 채웁니다. 메스로 여분의 아가로스를 잘라내고 각 땀샘 사이에 5mm의 간격을 만듭니다.
비브라톰 블레이드를 아가로스 블록에 맞추고 섹션의 시작점과 끝점을 설정합니다. 조직 블록을 저속 및 고진동으로 150마이크로미터 두께의 섹션으로 자릅니다. 단면이 잘리면 붓을 사용하여 조각을 집어 항생제가 들어 있는 예열된 RPMI 배지가 있는 접시에 넣습니다.
턱밑 절편을 배양하려면 먼저 1.5ml의 RPMI 배지를 6웰 플레이트의 웰에 추가합니다. 0.4마이크로미터 필터를 웰에 넣습니다. 그런 다음 붓을 사용하여 각 필터에 1-6 개의 조각을 조심스럽게 옮깁니다.
그런 다음 섭씨 37도에서 이산화탄소 5% 미만으로 접시를 배양합니다. 일부 실험용 플레이트에 감마선을 조사하여 부상을 유발한 후 플레이트를 인큐베이터로 되돌립니다. 다음으로, 24웰 플레이트의 웰을 500마이크로리터의 배양 배지로 채웁니다.
붓을 사용하여 필터에서 조각을 들어 올려 우물에 부드럽게 담그십시오. 관련 핵 얼룩에서 조각을 배양합니다. 그런 다음 항체가 있는 조각을 섭씨 37도에서 2시간 동안 부드럽게 교반하여 배양합니다.
슬라이스를 배양 배지에 세 번 담가 세척합니다. 슬라이스를 각 세척 용액에 넣고 실온에서 10분 동안 부드럽게 교반합니다. 그런 다음 집게를 사용하여 양면 이미징 스페이서에서 테이프를 제거합니다.
스페이서를 유리 바닥이 있는 6웰 플레이트의 바닥에 붙인 다음 50마이크로리터의 매체를 스페이서 중앙의 틈에 피펫팅합니다. 슬라이스를 미디어에 놓고 평평하게 놓이도록 합니다. 그런 다음 피펫을 사용하여 틈새에서 20 마이크로 리터의 매체를 조심스럽게 제거합니다.
집게를 사용하여 스페이서 상단에서 테이프를 조심스럽게 제거하고 그 위에 25mm 원형 커버 슬립을 놓습니다. 스페이서 가장자리 주위를 눌러 커버 슬립이 단단히 부착되도록 합니다. 컨포칼 현미경으로 슬라이스를 이미지화합니다.
7일 동안 배양된 턱밑샘의 방사선 조사되지 않은 절편은 MT 신호 및 상피 구조를 유지했습니다. 그러나, 방사선 조사 후 3일째에 아시나 및 유관 세포 위축이 관찰되었다. 카스파아제 양성 세포는 방사선 조사 후 4일에 관찰되었습니다.
방사선 조사된 절편에서 상승된 감마 H2AX가 관찰되었으며, 이는 생체 내 DNA 손상을 나타냅니다. 대식세포의 실시간 이미징은 절편 배양 모델에서 상피 세포의 식세포작용을 확인했습니다. 개별 세포를 검출하고 분할하여 이동과 같은 세포 행동의 후속 분석을 수행할 수 있습니다.
