먼저, 조립된 재구성 가능한 세포 배양 플랫폼의 멤브레인을 실온에서 1시간 동안 제곱센티미터당 5마이크로그램의 피브로넥틴을 코팅하여 세포 부착을 개선합니다. 그런 다음 p200 피펫을 사용하여 코팅 용액을 흡입합니다. 패터닝 스텐실을 코어 모듈 웰에 배치합니다.
장치의 웰 및 하단 채널에 셀 미디어를 추가합니다. 인간 제대 정맥 내피 세포를 우물에 심습니다. 장치를 페트리 접시에 놓습니다.
국소 습도를 유지하기 위해 탈이온수가 포함된 15밀리리터 원뿔형 튜브 캡을 페트리 접시에 추가합니다. 페트리 접시 설정을 인큐베이터로 옮깁니다. 유동 중인 세포를 배양하려면 플랫폼을 오픈 웰에서 미세유체 모드로 재구성합니다.
이렇게 하려면 저장소와 튜브를 내피 세포 성장 배지로 채우십시오. 샘플 스테이지에 하단 하우징을 놓습니다. 개방형 웰 코어 모듈을 하부 하우징에 삽입한 다음 스텐실을 제거하고 모듈의 웰에서 셀 배지를 흡입한 다음 플로우 모듈을 웰에 넣습니다.
다음으로, 흐름 모듈을 코어 모듈 웰에 밀봉하기 위해 상부 하우징을 배치합니다. 입구 및 출구 디스펜싱 팁을 유량 모듈 포트에 연결합니다. 연동 펌프를 시작하여 유체 흐름을 시스템에 도입합니다.
순유량 노출을 위해 원하는 시간에 도달하면 펌프를 중지하십시오. 입구 및 출구 디스펜싱 팁을 제거한 다음 상부 하우징을 제거합니다. 핀셋을 사용하여 웰에서 흐름 모듈을 부드럽게 제거합니다.
마지막으로, 원하는 분석을 수행하기 전에 100마이크로리터의 세포 배지를 웰에 추가합니다. 유동 하에서 배양된 세포는 유동 방향을 따라 정렬된 반면, 유동 없이 배양된 세포는 무작위 배향을 유지했습니다. 세포가 순전한 스트레스에 노출되면 건강한 혈관에서 중요한 역할을 하는 Kruppel-like factor 2와 내피 산화질소 합성효소가 상향 조절됩니다.
