심혈관 연구를 위한 자기적으로 분리된 CD34⁺ 줄기 세포의 특성 분석

쥐 대동맥 및 장간막 동맥에서 분리한 CD34+줄기세포를 특성화하기 위해 조직 블록 배양을 수행하고 자기 분리로 세포를 얻습니다. 분화 후 섬유아세포 마커 발현에서 내피 세포를 검출하려면 488나노미터의 레이저 여기로 40배 배율로 세포를 관찰하십시오. 세포를 트립시화 한 후 원심 분리로 펠릿화하고 100 마이크로 리터의 선별 완충액에 재현탁시킵니다.

그런 다음 항 마우스 CD16 / CD32 단일 클론 항체로 섭씨 4도에서 5 분 동안 배양합니다. 그런 다음 면역 형광 염색을 위해 원하는 각 단클론 항체 2 마이크로리터를 추가하고 섭씨 4도에서 10분 동안 다시 배양합니다. 1 밀리리터의 완충액으로 세포를 두 번 씻으십시오.

시연된 바와 같이 세포를 원심분리한 후, 상층액을 제거하고 세포를 300마이크로리터의 완충액에 재현탁시킵니다. 세포를 플로우 튜브로 옮기고 아이스 박스에 넣습니다. 유세포 분석을 실행하여 분화된 세포의 비율을 확인합니다.

유세포 분석을 통해 분리된 CD34+혈관벽 줄기세포의 고순도를 확인했습니다. 세포 면역형광 염색 결과 분리된 CD34+줄기세포는 줄기세포 마커인 CD34, c-kit 및 Flk-1을 주로 발현하는 것으로 나타났습니다. 또한 유세포 분석을 통해 분리된 CD34+줄기세포가 in vitro에서 내피세포와 섬유아세포로 분화할 수 있는 능력이 있음을 확인했습니다.