시작하려면 선택된 효모 형질전환체를 포화에 도달할 때까지 섭씨 30도에서 SD URA 배지 3mL에서 성장시킵니다. 배양액의 광학 밀도를 600나노미터로 측정합니다. 14에 하룻밤 문화의 2 밀리리터, 실내 온도에 000 G를 분리하십시오.
상층액을 피펫으로 제거합니다. 펠릿을 1밀리리터의 MES 완충액에 재현탁시킵니다. 14에 혼합물, 실온에 000 G를 분리하십시오.
그런 다음 상층액을 제거합니다. MES 완충액으로 세포를 한 번 더 세척한 후 2mL의 MES 완충액에 세포를 재현탁시킵니다. 그런 다음 전체 부피를 시약 저장소에 붓습니다.
다음으로 마이크로플레이트 리더를 설정합니다. 프로토콜 관리 아이콘으로 이동한 다음 측정 유형을 형광 강도로 설정하고 판독 모드를 스펙트럼 스캔으로 설정합니다. 마이크로플레이트 이름을 GREINER 96 F BOTTOM에 입력하고 하단 광학 장치를 설정합니다.
Set scan over emission(방출 스캔 설정)을 선택하여 광학 설정에 액세스합니다. 여기 파장을 433나노미터로 조정하고 여기 대역폭은 10나노미터입니다. 방출 파장 범위를 460나노미터에서 550나노미터로 설정하고 방출 대역폭은 10나노미터, 스텝 폭은 1나노미터입니다.
설정 시간을 0.1초로 설정합니다. 이제 96 웰 투명 바닥 흑색 판의 우물에서 다양한 농도의 염화나트륨 용액을 준비합니다. 150 마이크로리터의 MES 완충액을 열 A의 처음 3개 웰에 로드한 다음 해당 삼투압 용액 150 마이크로리터를 왼쪽에서 오른쪽으로 증가하는 순서로 피펫팅합니다.
12채널 마이크로피펫을 사용하여 세척된 효모 현탁액을 여러 번 피펫팅합니다. 그런 다음 50 마이크로 리터의 셀 현탁액을 각 웰로 옮깁니다. 균일한 혼합을 위해 각 웰의 내용물을 여러 번 피펫팅합니다.
형광 강도 방출 스펙트럼을 즉시 측정하십시오. 화면에 표시되는 형광 방출 스펙트럼을 관찰합니다. IDR 구조체는 mCerulean3 및 시트린 방출 스펙트럼의 조합을 표시했습니다.
AtLEA45의 경우, 고삼투압 스트레스로 인해 공여체의 형광 강도가 감소하면서 수용체의 형광 강도가 증가했습니다. 이것은 알부민 작제물에서 관찰되지 않았다.
