시작하려면 이미징 소프트웨어를 켜십시오. 획득 창을 엽니다. 노출 시간을 500밀리초로, 카메라 영역을 풀 칩으로, 비닝을 1로 설정한 다음 필요한 채널에 대한 조명을 설정합니다.
세포질 교반의 경우 투과된 빛을 사용하여 난모세포 핵소체에 초점을 맞춥니다. 핵 스페클 실험의 경우 SRSF2 GFP 액적에 중점을 둡니다. 획득 속도를 최적화하려면 특수 탭에서 노출을 위해 카메라 셔터를 열도록 설정하고 클리어 모드를 설정하여 사전 시퀀스를 지웁니다.
그런 다음 스트림 획득 창을 엽니다. Acquire 탭에서 수집 모드를 RAM으로 스트리밍하고 프레임 수를 480으로 설정합니다. 프레임 속도로 이미지를 획득하도록 카메라 파라미터를 설정하고 0으로 건너뛸 프레임 수를 설정합니다.
Digital Camera Controller Parameters(디지털 카메라 컨트롤러 매개변수) 탭에서 카메라 상태를 정지(stop)로, 셔터 모드(shutter mode)를 열지 않음(open)으로 설정하고, clear mode(클리어 모드)를 설정하여 사전 시퀀스를 지우고, Number of frames(프레임 수)를 average(평균)로 설정합니다. 그런 다음 개체 주변의 관심 영역을 조정합니다. Stream Acquisition 창에서 Acquire 를 클릭하여 동영상을 실행합니다.
획득 후 동영상을 tiff 파일로 저장합니다. 이미지 분석을 위해 ImageJ 또는 Fiji를 엽니다. 플러그인에서 CIRB를 클릭하고 Verlhac 메뉴를 연 다음 Oocyte Nucleus Shape를 선택합니다.
대화 상자에서 분석할 동영상이 들어 있는 폴더를 선택합니다. 그런 다음 자르기를 위해 세타 각도와 여백을 선택합니다. 이제 XY 보정과 시간 간격을 선택한 다음 OK.To 클릭하여 시간 경과에 따른 평균 형상을 플로팅하고 스프레드시트에서 정의된 각 세타 각도에 대해 모든 시간 지점 T에 대한 평균 반경 R을 계산합니다.
각 T와 theta에 대해 반지름 소문자 r에서 시간 경과에 따른 평균 반지름 R을 뺍니다. 마지막으로, 한 조건의 각 핵 및 모든 핵에 대한 모든 시간 점 T 및 모든 각도 세타에 대한 변동의 평균을 계산합니다. 대조군 난모세포에서 핵은 핵 프로브 YFP Rango로 시각화된 대로 상당한 말초 변동을 나타냈습니다.
대조적으로, 세포골격력이 파괴된 난모세포의 핵은 시간이 지남에 따라 안정적으로 유지되었습니다. 핵 중심에서 주변부까지의 거리의 차이는 세포골격 힘이 파괴된 난모세포에 비해 대조군 난모세포가 6배 증가한 것으로 나타났습니다. 대조군 난모세포의 핵 반점은 교란된 세포질력에 비해 액적 표면에서 더 큰 변동을 보였습니다.
