시작하려면 T4 파지를 접종한 대장균 단집 군집화 마우스의 분변 펠릿을 멸균 사전 계량된 마이크로 원심분리기 튜브에 수집합니다. 튜브의 최종 무게를 기록하고 초기 튜브 무게를 빼서 샘플 무게를 계산합니다. 1밀리리터의 멸균 SM 완충액을 튜브에 추가하고 최대 속도로 소용돌이를 일으켜 분변 펠릿을 균질화합니다.
그램당 콜로니 형성 단위 또는 CFU 또는 PFU 계산을 위해 각 샘플에 추가된 SM 완충액의 부피를 기록합니다. 180 마이크로 리터 SM 완충액에서 각 샘플의 20 마이크로 리터의 일련의 8 연속 희석액을 준비합니다. E.coli가 포함된 LB 한천 플레이트 또는 LB 한천 플레이트에만 각 희석액 5마이크로리터를 배치하여 T4 파지 및 E.coli 농도를 측정합니다.
접시를 뒤집고 섭씨 37도에서 밤새 배양하기 전에 각 부분을 말리십시오. 다음 날, 스폿 당 3-30 개의 계산 가능한 플라크로 희석을 선택하십시오. 사용된 플라크와 희석액의 수를 세고 기록합니다.
플라크의 수를 각 지점에 도금된 부피로 나누어 마이크로리터당 PFU를 제공합니다. 여기에 희석 계수와 샘플당 PFU에 대해 각 샘플에 추가된 SM 버퍼의 부피를 곱합니다. 마지막으로 샘플 무게로 나누어 샘플 그램당 PFU를 구합니다.
마우스에서 검출된 T4 파지와 E.coli의 수준은 T4 파지 또는 차량 용해물의 6번째 PFU에 2 x 10으로 주입되어 4주 동안 어느 개체군도 고갈되지 않고 T4 파지와 E.coli의 공존을 보여주었습니다. T4 파지의 저용량은 6번째 PFU에 2 x 10에 비해 집락화에 영향을 미치지 않았으며 대장균 수준에 대한 용량 의존적 효과는 관찰되지 않았습니다.
