1PBS에서 3 마우스의 scBAT가 들어있는 유리 섬광 바이알 2 개를 작업대에 놓는 것으로 시작합니다. 4 PBS를 10 밀리리터의 콜드, 5 4 % 파라 포름 알데히드로 교체하십시오. 6 바이알을 너트 테이터에 놓고 7 하룻밤 동안 섭씨 4도에서 흔들어 8 scBAT를 고정합니다.
9 다음날, 파라포름알데히드 용액 10을 10 내지 15 밀리리터의 PBS로 교체한다. 11 바이알을 너트 테이터 12에 놓고 실온에서 30분 동안 흔들어 놓습니다. 13 PBS를 0.85% 식염수로 교체하고 14 30분 더 흔들어 줍니다.
15 그런 다음 식염수를 10 % 에탄올 16, 70 % 식염수 0.85 % 식염수로 교체하십시오. 17 바이알을 4도 냉장고에 하룻밤 동안 보관하십시오 18 또는 파라핀을 넣을 준비가 될 때까지 보관하십시오. 19 다음날, 바이알에서 70 % 에탄올 식염수 혼합물 20을 제거하고 10-15 % 탈수 알코올 21을 첨가합니다.
22 실온 23에서 1시간 동안 너트 위에 바이알을 흔듭니다. 24 두 번째 세척 후 10-15 밀리리터 25의 100% 탈수제 알코올 26을 넣고 1시간 동안 너트레이터를 계속 흔듭니다. 27 임베딩을 위해 scBAT를 지우려면 바이알에 10ml의 톨루엔 28을 추가하고 scBAT가 투명해질 때까지 너트레이터 29를 계속 흔듭니다.
30 그런 다음 파라핀 왁스에 scBAT를 삽입합니다. 31 마이크로톰(32)으로 scBAT를 절단하고 헤마톡실린 및 에오신 염색을 진행합니다. 33 헤마톡실린 및 에오신 염색을 통해 scBAT가 갈색 지방 조직의 특징적인 조직 구조(35)와 출생 후 및 성인 마우스 모두에서 수많은 작은 다기관 지방 세포(37)를 포함하는 조직 구조(36)를 구성한다는 것을 확인했다.
