시작하려면 녹색 파장에 대한 다이오드 레이저 시스템을 설정합니다. 레이저를 켜고 권장 시간 동안 예열하십시오. 레이저가 정상 상태에 도달하고 안정화된 후 레이저 파워 미터를 사용하여 레이저의 출력을 측정합니다.
각 파장에 대한 전력 값을 기록합니다. 전체 배지를 교체한 후 하이드로겔에 내장된 지방 유래 줄기 세포가 포함된 웰 플레이트를 다이오드 레이저 시스템 아래에 놓고 선택한 파장에서 선택한 플루젠트에 대해 계산된 레이저 조사 시간을 하이드로겔에 조사합니다. 각 실험 그룹에 방사선 조사가 이루어지지 않은 대조군이 있는지 확인하십시오.
이산화탄소 보충 5%, 습도 85%에서 섭씨 37도에서 배양판을 배양합니다. 다음으로, 효소 세포 회수 용액을 PBS로 1:20의 비율로 희석하여 작업 용액을 준비합니다. 30 마이크로리터의 작업 용액을 각 겔 또는 회수가 필요한 세포가 들어 있는 웰에 첨가합니다.
회수 용액이 고르게 분포될 수 있도록 플레이트를 부드럽게 흔들거나 휘젓습니다. 회수 용액으로 플레이트를 45분 동안 배양합니다. 배양 후에, 주의깊게 인큐베이터에서 격판덮개를 제거하고십시오, 세포를 펠릿하기 위하여 섭씨 20도에 5 분 동안 1, 409G에 격판덮개를 분리하십시오.
다음으로 세포 펠릿을 방해하지 않고 상층액을 조심스럽게 폐기하십시오. 멸균 PBS 220마이크로리터를 펠릿에 피펫팅합니다. 균일한 단일 셀 현탁액을 달성하기 위해 철저한 혼합을 보장합니다.
지방 유래 줄기 세포는 파종 및 광생물 조절 노출 후 24시간 동안 둥근 형태를 유지했습니다. 세포는 단일 세포 또는 포도 같은 클러스터로 겔 전체에 흩어져 있었습니다. 형태는 3D 배양에서 10일 후에도 변하지 않았습니다.
