시작하려면 배양된 세포에서 정제된 바이러스를 얻습니다. 초원심분리기 튜브를 다중 채널 연동 펌프의 출력 쪽에 있는 랙에 놓습니다. 혈청학적 피펫을 사용하여 각 초원심분리기 튜브에 10mL의 정제된 바이러스를 조심스럽게 분주합니다.
그런 다음 15% 요오딕산올 분획 22밀리리터를 깨끗한 50밀리리터 원추형 튜브에 옮깁니다. 펌프 오른쪽에 있는 모세관을 튜브에 넣고 펌프를 시작합니다. 펌프를 멈춥니다.
요오드딕산올 분획물이 펌프의 출력 측에 있는 모세관 끝에 도달하면 정제된 바이러스가 있는 각 초원심분리기 튜브에 출력 모세관을 삽입하고 펌프를 시작합니다. 15% 분획의 마지막 부분이 입력 모세관으로 들어가려고 할 때 펌프를 중지하십시오. 다음으로, 25 % 요오드화 산올 분획의 22 밀리리터를 15 밀리리터 원추형 튜브로 옮깁니다.
펌프를 켠 후 전체 분획을 입력 모세관으로 가져가 펌프를 중지합니다. 필요한 경우 60% 분획을 더 추가하고 용해물이 상단에 돔을 만들지만 넘치지 않을 때까지 각 튜브를 채웁니다. 펌프를 멈추고 출력 모세관을 조심스럽게 제거합니다.
초원심분리기 튜브에 스페이서를 씌우고 유형 70 TI 로터에 장착합니다. 원심분리 후 clamp 초원심분리기 튜브를 지지대에 놓습니다. 보푸라기가 없는 물티슈를 사용하여 초원심분리기 튜브에서 캡을 제거합니다.
그런 다음 20 게이지 바늘을 5 밀리리터 주사기에 부착하고 40 및 60 % 요오딕 산올 계면 아래 약 3 밀리리터의 바늘로 초원심 분리기 튜브의 벽을 관통합니다. 계면과 40%분율의 일부를 천천히 흡입합니다. 초원심분리기 튜브의 열린 상단 위에 한 손가락을 대고 주사기를 당겨 흡인된 AAV 분획을 50밀리리터 원뿔형 튜브로 옮깁니다.
마지막으로, 흡인 바이러스 분획을 AAV 용해 완충액에서 40밀리리터 부피로 2배로 희석합니다. 연동 튜브를 세척한 후 희석된 AAV 분획물 20mL를 두 번째 분획을 위해 새 초원심분리기 튜브에 로드합니다.
