시작하려면 3D 프린터를 컴퓨터에 연결하십시오. 바늘이 달린 1밀리리터 일회용 주사기를 3D 프린팅된 클램프에 넣습니다. 두 개의 M8 소켓 볼트를 사용하여 cl을 고정합니다.amp주사기 주위.
리드 스크류를 돌려 플런저를 수동으로 들어 올려 주사기에 2밀리리터의 에어 갭을 만듭니다. 비브리오 콜레라균 배양을 준비하려면 세포를 10개의 멸균 유리 구슬과 함께 3ml의 Luria 육수에 접종합니다. 섭씨 37도의 진탕 인큐베이터에서 5-6시간 동안 세포를 성장시킵니다.
마찬가지로, E.Coli를 3ml의 액체 Luria 육수에 접종하십시오. 섭씨 37도에서 하룻밤 배양 한 후 신선한 Luria 육수에 배양액 200 마이크로 리터를 3 시간 동안 접종합니다. 배양액을 10밀리리터 원심분리기 튜브로 옮깁니다.
그런 다음 실온에서 644G에서 5분 동안 원심분리합니다. 이제 상층액을 제거하고 10 마이크로 리터의 액체 Luria 국물에 펠릿을 재현탁시킵니다. 다음으로, 빈 3밀리리터 플라스틱 루어 잠금 주사기를 3D 바이오프린터에 넣습니다.
주사기 플런저를 리드 스크류로 연결합니다. 플런저를 더 잘 움직일 수 있도록 주사기를 수동으로 집어넣어 에어 갭을 옮깁니다. 적절한 크기의 뭉툭한 바늘을 주사기 팁에 부착합니다.
수동으로 나사를 돌려 주사기 플런저를 집어넣고 박테리아 현탁액을 주사기에 넣습니다. 과립형 하이드로겔 혼합물을 준비하려면 가교 아크릴산의 건조 과립을 400ml의 2% Lennox Luria-Bertani 육수와 혼합합니다. 10몰의 수산화나트륨을 500마이크로리터 증분하여 pH를 7.4로 조정하고 테스트 스트립에서 pH를 테스트합니다.
50mL 멸균 플라스틱 주사기를 사용하여 하이드로겔 혼합물을 50mL 원심분리기 튜브로 옮깁니다. 실온에서 1분 동안 161G에서 매트릭스를 원심분리합니다. 그런 다음 30밀리리터 주사기를 사용하여 필요한 부피의 매트릭스를 인쇄가 수행될 용기로 옮깁니다.
그런 다음 하이드로겔 매트릭스가 있는 샘플 용기를 프린터의 빌드 플랫폼에 있는 홀더에 놓습니다. 3D 프린팅 소프트웨어를 실행합니다. 파일을 클릭한 다음 파일 열기를 눌러 사전 프로그래밍된 gcode를 소프트웨어에 로드합니다.
이동 길이를 입력합니다. 그런 다음 X, Y, Z 평면을 이동하여 프린트 헤드를 X/Y 평면의 중앙에 놓습니다. 홈 아이콘을 눌러 Z축을 다시 조정합니다.
바늘 끝에 소량의 박테리아 현탁액이 보일 때까지 나사를 천천히 돌려 주사기 플런저를 누릅니다. 멸균 일회용 물티슈로 여분의 현탁액을 닦아냅니다. 이제 프린트 헤드를 샘플 용기의 하이드로겔 매체에 고정된 거리로 내립니다.
인쇄를 클릭하여 인쇄를 시작합니다. 인쇄가 완료되면 샘플 용기를 닫습니다. 주사기와 바늘을 적절하게 폐기하십시오.
70% 에탄올로 프린터를 닦습니다. 넓은 시야 이미징의 경우 줌 렌즈가 부착된 카메라를 사용하십시오. 실온에서 인쇄한 직후의 셀을 이미지화합니다.
그런 다음 샘플을 섭씨 37도의 인큐베이터로 옮깁니다. 매트릭스의 공극 크기의 차이는 비모달 세포 확산에 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다. 그러나 모달 세포는 작은 기공에 비해 더 큰 기공을 가진 매트릭스에서 더 빨리 퍼집니다.
더 큰 기공을 가진 하이드로겔 매트릭스의 비브리오 콜레라 군집은 부드러운 확산 기둥으로 퍼집니다. 확산 기둥은 비모달 세포에는 없었습니다. 더 작은 기공을 가진 하이드로겔 매트릭스의 콜로니는 모달 및 비모달 세포 모두에 대해 거칠고 프랙탈과 같은 기둥을 통해서만 퍼집니다.
두 세포 모두 처음 150시간 동안 비슷한 속도로 퍼지는 것이 관찰되었습니다. 그러나 장기간에 걸쳐 일부 샘플은 더 빠른 확산 속도를 보였습니다. 항복 응력, 저장 계수 및 손실 계수 감소가 실험 후 하이드로겔에서 관찰되었습니다.
