살아있는 질 마이크로바이옴을 연구하기 위해 인간 자궁 섬유아세포(HUF)로 장기 칩을 파종합니다.

먼저, 인간 자궁 섬유아세포의 70-90% 농도 배양을 실시합니다. 플라스크에서 매체를 흡입합니다. 5ml의 따뜻한 칼슘과 마그네슘이 없는 DPBS로 세포를 씻으십시오.

DPBS를 흡입한 후 각 플라스크에 4ml의 따뜻한 트립신 EDTA를 피펫팅합니다. 세포가 분리될 때까지 섭씨 37도에서 3-5분 동안 세포를 배양합니다. 다음으로, 각 플라스크에 6ml의 물방울과 중화 용액을 추가합니다.

그런 다음 셀 현탁액을 15밀리리터 원추형 튜브로 옮깁니다. 피펫을 사용하여 현탁액을 잘 섞고 세포 계수를 위해 10마이크로리터 부분 표본을 취합니다. 10 마이크로리터의 셀 현탁액을 10 마이크로리터의 트리판 블루와 혼합합니다.

세포 계수를 위해 염색된 세포 현탁액을 혈구계로 옮깁니다. 다음으로, 셀 현탁액을 실온에서 300G에서 5분 동안 원심분리합니다. 상층액을 흡인한 후 펠릿을 따뜻한 섬유아세포 매체에 재현탁시킵니다.

이제 미세유체 장기 칩의 기저 채널을 200마이크로리터의 섬유아세포 배지로 세척합니다. 그런 다음 200 마이크로 리터의 따뜻한 질 상피 배지로 정점 채널을 세척하십시오. 200 마이크로리터의 완전한 질 상피 배지를 정점 채널 입구에 추가하고 출구를 피펫 팁으로 막습니다.

입구와 출구 팁 부피가 같아질 때까지 매체를 분주합니다. 그런 다음 피펫에서 피펫 팁을 분리하고 팁을 입구에 남겨 둡니다. 인간 자궁 섬유아세포 현탁액 50마이크로리터를 기저 채널 입구로 천천히 피펫팅하면서 동시에 출구에서 흡인합니다.

피펫 팁에 약 2마이크로리터의 셀 현탁액이 남아 있을 때 주입구에서 피펫 팁을 제거합니다. 15밀리리터 튜브 랙에서 플러그 칩을 거꾸로 뒤집습니다. 배양 후 세포 부착을 위해 칩을 확인하십시오.

다음으로, 기저 채널의 출구를 피펫 팁으로 막습니다. 그런 다음 피펫 플런저를 아래로 누르지 않고 200마이크로리터의 섬유아세포 배지를 기저 채널 입구에 추가합니다. 피펫에서 팁을 분리하여 매체가 중력 흐름에 의해 채널을 통해 출구 피펫 팁으로 자유롭게 흐를 수 있도록 합니다.

섬유아세포 씨를 뿌린 칩을 섭씨 37도에서 밤새 배양하고 5%의 이산화탄소 보충제를 배양합니다.