Ligation Product의 정제, 위암에서 multi-gene SNP 검출을 위한 증폭 및 라이브러리 정제

시작하려면 섭씨 2도에서 8도의 냉장고에서 DNA 정제 마그네틱 비드를 제거합니다. 섞기 후에 2, 500G에 10 초 동안 구슬을 분리하십시오. 어댑터 결찰 반응 생성물을 1.5mL 저흡수 마이크로 원심분리기 튜브로 옮깁니다.

각 튜브에 45마이크로리터의 DNA 정제 마그네틱 비드를 추가합니다. 구성 요소를 소용돌이치게 한 후 튜브를 10초 동안 원심분리한 다음 튜브를 마그네틱 랙에 3분 동안 놓습니다. 비드를 피펫팅하지 않고 상층액을 조심스럽게 버리십시오.

이제 300 마이크로 리터의 75 % 갓 준비된 에탄올을 각 마이크로 원심 분리기 튜브에 옮깁니다. 튜브를 180도에서 4번 부드럽게 회전시킵니다. 용액이 제거되면 비드를 피펫팅하지 않도록 하면서 상층액을 즉시 버리십시오.

그런 다음 자석 랙에서 튜브를 제거한 후 튜브를 잠시 원심분리합니다. 튜브를 자석 랙에 놓고 남아 있는 액체를 피펫팅합니다. 1.5밀리리터 마이크로 원심분리기 튜브의 캡을 열고 비드를 실온에서 5분 동안 건조시킵니다.

PCR 관련 시약을 해동 및 와류시킨 후 10초 동안 시약을 원심분리합니다. 마그넷 랙에서 1.5밀리리터 마이크로 원심분리기 튜브를 제거하고 PCR 시약을 추가합니다. 튜브 벽과 덮개에 액체가 떨어지지 않도록 소용돌이 튜브를 잠시 원심분리합니다.

그런 다음 PCR 산물을 새 PCR 튜브로 옮깁니다. 열 순환기에서 배양하고 DNA 및 CDNA 샘플에 대한 증폭 프로그램을 실행합니다. 배양 후 PCR 튜브를 10초 동안 원심분리하고 제품을 새로운 1.5밀리리터 저흡수 마이크로 원심분리기 튜브로 옮깁니다.

각 튜브에 25 마이크로 리터의 DNA 정제 자성 비드를 첨가하고 소용돌이로 잘 혼합합니다. 튜브를 저속으로 원심분리하고 실온에서 5분 동안 배양합니다. 그런 다음 용액이 맑아질 때까지 튜브를 마그네틱 랙에 3분 동안 놓습니다.

상층액을 새로운 마이크로 원심분리기 튜브로 옮기고 비드가 피펫팅되지 않도록 합니다. 300 마이크로 리터의 75 % 갓 준비된 에탄올을 튜브에 옮기고 앞에서 설명한 것처럼 마그네틱 랙을 사용하여 비드를 두 번 세척합니다. 튜브를 잠시 원심분리한 후 튜브를 랙에 놓고 남아 있는 액체를 피펫팅합니다.

1.5밀리리터 튜브의 뚜껑을 열고 비드를 실온에서 5분 동안 건조시킵니다. 50 마이크로리터의 용리액을 튜브에 피펫팅합니다. 튜브를 소용돌이치게 한 후 간단한 원심분리를 수행합니다.

용액이 맑아질 때까지 튜브를 마그네틱 랙에 3분 동안 놓습니다. 액체를 새 튜브에 조심스럽게 옮기고 라이브러리 이름으로 레이블을 지정합니다.