Ocular Tissue Embedding and Cryosectioning in Optimal Cutting Temperature Compound for Fluorescence Imaging(형광 이미징을 위한 최적의 절단 온도 화합물에서의 안구 조직 삽입 및 냉동 절제술)

토끼 눈의 동결 보호가 완료된 후 30% 자당 용액에서 100mm 해부 접시로 옮깁니다. 해부 현미경으로 눈을 조심스럽게 뒤집어 눈 안쪽에서 과도한 자당 용액을 제거합니다. 물티슈를 사용하여 눈 바깥쪽의 과도한 자당 용액을 부드럽게 닦아내고 일회용 임베딩 몰드에 최적의 절단 온도 또는 OCT 화합물을 0.5-1cm 깊이로 채웁니다.

매립형 안에 눈을 위쪽을 향하게 놓고 눈 안쪽을 OCT 화합물로 천천히 채워 기포가 형성되지 않도록 합니다. OCT 컴파운드에서 눈이 나오고 금형의 내부 표면에 닿지 않으면 임베딩 금형을 파라핀으로 싸서 섭씨 4도에서 밤새 보관합니다. 다음 날, 임베딩 몰드를 해부 접시에 넣습니다.

가능하면 물티슈로 눈 안쪽의 OCT 화합물을 부드럽게 제거하십시오. 새로운 OCT 화합물로 채워진 새로운 임베딩 몰드로 눈을 옮깁니다. 그런 다음 이전과 같이 금형을 채워 최종 임베딩 매체에 파편이나 결함이 없는지 확인합니다.

방향을 잡기 위해 금형에 레이블을 지정합니다. 크라이오 몰드에서 눈을 위쪽으로 배치하여 OCT 화합물이 내부 망막 라인을 이루도록 합니다. 시신경두를 눈의 윗부분을 결정하기 위한 지표로 사용 라벨이 부착된 매립형 금형을 드라이아이스 위에 놓고 눈이 금형의 내부 표면에 닿거나 공기에 노출되지 않도록 합니다.

눈의 윗부분이 위를 향하고 아랫부분이 아래를 향하도록 하여 냉동 유지 장치에 블록을 장착합니다. 나머지 각막과 홍채는 오른쪽이나 왼쪽을 향합니다. 새 칼날을 눈의 수직 축과 평행하게 배치하여 절개합니다.

단면을 자르고 하룻밤 건조시킨 후 슬라이드를 섭씨 80도의 냉동고에 넣습니다. 토끼 눈의 전체 망막 냉동 절제술의 형광 이미지는 위에 있는 광수용체층에서 크게 분리되지 않고 균일한 색소 망막 색소 상피층을 보여주었습니다. 망막 절편의 명시야 이미지는 모든 층의 온전한 망막 형태를 더욱 보여줍니다.