Monochrome Multiplex Quantitative PCR(MMqPCR)을 사용한 텔로미어 길이 측정을 위한 시료 및 마스터 믹스 준비

말초 혈액 단핵 세포에서 추출한 게놈 DNA 샘플을 PCR 스트립 A, B 및 C에 각각 추가하는 것으로 시작합니다. 그런 다음 해동된 대조 DNA 부분 표본을 30초 동안 소용돌이칩니다. 튜브를 잠시 원심분리한 후 표준 곡선 PCR 튜브 스트립의 첫 번째 튜브에 전체 부피를 흡입합니다.

다음으로, 표준 곡선 PCR 스트립의 두 번째에서 여덟 개의 튜브에 70마이크로리터의 PCR 등급 물을 추가합니다. 그런 다음 첫 번째 튜브에서 대조 DNA를 재현탁시키고 두 번째 튜브로 70 마이크로리터를 흡인합니다. 30초 동안 기다렸다가 두 번째 튜브에 용액을 다시 현탁시킵니다.

마스터 믹스 시약을 수집하고 PCR 후드에서 실온에 도달하도록 합니다. 그런 다음 1 마이크로리터의 사이버 그린 분취액을 완충액 분취액에 첨가합니다. 모든 부분 표본을 10초 동안 소용돌이치고 5초 동안 원심분리합니다.

그런 다음 모든 마스터 믹스 시약과 프라이머의 지정된 양을 5밀리리터 베타인 튜브에 첨가합니다. 영하 20°C에서 DNA 중합효소를 꺼낸 후 10초 동안 소용돌이친 후 5초 동안 원심분리합니다. 원심분리가 완료되면 마스터 믹스에 128마이크로리터를 천천히 추가합니다.

5밀리리터 마스터 믹스 튜브를 30초 동안 소용돌이친 다음 따로 보관합니다.