텔로미어 길이 측정을 위한 MMqPCR(Monochrome Multiplex Quantitative PCR)용 96웰 플레이트 준비

먼저 두 개의 96웰 플레이트, 로딩 트러프 및 멀티채널 피펫 팁을 PCR 후드 내부에 놓습니다. 각 플레이트에 라벨을 붙인 후 플레이트 1을 180도 돌려 플레이트 2가 기술자를 향하도록 하면서 열 번호가 거꾸로 오도록 합니다. 그런 다음 제조된 MM qPCR 마스터 믹스의 5밀리리터 튜브를 로딩 트로프에 붓습니다.

피펫 팁을 사용하여 튜브의 모든 용액이 전달되었는지 확인합니다. 팁을 멀티채널 피펫에 부착하고 각 팁의 바닥을 눌러 단단히 밀봉합니다. 역 피펫팅을 사용하여 마스터 혼합물을 먼저 두 플레이트 사이를 번갈아 가며 모두 짝수 또는 홀수 컬럼에 분주합니다.

PCR 스트립을 소용돌이치게 하고 원심분리한 후 플레이트에 놓을 순서대로 튜브 랙에 배열합니다. 이제 두 플레이트를 180도 돌려 기술자를 기준으로 열 번호가 반전되도록 합니다. 멀티채널 피펫을 사용하여 PCR 스트립에 용액을 재현탁시킵니다.

역 피펫팅을 사용하여 각 플레이트의 처음 3개 열을 PCR 스트립 A로 채우고 마스터 믹스 배치와 같이 짝수 또는 홀수 열을 번갈아 가며 채웁니다. 90 마이크로리터로 설정된 200 마이크로리터 피펫을 사용하여 PCR 스트립 S에 7번째 표준 희석 튜브를 철저히 재현탁하고 플레이트의 4번째에서 6번째 열을 채웁니다. 플레이트를 채운 후 벤치 상단을 가볍게 두드려 웰의 액체가 바닥에 가라앉도록 합니다.

그런 다음 밀봉 필름으로 플레이트 상단을 덮고 손가락 끝으로 필름의 모든 가장자리를 눌러 단단히 밀봉되도록 합니다. 접시의 내용물을 섞으려면 후드 상단에서 30초 동안 휘젓습니다. 그런 다음 웰 개구부가 중앙을 향하도록 하여 밀봉된 플레이트를 플레이트 스피너에 2분 동안 놓습니다.

이제 열 번호를 읽을 수 있도록 플레이트를 thermocycler에 놓습니다. thermocycler 상단을 닫기 전에 깨끗한 티슈로 각 플레이트의 상단을 청소하십시오. 그런 다음 두 기계 모두에 대한 thermocycler 소프트웨어에서 실행 시작 버튼을 클릭합니다.

메시지가 표시되면 이 실험의 데이터에 레이블을 지정하고 추적하는 데 사용할 분석 파일의 제목을 입력합니다.