시작하려면 데스크톱 컴퓨터에서 데이터 분석 소프트웨어를 실행합니다. 파일을 클릭한 다음 브라우저를 클릭하고 폴더 선택을 선택하여 획득한 이미징 데이터가 포함된 폴더를 엽니다. 감염되지 않은 컨트롤을 포함하여 선택한 이미지와 관련된 여러 행을 선택하고 과포화 이미지를 제외합니다.
두 번째 이미징 세션 중에 등록된 정보와 함께 실험실 노트북에 이미지 ID를 기록합니다. load as group(그룹으로 로드)을 클릭하여 선택한 이미지를 조합합니다. 이제 저장 아이콘을 클릭하여 필요한 경우 원시 데이터를 다시 분석할 수 있도록 새 시퀀스 이미지를 새 폴더에 저장합니다.
그런 다음 옵션을 클릭한 다음 디스플레이를 클릭하고 비닝 팩터를 선택하여 각 이미지에 사용된 비닝을 식별합니다. 획득된 비닝 계수는 시퀀스의 각 이미지 상단에 표시됩니다. 모든 비닝 요소를 동일한 값으로 수정하려면 먼저 조정할 이미지를 두 번 클릭합니다.
tool pal 창에서 이미지 조정 옵션을 클릭한 다음 적절한 비닝 팩터를 선택합니다. 감염되지 않은 마우스 이미지를 두 번 클릭한 다음 단위 필드에서 counts 옵션을 선택합니다. 색상 눈금을 최소값인 600으로 조정합니다.
units 필드에서 방사형 옵션을 선택하여 결과 이미지의 광도를 확인합니다. 시퀀스 창이 활성화된 상태에서 units 필드에서 radiance 옵션을 선택합니다. 색상 스케일 제한 영역에서 개별 상자를 비활성화하여 도구 팔레트에서 색상 스케일과 색상 테이블을 조정합니다.
로그 스케일 및 수동 상자를 표시한 다음 감염되지 않은 컨트롤에 따라 최대 스케일 수를 설정하고 신호가 가장 높은 영역을 최대값으로 설정합니다. 모든 이미지에 대해 동일한 배율을 설정한 후 각 이미지를 두 번 클릭하고 창을 최대화한 다음 그래픽 내보내기 옵션을 사용하여 이미지 보기를 이미지 형식으로 내보냅니다. 처리별로 파일 이름을 지정한 다음 마우스 ID와 시점을 지정합니다.
시퀀스에서 이미지를 두 번 클릭합니다. 도구 팔레트 창에서 ROI 도구 섹션을 클릭한 다음 사각형 아이콘을 누릅니다. 전체 마우스 위에 사각형을 그립니다.
생성된 ROI의 테두리를 클릭하고 각 마우스에 대해 동일한 ROI를 복사하여 붙여넣습니다. 다음으로, 기록할 ROI의 이름을 지정합니다. 그런 다음 ROI 도구 섹션에서 저장 아이콘을 클릭합니다.
상자를 선택하고 시퀀스에 적용합니다. 그런 다음 로드를 클릭하여 모든 이미지에 대해 저장된 ROI를 적용합니다. 각 마우스에 대한 ROI의 위치를 조정하여 측정 영역에 더 잘 맞도록 합니다.
모든 마우스에 레이블이 지정되면 ROI 측정 옵션을 클릭합니다. ROI 측정 표가 나타나야 합니다. 측정 유형을 광도로 설정하고, 이미지는 가능한 모든 값에 속성을 부여하고, ROI 차원을 센티미터로 설정합니다.
그런 다음 모두 선택 옵션을 클릭 한 다음 복사를 클릭하십시오. 데이터를 테이블 분석 소프트웨어에 직접 붙여넣습니다. 데이터 열을 구성하여 그룹을 적절하게 정렬합니다.
다음으로, 스프레드시트에서 그룹별로 데이터를 색상으로 구분합니다. 총 플럭스 값을 동일한 마우스의 복부 및 등쪽 총 플럭스 값과 일치하도록 정렬합니다. 그런 다음 이를 합산하여 각 쥐의 전신 생물 발광을 얻습니다.
각 그룹에 대해 합산된 값의 평균과 표준 편차를 계산합니다. 데이터를 통계 소프트웨어에 플로팅하여 그래프를 생성합니다. 마지막으로 생물 발광 이미지가 있는 패널을 만듭니다.
각 마우스를 열에 배치하고 시점을 행에 배치하여 약물 효능 매트릭스를 구축합니다. 항기생충제를 평가하기 위해 생물발광법을 적용할 때, 약물 효능 매트릭스를 구축하여 여기에서 포사코나졸로 예시된 테스트 화합물을 샤가스병에 사용되는 표준 약물 치료제인 벤즈니다졸(kg당 100mg)과 비교합니다. 이 종단 연구에서는 감염 시간 경과를 치료받지 않은 그룹과 치료받은 그룹을 비교하여 설명합니다.
그 결과, 생물발광(bioluminescence)의 감소로 나타난 기생충 부담의 감소 또는 기생충 부하의 증가와 그에 따른 빛 감지로 나타나는 재발을 보여주며, 이는 비효율적인 화합물 또는 치료 요법을 시사합니다. 정량화된 빛은 감염 시간의 함수로 초당 광자의 복부 및 등쪽 총 플럭스의 합으로 표시됩니다.
