Single-Cell RNA sequencing and metabolomics를 위한 Rhesus macaque pancreatic islets의 세포 분획

먼저 분리된 붉은털원숭이 췌장 섬 조직을 얼음 위에서 해동합니다. 500마이크로리터의 0.1X 용해 완충액을 조직 펠릿에 추가합니다. 일회용 RNase-free 펠릿 유봉을 사용하여 얼음 위에서 조직을 15회 부드럽게 균질화합니다.

샘플을 얼음에 10분 동안 배양합니다. 그런 다음 균질액에 500마이크로리터의 세척 버퍼를 추가하고 얼음 위에서 피펫으로 부드럽게 혼합합니다. 30마이크로미터 사전 분리 필터에 300밀리리터의 세척 버퍼를 프라임하고 1밀리리터의 세포 균질액을 5밀리리터 튜브에 여과합니다.

여과된 균질액 500g을 섭씨 4도의 스윙 버킷 원심분리기에서 5분 동안 회전시킵니다. 피펫을 사용하여 상층액 1밀리리터를 얼음 위의 극저온으로 옮기고 향후 대사체학 실험을 위해 섭씨 영하 80도에서 즉시 얼립니다. 세척 완충액 1m리터를 핵 펠릿에 적하 방향으로 첨가하여 재현탁시킵니다.

1, 4개의 섭씨 온도에 진동하는 물통 분리기에 있는 5 분 동안 000g에 세척한 펠릿을 회전시키십시오. 세척을 반복한 후 핵을 1밀리리터의 세척 완충액에 재현탁시킵니다. 피펫을 사용하여 별도의 튜브에 각각 10마이크로리터의 핵 현탁액과 0.4%Trypan Blue를 혼합하고 혼합물을 자동 세포 카운터 슬라이드에 추가합니다.

마지막으로 세포 계수기를 사용하여 핵 농도를 측정합니다. 시퀀싱 실험을 위해 이상적인 온전한 핵을 얻었다. 유전자 발현 연구를 기반으로 고립된 태아, 비인간, 영장류 섬 내에서 세포 아형의 UMAP 클러스터링을 얻었습니다.

디히드록시아세톤 포스페이트, 글리세롤 3-포스페이트, 2-옥소글루타레이트, 크레아틴 및 글루타티온과 같은 아일렛 대사산물 풍부도를 세포질 분획을 사용하여 수득하였다.