먼저 100mg의 신선한 조직 또는 20mg의 공기 건조 조직을 2ml의 원심분리기 튜브에 넣습니다. 5mm 스테인리스 스틸 비드 2개를 원심분리기 튜브에 넣고 60Hz 동안 60Hz 동안 작동하는 고처리량 조직 분쇄기로 옮깁니다. DNA 추출을 위해 800마이크로리터의 사전 냉각된 핵 분리 완충액을 샘플에 추가하고 5분 동안 와류 믹서에 넣습니다.
그런 다음 샘플을 원심 분리기에 넣고 13, 780g에서 10 분 동안 회전시킵니다. 원심분리 후 상층액을 조심스럽게 제거하십시오. 다음으로, 600 마이크로리터의 Buffer P1을 추가한 다음 5 마이크로리터의 RNase A를 샘플에 추가합니다.
소용돌이 후 섭씨 65도의 수조에서 1.5시간 동안 샘플을 배양하고 배양 중에 튜브를 2-3번 뒤집습니다. 그런 다음 200마이크로리터의 버퍼 P2를 추가합니다. 잘 섞는다. 그리고 샘플을 얼음 위에 15분 동안 놓습니다.
그 후, 13, 780g에서 10 분 동안 원심 분리기. 상층액을 필터 컬럼 AF에 조심스럽게 흡입하고 13, 780g에서 2분 동안 원심분리합니다. 하부 여과액을 새 1.5밀리리터 원심분리기 튜브로 옮깁니다.
여과액의 부피를 계산한 후 Buffer P3 부피의 1.5배를 샘플에 추가하고 즉시 흔들어 샘플을 혼합합니다. 준비된 혼합물 650 마이크로 리터를 흡수 컬럼에 넣고 5 분 동안 배양합니다. 그런 다음 13, 780g에서 30-60초 동안 원심분리합니다.
얻어진 여과액을 다시 흡수 컬럼에 첨가하십시오. 폐액을 원심분리하여 폐기합니다. 600 마이크로 리터의 헹굼 용액 WB로 컬럼을 두 번 세척하십시오. 원심분리 후 폐액을 버리고 흡수 컬럼을 빈 수집 튜브에 넣습니다.
샘플을 13, 780g에서 2분 동안 원심분리한 후 실온에 두어 잔류 에탄올을 증발시킵니다. 흡수 컬럼을 깨끗한 1.5밀리리터 원심분리기 튜브에 옮기고 섭씨 65도로 예열된 45마이크로리터의 멸균 탈이온수를 흡착막 중앙에 추가합니다. 5분 후, 실온에서 2분 동안 13, 780g에서 튜브를 원심분리합니다.
그런 다음 분광 광도계를 사용하십시오. 여과된 용액의 DNA 농도를 측정합니다. OD260과 OD280의 흡광도 비율은 1.8에서 1.84 사이였으며 DNA 양은 마이크로리터당 100나노그램을 초과하여 추출된 DNA의 품질이 양호함을 확인했습니다.
