이 방법은 원소 화상 진찰 기술을 위한 수생 식물 뿌리, 주변 뿌리권 및 대량 토양을 준비하는 새로운 방법을 연구원에게 제공합니다. 이 방법의 주요 장점은 상대적으로 빠르고 저렴하면서도 관심 있는 요소의 분포와 표본을 정확하게 보존한다는 것입니다. 이 기술은 농업 시스템의 영양소에서 부터 태아 시스템의 오염 물질의 운명과 운송에 이르기까지 많은 요소와 식물 시스템에 관한 질문에 답하는 데 사용할 수 있습니다.
샘플링을 위해 루트 시스템의 원하는 영역이나 영역을 염두에 두면서 신속하게 작업해야 합니다. 그리고 루트 시스템당 여러 샘플을 채취하십시오. 실험을 위해 슬램 동결 장비를 준비하려면 액체 질소를 보유 할 수있는 깨끗한 쿨러에 수평으로 2, 5 에서 5 - 5 15 센티미터 구리 블록을 배치합니다.
그리고 적절한 PPE를 착용하고, 블록을 침수하기 위해 쿨러에 충분한 액체 질소를 부어. 버블링이 가라앉으면 구리 블록 한 블록의 양쪽 끝에 간격을 두습니다. 그런 다음 집게와 극저온 장갑을 사용하여 샘플이 제자리에 있을 때 검색이 더 쉬워집니다.
샘플을 수집하려면, 화분에 심은 식물을 사용하거나 습식 토양에서 원하는 식물과 뿌리 권구를 추출하기 시작하기 위해 삽을 사용하여, 파고 구멍이 원하는 뿌리 볼륨보다 훨씬 큰 것을 돌봐. 강철 블레이드를 사용하여 여분의 토양을 잘라 내고 원하는 지역 내의 토양을 방해하지 않도록주의하십시오. 원하는 영역이 도달하면 약 3~3~2센티미터 의 루트 큐브를 자르고, 즉시 수평 구리 블록에 있는 두 스페이서 사이에 큐브를 배치합니다.
시료의 슬램 동결을 위해 극저온 장갑을 사용하여 수직 구리 블록을 스페이서에 약 5분 동안 배치했습니다. 버블링이 가라앉으면 슬램 냉동 뿌리줄기 큐브 샘플을 미리 표지된 알루미늄 호일 사각형으로 옮길 수 있습니다. 토양 큐브를 동결하려면 동결 건조기가 적절한 진공 압력과 온도에 도달하면 냉동 뿌리 줄기 큐브 샘플 1 개를 청소 및 산 세척 50 밀리리터 튜브 또는 직접 냉동 건조기에 넣고 깨끗한 일회용 닦이를 사용하여 먼지가 진공 펌프에 유입되는 것을 방지합니다.
시료를 동결 건조기 용기에 넣고 건조할 때까지 최소 며칠 간 보관하십시오. 조직이 동결되면 강철 블레이드를 사용하여 토양 큐브를 해석에 적합한 크기로 말린 후 큐브를 진공 건조기 내부에 라벨이 부착된 형태로 배치합니다. 제조업체의 지시에 따라 에폭시를 준비한 후, 낙토를 사용하여 토양의 한쪽에 에폭시를 천천히 추가하여 에폭시가 완전히 샘플을 덮을 때까지.
에폭시가 토양을 적시면서 토양은 색으로 어두워집니다. 양식이 에폭시로 채워지면 건조기와 진공을 켭니다. 처음 1~4시간 동안 30~90분마다 에폭시의 레벨을 확인하고 필요한 경우 에폭시를 추가합니다.
에폭시가 경화되면 샘플을 제거합니다. 포함 후 다이아몬드 블레이드 정밀 젖은 톱을 사용하여 샘플을 절단하십시오. 이전 컷에서 뿌리가 얻어지지 않으면 샘플을 다른 방향으로 잘라냅니다.
트리밍 후 각 샘플의 절단 면을 모래 크기당 30초 동안 점진적으로 미세한 사포로 수동으로 모래를 비우습니다. 이 그림에서, 여러 루트 직경은 횡방향 섹션으로 토양 매트릭스 내에서 관찰 될 수있다. 뿌리는 다양한 수준의 품질을 입증할 수 있습니다.
예를 들어, 이 이미지에서는 잘 보존된 뿌리, 동결 건조 공정에 의해 왜곡된 뿌리, 얇은 단면 화 과정에서 뽑아낸 루트를 관찰할 수 있다. 시연된 바와 같이 동기론 x선 형광 이미징에 의해 세로 절개에서 측면 루트를 가진 이 루트 횡반 단면을 분석하면 철, 망간 및 비소의 검출이 가능합니다. 토양 내의 철의 존재와 철 플라크의 뿌리를 둘러싸고 있는 것은 또한 빛 현미경 이미지에서 볼 수 있습니다.
망간은 측면 뿌리의 피질 내에 고유하게 존재하지만, 또한 녹색 - 파란색 색조로 철 플라크 내의 일부 지역에서 철로 공동 국화합니다. 비소는 주로 1 차 뿌리의 혈관으로 병합 측면 뿌리의 혈관 내에서 발견된다. 화학적 스펙케이션 이미징은 비소 종의 국소화에 있는 가변성을 제시합니다.
이 삼색 플롯에서 관찰된 바와 같이, 아르세니트와 아르세니테 글루타티온은 혈관에 밀접하게 연관되어 있으며, 아상원은 주로 철플라크와 관련된 뿌리 의 외부 내에서 지역화된다. 샘플 수집 전에 원소 이미징을 위한 루트 시스템의 원하는 부분을 결정합니다. 이렇게 하면 제거된 루트 키의 위치 방향을 지시합니다.
이 프로토콜에 따라, 샘플은 특정 연구 질문, 관심요소 또는 사용 가능한 계측에 따라 다양한 기술을 사용하여 미크론 스케일 또는 거친 에서 이미지화될 수 있다.
