초기 단계 제브라피시 유충의 소분자 스크리닝 및 독성 테스트

시작하려면 수정 후 3일 후에 초기 단계의 제브라피시 배아를 페트리 접시에 모읍니다. 1000 마이크로리터 마이크로 피펫을 100 마이크로리터 부피로 설정하고 건강해 보이는 부화한 배아 하나를 96 웰 플레이트의 각 웰로 옮깁니다. 이제 필요한 양의 테스트 화학 물질을 12웰 플레이트의 각 웰에 피펫팅합니다.

그런 다음 E3 매체를 사용하여 총 부피를 2.4ml로 조정합니다. 원료 테스트 화학 물질을 용해하는 데 사용되는 용매에 따라 차량 제어를 준비합니다. 200마이크로리터 피펫을 사용하여 96웰 플레이트의 각 웰에서 기존 E3 용액을 제거합니다.

8채널 마이크로 피펫을 사용하여 각 농도에 대해 준비된 테스트 매체 100마이크로리터로 교체합니다. 농도당 총 24마리의 유충을 테스트하십시오. 24시간 후 실체 현미경을 사용하여 형태학적 스코어링을 수행합니다.

이진 방법을 사용하여 형태학에 점수를 매기며, 여기서 absent는 정상적인 형태학을 나타내고 present는 형태학적 이상을 나타냅니다. 스코어링이 완료되면 각 웰에서 50마이크로리터의 매체를 제거합니다. 갓 준비한 50마이크로리터의 테스트 매체로 교체하십시오.

죽은 유충을 제거하고 기록한 다음 섭씨 28.5도에서 14시간 조명과 10시간 어두운 주기로 유충을 배양합니다. 수정 후 5일째 되는 날의 제브라피쉬는 약물에 노출된 지 이틀 후에 다양한 표현형을 보였습니다. 영향을 받지 않은 얼룩말 물고기는 정상으로 관찰되었지만 일부 물고기에서는 가벼운 심낭 부종이 분명했습니다.

난황 출혈과 난황 확장을 동반한 심각한 심낭 부종이 다른 사람들에게서 관찰되었다. 색소 침착, 수영 방광 및 총 길이 감소로 인한 발달 지연도 관찰되었습니다. 추가 표현형에는 난황이 부풀어 오르고 꼬리 지느러미가 꼬인 제브라피쉬, 꼬리 지느러미가 없는 것, 구부러진 노토코드가 포함되었습니다.

심한 증례에서는 절단과 괴사를 동반한 사망이 나타났다.