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Adenovirus-mediated Genetic Removal of Signaling Molecules in Cultured Primary Mouse Embryonic Fibroblasts

The ability to genetically remove specific components of various cell signalling cascades has been an integral tool in modern signal transduction ...

University of Guelph

Src &#x540C;&#x6E90;&#x6027;&#x548C;&#x80F6;&#x539F; (&#x7279;&#x56F0;&#x60C5;&#x51B5;) &#x4F5C;&#x4E3A;&#x5206;&#x5B50;&#x63A5;&#x5408;&#x5668;&#x5728;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x56DB;&#x79CD;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7279;&#x56F0;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;ShcD &#x662F;&#x6700;&#x5C11;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x4E3A;&#x6B64;&#x76EE;&#x7684;&#xFF0C;ShcD &#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x662F;&#x8BB0;&#x8F7D;&#xFF0C;&#x76F8;&#x6BD4;&#x5176;&#x4ED6;&#x7279;&#x56F0;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x5728;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#xFF0C;ShcD &#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x7279;&#x56F0;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x4E0E; post-mitotic &#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E2D;&#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x5206;&#x5E03;&#x7684;&#x91CD;&#x53E0;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x9C81;&#x68D2; ShcD &#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x770B;&#x5230;&#x5185;&#x6709;&#x533A;&#x522B;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x673A;&#x5173;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x3001; &#x5FC3;&#x810F;&#x808C;&#x8089;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5D74;&#x6765;&#x6E90;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x7279;&#x56F0;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x6210;&#x5458;&#x8868;&#x793A;&#x80A5;&#x5927;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5728;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x9AA8;&#x67B6;&#x4E2D;&#x7684;&#x7279;&#x56F0;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x62A5;&#x544A;&#x3002;&#x552F;&#x4E00;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5206;&#x5E03;&#x683C;&#x5C40;&#x7684;&#x7279;&#x56F0;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53EF;&#x80FD;&#x5728;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x751F;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x8D21;&#x732E;&#x53CA;&#x5176;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x4FE1;&#x53F7;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x80B2;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684; ShcD &#x548C;&#x7279;&#x56F0;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;

The Src homology and collagen (Shc) proteins function as molecular adaptors in signaling pathways mediated by a variety of cell surface receptors. Of the four mammalian Shc proteins, ShcD is the least characterized. To this end, ShcD expression was documented and compared to that of other Shc family proteins. In the developing mouse embryo, expression of ShcD overlaps with that of other Shc proteins in the central nervous system, with specific distribution in post-mitotic neurons. In addition, robust ShcD expression is seen within differentiated epithelial cells of several organs, as well as in skeletal and cardiac muscle, and various tissues of neural crest origin. Interestingly, all Shc family members are expressed in hypertrophic chondrocytes, the first report of Shc protein expression in the developing skeleton. The unique tissue distribution patterns of Shc proteins likely contribute to their complex tissue-specific signaling functions during embryogenesis.

Expression patterns of ShcD and Shc family adaptor proteins during mouse embryonic development.

Le homologie Src et le collag&#xE8;ne (SHC) les prot&#xE9;ines fonctionnent comme des adaptateurs mol&#xE9;culaires dans les voies de signalisation m&#xE9;di&#xE9;es par une vari&#xE9;t&#xE9; de r&#xE9;cepteurs de surface cellulaire. Parmi les quatre mammif&#xE8;res prot&#xE9;ines Shc, SHCD est le moins caract&#xE9;ris&#xE9;. &#xC0; cette fin, l&#x26;#39;expression SHCD a &#xE9;t&#xE9; document&#xE9;e et compar&#xE9;e &#xE0; celle d&#x26;#39;autres prot&#xE9;ines de la famille Shc. Dans l&#x26;#39;embryon de souris en d&#xE9;veloppement, l&#x26;#39;expression de chevauchements SHCD avec celle d&#x26;#39;autres prot&#xE9;ines Shc dans le syst&#xE8;me nerveux central, avec une distribution sp&#xE9;cifique dans les neurones post-mitotiques. En outre, robuste expression SHCD est vu dans les cellules &#xE9;pith&#xE9;liales diff&#xE9;renci&#xE9;es de plusieurs organes, ainsi que dans le muscle squelettique et cardiaque, et des tissus divers d&#x26;#39;origine de la cr&#xEA;te neurale. Fait int&#xE9;ressant, tous les membres de la famille Shc sont exprim&#xE9;s en chondrocytes hypertrophiques, le premier rapport de l&#x26;#39;expression des prot&#xE9;ines Shc dans le squelette en d&#xE9;veloppement. Les mod&#xE8;les uniques de distribution tissulaire des prot&#xE9;ines Shc susceptibles de contribuer &#xE0; leurs complexes tissu-sp&#xE9;cifiques des fonctions de signalisation lors de l&#x26;#39;embryogen&#xE8;se.

Profils d&#x26;#39;expression de la SHCD et Shc prot&#xE9;ines Adaptateur famille Pendant embryonnaire de la souris de d&#xE9;veloppement

Der Src-Homologie und Kollagen (Shc) Proteine fungieren als molekulare Adapter in Signalisierung Wege, die von einer Vielzahl von Oberfl&auml;chen Zellrezeptoren vermittelt. Von den vier S&auml;ugetierproteine Shc ist ShcD die wenigsten gekennzeichnet. Zu diesem Zweck wurde ShcD Ausdruck dokumentiert und im Vergleich zu anderen Familien Shc-Proteinen. In der dritten Maus-Embryo &uuml;berlappt Ausdruck des ShcD mit der anderen Shc-Proteinen in das zentrale Nervensystem mit bestimmten Distribution in post-mitotic Neuronen. Dar&uuml;ber hinaus differenziert robuste ShcD Ausdruck innerhalb gesehen ist Epithelzellen von mehreren Organen sowie Skelett und Herz-Muskel und verschiedenen Geweben Neuralleiste Ursprungs. Interessanterweise sind alle Mitglieder der Shc-Familie in hypertrophen Chondrozyten, der erste Bericht von Shc-Proteinexpression in den Entwicklungsl&auml;ndern Skelett ausgedr&uuml;ckt. Die einzigartige Gewebe-Verteilungsmuster der Shc-Proteine, die wahrscheinlich dazu beitragen, ihre komplexen Gewebe-spezifischen Signalling Funktionen w&auml;hrend der Embryogenese.

Ausdrucksmuster ShcD und Shc Familie Adapter-Proteine w&auml;hrend der Embryonalentwicklung der Maus.

La Src homology e collagene (Shc) proteine fungono da adattatori molecolari nel signaling pathways mediata da una variet&agrave; di recettori di superficie delle cellule. Delle quattro proteine Shc mammiferi, ShcD &egrave; meno caratterizzata. A tal fine, ShcD espressione &egrave; stato documentato e paragonato a quello di altre proteine della famiglie Shc. Nell&#39;embrione di topo in via di sviluppo, espressione di ShcD si sovrappone con quello di altre proteine Shc nel sistema nervoso centrale, con specifica distribuzione nei neuroni post-mitotic. Inoltre, robusto ShcD espressione &egrave; visto all&#39;interno differenziato cellule epiteliali degli organi diversi, cos&igrave; come nel muscolo scheletrico e cardiaco e vari tessuti di origine cresta neurale. Curiosamente, tutti i membri della famiglia Shc sono espressi in condrociti ipertrofica, la prima relazione di espressione della proteina Shc nello scheletro in via di sviluppo. I modelli di distribuzione tessuto unico delle proteine Shc probabilmente contribuiscono alla loro complesse tessuto-specifica segnalazione funzioni durante l&#39;embriogenesi.

Modelli di espressione delle proteine di famiglia adattatore ShcD e Shc durante lo sviluppo embrionale del mouse.

Src&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x3068;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#xFF08;SHC&#xFF09;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x5A92;&#x4ECB;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 4&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;Shc&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x3046;&#x3061;&#x3001;ShcD&#x304C;&#x7279;&#x5FB4;&#x306E;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;ShcD&#x5F0F;&#x304C;&#x6587;&#x66F8;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;Shc&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x5F8C;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x3001;&#x767A;&#x5C55;&#x9014;&#x4E0A;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x5185;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;Shc&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3068;&#x91CD;&#x306A;&#x308B;ShcD&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x5805;&#x7262;&#x306A;ShcD&#x5F0F;&#x306F;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x81D3;&#x5668;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x9AA8;&#x683C;&#x7B4B;&#x53CA;&#x3073;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x5824;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306B;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;Shc&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306F;&#x80A5;&#x5927;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3001;&#x30B9;&#x30B1;&#x30EB;&#x30C8;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;Shc&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x5831;&#x544A;&#x3067;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002; Shc&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x7D44;&#x7E54;&#x5206;&#x5E03;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x80DA;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x7D44;&#x7E54;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x4E2D;ShcD&#x3068;Shc&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;

Src homology&#xACFC; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; (Shc) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B4;&#xB311;&#xD130; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC791;&#xB3D9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; Shc &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; Shcd&#xB294; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC774;. &#xC774; &#xC704;&#xD574; ShcD &#xC2DD; &#xC124;&#xBA85; &#xC774;&#xC5C8;&#xACE0; &#xB2E4;&#xB978; Shc &#xAC00;&#xC871; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50;. Shcd&#xC758; &#xC2DD; post-mitotic &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC815; &#xBD84;&#xD3EC;&#xC640; &#xC911;&#xC559; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB978; Shc &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC911;&#xBCF5; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C;. &#xB610;&#xD55C;, &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; ShcD &#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF8; &#xACE8;&#xACA9;&#xACFC; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xADFC;&#xC721;&#xACFC; &#xC2E0;&#xACBD;&#xB3C4;&#xAC00; &#xBA38;&#xB9AC; &#xC720;&#xB798;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAE30;&#xAD00;&#xC758; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xBAA8;&#xB4E0; Shc &#xAC00;&#xC871; hypertrophic chondrocytes, Shc &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBF08;&#xB300;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DD;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; Shc &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xC870;&#xC9C1; &#xBD84;&#xD3EC; &#xD328;&#xD134; embryogenesis &#xB3D9;&#xC548; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC870;&#xC9C1; &#xAD00;&#xB828; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC30;&#xC544; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; Shcd&#xC640; Shc &#xAC00;&#xC871; &#xC5B4;&#xB311;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC2DD;&#xC774; &#xD328;&#xD134;.

La homolog&#xED;a Src y col&#xE1;geno (SHC) prote&#xED;nas funcionan como adaptadores moleculares en las v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n mediadas por una variedad de receptores de superficie celular. De las cuatro prote&#xED;nas de mam&#xED;feros SHC, ShcD es el menos caracterizado. Para este fin, la expresi&#xF3;n ShcD se document&#xF3; y se compar&#xF3; con la de otras prote&#xED;nas de la familia SHC. En el embri&#xF3;n de rat&#xF3;n en desarrollo, la expresi&#xF3;n de solapa ShcD con la de otras prote&#xED;nas SHC en el sistema nervioso central, con una distribuci&#xF3;n espec&#xED;fica de las neuronas post-mit&#xF3;tico. Adem&#xE1;s, la expresi&#xF3;n ShcD s&#xF3;lido se ve en las c&#xE9;lulas epiteliales diferenciadas de varios &#xF3;rganos, as&#xED; como en el m&#xFA;sculo esquel&#xE9;tico y card&#xED;aco, y diversos tejidos de origen de la cresta neural. Curiosamente, todos los miembros de la familia en situaci&#xF3;n especialmente dif&#xED;cil se expresan en condrocitos hipertr&#xF3;ficos, el primer informe de la expresi&#xF3;n de la prote&#xED;na Shc en el desarrollo del esqueleto. Los patrones de tejidos exclusivos de distribuci&#xF3;n de las prote&#xED;nas SHC probablemente contribuyen a sus complejos tejidos espec&#xED;ficos de las funciones de se&#xF1;alizaci&#xF3;n durante la embriog&#xE9;nesis.

Steve P. Hawley

Department of Molecular and Cellular Biology

University of Guelph

Adenovirus-mediated Genetic Removal of Signaling Molecules in Cultured Primary Mouse Embryonic Fibroblasts

Steve P. Hawley

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Molecular and Cellular Biology

University of Guelph

Adenovirus-mediated Genetic Removal of Signaling Molecules in Cultured Primary Mouse Embryonic Fibroblasts

Department of Molecular and Cellular Biology