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Determining Cell Number During Cell Culture using the Scepter Cell Counter

Counting cells is often a necessary but tedious step for in vitro cell culture. Consistent cell concentrations ensure experimental reproducibility and ...

Millipore Inc

&#x51E0;&#x4E2A; RNA &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5BCC;&#x542B;&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x57DF;&#x8868;&#x660E;&#x8981;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5B64;&#x7ACB;&#x7684;&#x80BD;&#xFF0C;&#x91C7;&#x7528;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x5185;&#x4E0D;&#x540C;&#x6784;&#x8C61;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5176;&#x540C;&#x6E90; Rna &#x4E0E;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x5E8F;&#x5217;&#x7B80;&#x5355;&#x548C;&#x5BCC;&#x542B;&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x6BCD;&#x9898;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x4F7F;&#x5F97;&#x6784;&#x5EFA;&#x7EC4;&#x5408;&#x5E93;&#x5E76;&#x786E;&#x5B9A;&#x65B0;&#x578B; RNA &#x7ED3;&#x5408;&#x80BD;&#x3001; &#x5305;&#x62EC;&#x90A3;&#x4E9B;&#x9488;&#x5BF9;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x51AF;&#x54CD;&#x5E94;&#x5143;&#x7D20; &#xFF08;&#x91CD;&#x91CD;&#xFF09; &#x4E00;&#x4E2A;&#x826F;&#x597D;&#x7684;&#x6846;&#x67B6;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4F7F;&#x6BD4;&#x4EE5;&#x524D;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x8F83;&#x5927;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x5C4F;&#x5E55; &#xFF08;&#x7EA6; 10(9) &#x5E8F;&#x5217;&#xFF09; &#x7684;&#x5361;&#x90A3;&#x9709;&#x7D20;&#x6297;&#x6027;&#x57FA;&#x56E0;&#x6539;&#x6027;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55; antitermination &#x8BB0;&#x8005;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x68C0;&#x6D4B;&#x53EA;&#x6709;&#x7279;&#x5B9A; RNA-&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x4F53;&#xFF0C;&#x548C;&#x6BCF;&#x4E00;&#x8F6E;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x81F3;&#x5C11; 300-fold &#x4E30;&#x5BCC;&#x4E86;&#x7C98;&#x5408;&#x5242;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7504;&#x522B;&#x5927;&#x80BD;&#x5E93;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x4E0E;&#x88AB;&#x63A7;&#xFF0C;&#x6781;&#x5730;&#xFF0C;&#x548C;&#x5C0F;&#x4FA7;&#x94FE;&#x805A;&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178;&#x6846;&#x67B6;&#x5185;&#x968F;&#x673A;&#x6D3E;&#x548C;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x4E00;&#x5957;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x91CD;&#x91CD;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x591A;&#x80BD;&#x3002;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x5305;&#x542B;&#x5728;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x80BD;&#x4F4D;&#x7F6E;&#xFF0C;&#x8C37;&#x6C28;&#x9170;&#x80FA;&#x548C;&#x6700;&#x4F73;&#x591A;&#x80BD;&#x663E;&#x793A;&#x6BD4;&#x51AF;&#x6216;&#x5176;&#x4ED6;&#x524D;&#x9762;&#x6240;&#x8FF0;&#x7684;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x91CD;&#x91CD;&#x7ED3;&#x5408;&#x80BD;&#x660E;&#x663E;&#x9AD8;&#x4E8E; antitermination &#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x5361;&#x90A3;&#x9709;&#x7D20; antitermination (&#x83C5;&#x76F4;&#x4EBA;) &#x6D4B;&#x5B9A;&#x5E94;&#x662F;&#x6709;&#x76CA;&#x7684;&#x7B5B;&#x9009;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8F83;&#x5927;&#x7684;&#x56FE;&#x4E66;&#x9986;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x65B0;&#x578B; RNA &#x7C98;&#x5408;&#x5242;&#x7684;&#x9274;&#x5B9A;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528;&#x5361;&#x90A3;&#x9709;&#x7D20; antitermination &#x6D4B;&#x5B9A;&#x7684;&#x91CD;&#x91CD; RNA &#x7ED3;&#x5408;&#x80BD;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x3002;

The arginine-rich domains of several RNA-binding proteins have been shown to bind their cognate RNAs with high affinities and specificities as isolated peptides, adopting different conformations within different complexes. The sequence simplicity and structural diversity of the arginine-rich motif has made it a good framework for constructing combinatorial libraries and identifying novel RNA-binding peptides, including those targeted to the HIV Rev response element (RRE). Here we describe a modified transcription antitermination reporter assay engineered with kanamycin resistance that enables larger in vivo screens (approximately 10(9) sequences) than previously possible. We show that the assay detects only specific RNA-protein complexes, and that binders are enriched at least 300-fold per round of selection. We screened a large peptide library in which amino acids with charged, polar, and small side chains were randomly distributed within a polyarginine framework and identified a set of high affinity RRE-binding peptides. Most contain glutamine at one particular peptide position, and the best peptides display significantly higher antitermination activities than Rev or other previously described high-affinity RRE-binding peptides. The kanamycin antitermination (KAN) assay should be useful for screening relatively large libraries and thereby facilitate identification of novel RNA binders.

Selection of RRE RNA binding peptides using a kanamycin antitermination assay.

Les domaines riches en arginine de plusieurs prot&eacute;ines de liaison &agrave; l&#39;ARN ont &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute;s pour lier leur ARN apparent&eacute;s avec affinit&eacute;s &eacute;lev&eacute;es et les sp&eacute;cificit&eacute;s des peptides isol&eacute;s, adoptant des conformations diff&eacute;rentes dans diff&eacute;rents complexes. La simplicit&eacute; de la s&eacute;quence et la diversit&eacute; structurale du motif riche en arginine a fait un bon cadre pour construire des biblioth&egrave;ques combinatoires et identifier de nouveaux peptides de liaison &agrave; l&#39;ARN, y compris ceux vis&eacute;s &agrave; l&#39;&eacute;l&eacute;ment de r&eacute;ponse de Rev VIH (RRE). Nous d&eacute;crivons ici une analyse de journaliste antiterminaison de transcription mis &agrave; jour le con&ccedil;u avec une r&eacute;sistance &agrave; la kanamycine qui permet aux plus grands &eacute;crans in vivo (environ 10 9 s&eacute;quences) qu&#39;auparavant. Nous montrons que le test d&eacute;tecte uniquement les complexes ARN-prot&eacute;ine sp&eacute;cifiques, et que les liants sont enrichis au moins 300 fois par tour de s&eacute;lection. Nous avons projet&eacute; une biblioth&egrave;que grand peptide dont acides amin&eacute;s ayant accus&eacute;, polaire, et cha&icirc;nes lat&eacute;rales petites ont &eacute;t&eacute; r&eacute;parties al&eacute;atoirement dans un cadre d&#39;arginine et a identifi&eacute; un ensemble de peptides de RRE-liaison de haute affinit&eacute;. La plupart contiennent glutamine post&eacute;es sur un peptide particulier, et les peptides meilleurs affichent significativement plus &eacute;lev&eacute;es d&#39;activit&eacute;s antiterminaison que Rev ou autres peptides de RRE-liaison de haute affinit&eacute; d&eacute;crits pr&eacute;c&eacute;demment. La kanamycine antiterminaison (KAN) devrait &ecirc;tre utile pour le d&eacute;pistage de relativement grandes biblioth&egrave;ques et ainsi faciliter l&#39;identification de nouveaux liants RNA.

S&eacute;lection des peptides de liaison ARN RRE &agrave; un dosage antiterminaison kanamycine.

Auswahl der RRE-RNA bindenden Peptide mit einem Kanamycin Antitermination Assay.

I domini ricchi di arginina di diversi RNA-binding proteins hanno dimostrati di associare loro RNAs imparentata con alta affinit&agrave; e specificit&agrave; come peptidi isolati, adottando diverse conformazioni all&#39;interno di diversi complessi. La semplicit&agrave; di sequenza e la diversit&agrave; strutturale del motivo ricco di arginina ha fatto un buon quadro per costruire biblioteche combinatorie e identificare nuovi peptidi di RNA-binding, compresi quelli destinati all&#39;elemento di risposta HIV Rev (RRE). Qui descriviamo un dosaggio antitermination reporter trascrizione modificato progettato con resistenza alla kanamicina che consente pi&ugrave; grandi schermi in vivo (circa arrecavano sequenze) pi&ugrave; possibile in precedenza. Dimostriamo che il test rileva solo specifici complessi RNA-proteine, e che i leganti sono arricchiti almeno 300-fold per ogni turno di selezione. Abbiamo proiettato una libreria grande peptide in cui gli amminoacidi con carica, polar, e catene laterali sono state distribuite in modo casuale all&#39;interno di un quadro polyarginine e individuato una serie di peptidi RRE-legame ad alta affinit&agrave;. La maggior parte contengono glutammina in una posizione particolare del peptide, e i peptidi migliori visualizzazione attivit&agrave; antitermination significativamente pi&ugrave; alta rispetto a Rev o altri peptidi di RRE-associazione ad alta affinit&agrave; precedentemente descritte. Il kanamicina antitermination (KAN) dosaggio dovrebbe essere utile per lo screening relativamente grandi biblioteche e quindi facilitare l&#39;identificazione di nuovi leganti RNA.

Selezione dei peptidi associazione RRE RNA usando un dosaggio antitermination kanamicina.

&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E; RNA &#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3; &#x30FB; &#x30EA;&#x30C3;&#x30C1; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x932F;&#x4F53;&#x5185;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5B64;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x540C;&#x65CF;&#x306E; Rna &#x9AD8;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3068;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x30B7;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3055;&#x3068;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x304C;&#x4F5C;&#x3063;&#x305F;&#x305D;&#x308C;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D3;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB; &#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3068; HIV Rev &#x5FDC;&#x7B54;&#x8981;&#x7D20; (RRE) &#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x65B0;&#x898F;&#x306E; RNA &#x7D50;&#x5408;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x826F;&#x3044;&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x306B;&#x4EE5;&#x524D;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x306E; in vivo &#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30F3; &#xFF08;&#x7D04; 10 (9) &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#xFF09; &#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x30AB;&#x30CA;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x62B5;&#x6297;&#x8A2D;&#x8A08;&#x5909;&#x66F4;&#x8EE2;&#x5199; antitermination &#x306E;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x307F;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E; RNA &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x932F;&#x4F53;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C0;&#x30FC;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x306E;&#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x3042;&#x305F;&#x308A;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082; 300 &#x6FC3;&#x7E2E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C3;&#x30C9; &#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x4E2D;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306F;&#x3001;&#x6975;&#x3001;&#x5145;&#x96FB;&#x3068;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x5074;&#x9396; polyarginine &#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x5185;&#x3067;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x306B;&#x5206;&#x5E03;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x89AA;&#x548C;&#x6027; RRE &#x7D50;&#x5408;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x4E0A;&#x6620;&#x3002;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069; 1 &#x3064;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x6700;&#x9AD8;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; Rev &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4ED6;&#x524D;&#x8FF0;&#x306E;&#x9AD8;&#x89AA;&#x548C;&#x6027; RRE &#x7D50;&#x5408;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044; antitermination &#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AB;&#x30CA;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3; antitermination &#xFF08;&#x83C5;&#xFF09; &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x6709;&#x7528;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x65B0;&#x898F; RNA &#x7D50;&#x5408;&#x5264;&#x306E;&#x8B58;&#x5225;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3057;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;

&#x30AB;&#x30CA;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3; antitermination &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F; RRE RNA &#x7D50;&#x5408;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x3002;

&#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC1C;&#xC758; RNA &#xC758;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC;&#xC774; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;, &#xB2E4;&#xB978; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xB0B4; &#xB2E4;&#xB978; conformations &#xCC44;&#xD0DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xB192;&#xC740; &#xCE5C; &#xD654;&#xB825; &#xBC0F; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB3D9;&#xC871; RNAs &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xB2E8;&#xC21C;&#xC640; &#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC;&#xC774; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131; &#xC870;&#xD569; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xB97C; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; HIV &#xACC4; &#xC751;&#xB2F5; &#xC694;&#xC18C; (RRE)&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; RNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC88B;&#xC740; &#xD504;&#xB808;&#xC784; &#xC6CC;&#xD06C;&#xB97C; &#xC81C;&#xCD9C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC774;&#xC804; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xD070; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xD654;&#xBA74; (&#xC57D; 10(9) &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;) &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; kanamycin &#xC800;&#xD56D; &#xC124;&#xACC4; &#xC218;&#xC815;&#xB41C; &#xC804;&#xC0AC; antitermination &#xAE30;&#xC790; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xD2B9;&#xC815; RNA-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB354; &#xC120;&#xD0DD;&#xC758; &#xB77C;&#xC6B4;&#xB4DC; &#xB2F9; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; 300-fold &#xB18D;&#xCD95; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC0C1;&#xC601; &#xB300;&#xD615; &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xB294; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC73C;&#xB85C; &#xCDA9;&#xC804;, &#xADF9; &#xC9C0;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC791;&#xC740; &#xCE21;&#xBA74; &#xCCB4;&#xC778;&#xACFC; polyarginine &#xD504;&#xB808;&#xC784; &#xC6CC;&#xD06C; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBB34;&#xC791;&#xC704;&#xB85C; &#xBC30;&#xD3EC; &#xD588;&#xB2E4; &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; RRE &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xC9D1;&#xD569;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xD2B9;&#xC815; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xAE00;&#xB8E8;&#xD0C0;&#xBBFC; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xCD5C;&#xACE0;&#xC758; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xACC4; &#xB610;&#xB294; &#xAE30;&#xD0C0; &#xC55E;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC124;&#xBA85;&#xD55C; &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; RRE &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xB192;&#xC740; antitermination &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Kanamycin antitermination (&#xCE78;) &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD070; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xB97C; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC720;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xB85C; &#xC778;&#xD558;&#xC5EC; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; RNA &#xBC14;&#xC778;&#xB354;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

RRE RNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; kanamycin antitermination &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC120;&#xD0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Han demostrado los dominios ricos en arginina de varias prote&iacute;nas de uni&oacute;n de ARN para enlazar sus RNAs cognados con alta afinidad y especificidades como p&eacute;ptidos aislados, adoptar conformaciones diferentes en diferentes complejos. La simplicidad de la secuencia y diversidad estructural del motivo ricos en arginina ha hecho un buen marco para construir librer&iacute;as combinatorias e identificar nuevos p&eacute;ptidos de uni&oacute;n de ARN, incluyendo a quienes van dirigidos al elemento de respuesta Rev del VIH (RRE). Aqu&iacute; describimos un ensayo de reportero antitermination transcripci&oacute;n modificados con resistencia a la kanamicina que permite pantallas en vivo m&aacute;s grandes (aproximadamente 10 (9) secuencias) que previamente posible. Mostramos que el ensayo detecta s&oacute;lo espec&iacute;ficos complejos RNA-prote&iacute;na, y que carpetas se enriquecen al menos 300-fold por ronda de selecci&oacute;n. Defendimos a una biblioteca de p&eacute;ptido grande en que los amino&aacute;cidos con carga, polar, y cadenas laterales peque&ntilde;os se distribuyeron al azar dentro de un marco polyarginine y determin&oacute; un conjunto de p&eacute;ptidos RRE Uni&oacute;n de alta afinidad. La mayor&iacute;a contienen glutamina en una posici&oacute;n particular del p&eacute;ptido y los p&eacute;ptidos mejores Mostrar actividades antitermination significativamente mayores que Rev u otros p&eacute;ptidos de RRE Uni&oacute;n de alta afinidad previamente descritos. El ensayo (KAN) antitermination de kanamicina debe ser &uacute;til para la detecci&oacute;n relativamente grandes bibliotecas y as&iacute; facilitar la identificaci&oacute;n de nuevas carpetas de RNA.

Selecci&oacute;n de p&eacute;ptidos de enlace RRE RNA usando un an&aacute;lisis antitermination de kanamicina.

&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#xFF0C;RNA &#x7ED3;&#x5408;&#x80BD;&#xFF0C;&#x548C;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x5E93;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x5E8F;&#x5217;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x8BC6;&#x522B;&#x7279;&#x5B9A; RNA &#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;&#x5927;&#x6279;&#x5E8F;&#x5217;&#x80FD;&#x591F;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x67D0;&#x4E00;&#x7279;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x9274;&#x5B9A;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53D1;&#x80B2;&#x4FE1;&#x606F;&#xFF0C;&#x7528;&#x6765;&#x63A8;&#x65AD;&#x51FA;&#x8BC6;&#x522B;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x539F;&#x5219;&#x3002;&#x5728;&#x5F88;&#x5927;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x5E93;&#x4E2D;&#x627E;&#x5230;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x662F;&#x5728;&#x54EA;&#x4E2A; RNA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x9891;&#x7387;&#x5F88;&#x9AD8;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x5408;&#x7406;&#x8DEF;&#x7EBF;&#x8FDB;&#x5316;&#x7279;&#x5B9A;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x7C98;&#x5408;&#x5242;&#xFF0C;&#x4FBF;&#x5229;&#x7684;&#x65B0;&#x7ED3;&#x5408;&#x5206;&#x5B50;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x548C;&#x4E5F;&#x8BB8;&#x53CD;&#x6620;&#x4E86;&#x81EA;&#x7136;&#x6F14;&#x5316;&#x7279;&#x5F81;&#x3002;

RNA &#x7ED3;&#x5408;&#x80BD;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x7A7A;&#x95F4;&#x3002;

Studies of RNA-binding peptides, and recent combinatorial library experiments in particular, have demonstrated that diverse peptide sequences and structures can be used to recognize specific RNA sites. The identification of large numbers of sequences capable of binding to a particular site has provided extensive phylogenetic information used to deduce basic principles of recognition. The high frequency at which RNA-binding peptides are found in large sequence libraries suggests plausible routes to evolve sequence-specific binders, facilitating the design of new binding molecules and perhaps reflecting characteristics of natural evolution.

Sequence and structure space of RNA-binding peptides.

En particulier, des &eacute;tudes de peptides de liaison &agrave; l&#39;ARN et les r&eacute;centes exp&eacute;riences de biblioth&egrave;ques combinatoires ont d&eacute;montr&eacute; que des structures et des s&eacute;quences peptidiques divers permet de reconna&icirc;tre les sites sp&eacute;cifiques de RNA. L&#39;identification d&#39;un grand nombre de s&eacute;quences capables de se lier &agrave; un site particulier a fourni une vaste information phylog&eacute;n&eacute;tique utilis&eacute;e pour d&eacute;duire les principes de base de la reconnaissance. La fr&eacute;quence &agrave; laquelle liant l&#39;ARN peptides sont trouvent dans les biblioth&egrave;ques de grande s&eacute;quence sugg&egrave;re des voies plausibles pour &eacute;voluer liants sp&eacute;cifiques, facilitant la conception de nouvelles mol&eacute;cules de liaison et refl&eacute;tant peut-&ecirc;tre les caract&eacute;ristiques de l&#39;&eacute;volution naturelle.

S&eacute;quence et la structure spatiale des peptides de liaison &agrave; l&#39;ARN.

Sequenz und Struktur von Raum RNA-bindenden Peptide.

Studi di RNA-binding peptidi e recenti esperimenti biblioteca combinatoria, in particolare, hanno dimostrato che strutture e sequenze peptidiche diverse possono essere utilizzati per riconoscere specifici siti di RNA. L&#39;identificazione di un gran numero di sequenze in grado di legarsi a un particolare sito ha fornito numerose informazioni filogenetiche utilizzati per dedurre i principi di base di riconoscimento. L&#39;alta frequenza a cui RNA-binding peptidi sono trovati in sequenza grandi biblioteche suggerisce itinerari plausibili per evolvere sequenza-specifici leganti, facilitando la progettazione di nuove molecole di associazione e forse riflettendo le caratteristiche dell&#39;evoluzione naturale.

Spazio di sequenza e struttura dei peptidi di RNA-binding.

RNA &#x7D50;&#x5408;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30FB; &#x30B3;&#x30F3;&#x30D3;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB; &#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x3001;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x914D;&#x5217;&#x3068;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x3001;RNA &#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3078;&#x306E;&#x8B58;&#x5225;&#x306F;&#x3001;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x7CFB;&#x7D71;&#x60C5;&#x5831;&#x8A8D;&#x8B58;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x539F;&#x5247;&#x3092;&#x63A8;&#x6E2C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3069;&#x306E; RNA &#x7D50;&#x5408;&#x306F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x56F3;&#x66F8;&#x9928;&#x3067;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x9AD8;&#x5468;&#x6CE2;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C0;&#x30FC;&#x3001;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x7D50;&#x5408;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x81EA;&#x7136;&#x306A;&#x9032;&#x5316;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x3057;&#x3066;&#x9032;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3082;&#x3063;&#x3068;&#x3082;&#x3089;&#x3057;&#x3044;&#x30EB;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

RNA &#x7D50;&#x5408;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x3002;

RNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC870;&#xD569; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD2B9;&#xD788;, &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC21C;&#xC11C; &#xBC0F; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD2B9;&#xC815; RNA &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC778;&#xC2DD;&#xD560; &#xC218;&#xB294; &#xC99D;&#xBA85; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xC815; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC218; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xB2E4; &#xC218;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xC778;&#xC2DD;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC6D0;&#xB9AC;&#xB97C; &#xCD94;&#xB860; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; phylogenetic &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xB300;&#xD615; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xB294; RNA-&#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xC8FC;&#xD30C; &#xC9C4;&#xD654; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xAD00;&#xB828; &#xBC14;&#xC778;&#xB354;, &#xC0C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBD84;&#xC790; &#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558; &#xACE0; &#xC544;&#xB9C8;&#xB3C4; &#xC790;&#xC5F0; &#xC9C4;&#xD654;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xBC18;&#xC601; &#xD558; &#xB4EF; &#xB178;&#xC120; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

RNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC758; &#xC21C;&#xC11C; &#xBC0F; &#xAD6C;&#xC870; &#xACF5;&#xAC04;.

Estudios de uni&oacute;n de ARN p&eacute;ptidos y experimentos recientes de la biblioteca combinatoria en particular, han demostrado que las estructuras y p&eacute;ptido diversas secuencias pueden utilizarse para reconocer sitios espec&iacute;ficos de RNA. La identificaci&oacute;n de un gran n&uacute;mero de secuencias capaces de unirse a un sitio en particular ha proporcionado amplia informaci&oacute;n filogen&eacute;tica utilizada para deducir los principios b&aacute;sicos de reconocimiento. La alta frecuencia en que Uni&oacute;n de ARN p&eacute;ptidos se encuentran en bibliotecas de gran secuencia sugiere rutas plausibles para evolucionar la secuencia espec&iacute;fica aglutinantes, facilitar el dise&ntilde;o de nuevas mol&eacute;culas de atascamiento y tal vez reflejando las caracter&iacute;sticas de la evoluci&oacute;n natural.

Espacio de secuencia y estructura de los p&eacute;ptidos de la Uni&oacute;n de ARN.

&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D; T1 (CycT1) &#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x8FD8;&#x53C2;&#x52A0;&#x4E86;&#x51E0;&#x4E2A;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x8FBE;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x5F55;&#x4F38;&#x957F;&#x7387;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x4EBA;&#x4F53;&#x514D;&#x75AB;&#x7F3A;&#x9677;&#x75C5;&#x6BD2; (HIV)&#xFF0C;&#x5728; CycT1 &#x662F;&#x8FBE;&#x8981;&#x7D27;&#x7D27;&#x5730;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7126;&#x6CB9;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x5E76;&#x901A;&#x8FC7;&#x5176;&#x8FBE;&#x7126;&#x6CB9;&#x8BC6;&#x522B;&#x57FA;&#x5E8F; (TRM) &#x7684;&#x4E09;&#x5143;&#x590D;&#x5408;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x5728;&#x76F8;&#x5173;&#x725B;&#x514D;&#x75AB;&#x7F3A;&#x9677;&#x75C5;&#x6BD2; &#xFF08;&#x5F17;&#xFF09;&#xFF0C;&#x8FBE;&#x627F;&#x8BA4;&#x5177;&#x6709;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x548C;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; CycT1 &#x5982;&#x679C;&#x6CA1;&#x6709;&#x5176;&#x540C;&#x6E90;&#x7126;&#x6CB9;&#x5143;&#x7D20;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x521B;&#x529E;&#x4EBA;&#xFF0C;CycT1 &#x65B0;&#x5175; Cdk9 &#x6FC0;&#x9176;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D; phosphorylates RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; II &#x6765;&#x751F;&#x6210;&#x845B;&#x8F6C;&#x5F55;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x3002;&#x68C0;&#x67E5; CycT1 &#x7684;&#x7269;&#x7406;&#x5C5E;&#x6027;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x51C0;&#x5316;&#x529F;&#x80FD;&#x7ED3;&#x6784;&#x57DF;&#x5BF9;&#x5E94; 1 272 &#x6B8B;&#x7559;&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0;&#x5B83;&#x62E5;&#x6709;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6298;&#x53E0;&#x7684;&#x6838;&#x5FC3;&#xFF0C;&#x6839;&#x636E;&#x90E8;&#x5206;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x964D;&#x89E3;&#x548C;&#x5706;&#x4E8C;&#x8272;&#x6027;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6765;&#x5224;&#x65AD;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;C &#x7EC8;&#x7AEF; 20 &#x6B8B;&#x7559;&#x5BF9;&#x5E94; TRM &#x51FA;&#x73B0; conformationally &#x7075;&#x6D3B;&#x6216;&#x7D0A;&#x4E71;&#x3002;TRM &#x7684;&#x725B;&#x7684; CycT1 (bCycT1) &#x662F;&#x540C;&#x6837;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x964D;&#x89E3;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4ECE;&#x4EBA;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x987A;&#x5E8F;&#x4E0D;&#x540C;&#x3002;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#xFF0C;bCycT1 &#x7F3A;&#x4E4F;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559; 261 &#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5F17;&#x4E09;&#x5143;&#x590D;&#x6742;&#x5730;&#x5C42;&#xFF0C;&#x5173;&#x952E;&#x548C;&#x8BF1;&#x53D8;&#x6280;&#x672F;&#x6570;&#x636E;&#x7B26;&#x5408;&#x6B64;&#x91D1;&#x5C5E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E2D;&#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x62DF;&#x8BAE;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x660E;&#x663E;&#x7684; TRM &#x7075;&#x6D3B;&#x6027;&#x8868;&#x660E;&#x6784;&#x8C61;&#x7684;&#x91CD;&#x6392;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F34;&#x968F; CycT1-&#x8FBE;-&#x7126;&#x6CB9;&#x4E09;&#x5143;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#xFF0C;&#x5E76;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x5728;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x7126;&#x6CB9;&#x8BC6;&#x522B;&#x6218;&#x7565;&#x3002;

&#x8FBE;&#x7126;&#x6CB9;&#x8BC6;&#x522B;&#x6BCD;&#x9898;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D; T1 &#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x7075;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;

Cyclin T1 (CycT1) is a cellular transcription elongation factor that also participates in Tat-mediated activation of several lentiviral promoters. In human immunodeficiency virus (HIV), CycT1 is required for Tat to bind tightly to TAR and interacts in the ternary complex via its Tat-TAR recognition motif (TRM). In the related bovine immunodeficiency virus (BIV), Tat recognizes its cognate TAR element with high affinity and specificity in the absence of CycT1. At both promoters, CycT1 recruits the Cdk9 kinase, which phosphorylates RNA polymerase II to generate processive transcription complexes. To examine the physical properties of CycT1, we purified a functional domain corresponding to residues 1-272 and found that it possesses a stably folded core, as judged by partial proteolysis and circular dichroism experiments. Interestingly, the C-terminal 20 residues corresponding to the TRM appear conformationally flexible or disordered. The TRM of the bovine CycT1 (bCycT1) is similarly sensitive to proteolysis yet differs in sequence from the human protein. In particular, bCycT1 lacks a cysteine at residue 261 known to be critical for HIV but not BIV ternary complex formation, and mutagenesis data are consistent with a proposed role for this cysteine in metal binding. The apparent flexibility of the TRM suggests that conformational rearrangements may accompany formation of CycT1-Tat-TAR ternary complexes and may contribute to different TAR recognition strategies in different lentiviruses.

Evidence for conformational flexibility in the Tat-TAR recognition motif of cyclin T1.

Cyclin T1 (CycT1) est un facteur d&#39;&eacute;longation cellulaire de transcription qui participe &eacute;galement &agrave; l&#39;activation par Tat de plusieurs promoteurs des g&egrave;nes. Au virus de l&#39;immunod&eacute;ficience humaine (VIH), CycT1 est requise pour Tat lier &eacute;troitement au goudron et interagit dans le complexe ternaire via son motif de reconnaissance Tat-TAR (TRM). Le virus de l&#39;immunod&eacute;ficience bovine connexes (BIV), Tat reconna&icirc;t son &eacute;l&eacute;ment TAR apparent&eacute; avec grande affinit&eacute; et une sp&eacute;cificit&eacute; en l&#39;absence de CycT1. Dans les deux promoteurs, CycT1 recrute la kinase Cdk9, qui phosphoryle l&#39;ARN polym&eacute;rase II pour g&eacute;n&eacute;rer des complexes de transcription processive. Pour examiner les propri&eacute;t&eacute;s physiques du CycT1, nous purifi&eacute;e &agrave; un domaine fonctionnel correspondant aux r&eacute;sidus 1-272 et qu&#39;elle poss&egrave;de un noyau stable pli&eacute;, si l&#39;on en juge par la prot&eacute;olyse partielle et des exp&eacute;riences de dichro&iuml;sme circulaire. Fait int&eacute;ressant, le C-terminal 20 r&eacute;sidus correspondant &agrave; la CRT apparaissent conformationnellement flexibles ou d&eacute;sordonn&eacute;. La CRT de le CycT1 bovine (bCycT1) est aussi sensible &agrave; la prot&eacute;olyse pourtant diff&eacute;rente dans la s&eacute;quence de la prot&eacute;ine humaine. En particulier, bCycT1 n&#39;a pas une cyst&eacute;ine au r&eacute;sidu 261 connu pour &ecirc;tre critique pour le VIH, mais pas la formation du complexe ternaire BIV, et donn&eacute;es de mutagen&egrave;se sont compatibles avec un r&ocirc;le propos&eacute; pour cette cyst&eacute;ine reliure de m&eacute;tal. La souplesse apparente de la CRT sugg&egrave;re que conformationnelles r&eacute;arrangements peuvent accompagner la formation de complexes ternaires CycT1-Tat-TAR et peuvent contribuer aux diff&eacute;rentes strat&eacute;gies de reconnaissance de goudron dans diff&eacute;rents lentivirus.

Preuve de flexibilit&eacute; conformationnelle dans le motif de reconnaissance de Tat-TAR du cyclin T1.

Hinweise auf konformative Flexibilit&#xE4;t in der Tat-TAR Erkennungsmotiv von Cyclin T1.

Cyclin T1 (CycT1) &egrave; un fattore di allungamento della trascrizione cellulare che partecipa anche Tat-mediata attivazione dei diversi promotori lentivirali. Nel virus dell&#39;immunodeficienza umana (HIV), CycT1 &egrave; necessaria per Tat da associare strettamente al TAR e interagisce nel complesso ternario attraverso il suo motivo di riconoscimento Tat-TAR (TRM). Nel virus dell&#39;immunodeficienza bovina correlati (BIV), Tat riconosce suo elemento TAR imparentata con alta affinit&agrave; e specificit&agrave; in assenza di CycT1. Presso entrambi i promotori, CycT1 reclute il Cdk9 chinasi, che fosforila la RNA polimerasi II per generare complessi da trascrizione. Per esaminare le propriet&agrave; fisiche di CycT1, abbiamo purificato un dominio funzionale corrispondente ai residui 1-272 e trovato che possiede un nucleo stabile piegato, come giudicato da proteolisi parziale ed esperimenti di Dicroismo circolare. Curiosamente, il C-terminale 20 residui corrispondenti alla TRM appaiono conformazionalmente flessibili o disordinati. Il TRM del CycT1 bovina (bCycT1) &egrave; similmente sensibili alla proteolisi ma differisce in sequenza dalla proteina umana. In particolare, bCycT1 manca una cisteina a 261 notoriamente critico per l&#39;HIV ma non BIV ternario complesso formazione di residui, e dati di mutagenesi sono coerenti con un ruolo proposto per questa cisteina nel legame metallico. L&#39;apparente flessibilit&agrave; del TRM suggerisce che riarrangiamenti conformazionali possono accompagnare la formazione di complessi ternari TAR-CycT1-Tat e possono contribuire a diverse strategie di riconoscimento di catrame in lentivirali diversi.

Prova di flessibilit&agrave; conformazionale nel motivo del riconoscimento Tat-TAR di cyclin T1.

&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3; T1 (CycT1) &#x3082;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E; Tat &#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x8EE2;&#x5199;&#x4F38;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3072;&#x3068;&#x514D;&#x75AB;&#x4E0D;&#x5168;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#xFF08;HIV&#xFF09;&#x3001;CycT1 &#x30BF;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x3057;&#x3063;&#x304B;&#x308A;&#x3068;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B; Tat &#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3001;&#x4E09;&#x5143;&#x932F;&#x4F53; Tat &#x30BF;&#x30FC;&#x30EB;&#x8A8D;&#x8B58;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5; (TRM) &#x7D4C;&#x7531;&#x3067;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x30A6;&#x30B7;&#x514D;&#x75AB;&#x4E0D;&#x5168;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; (BIV) &#x3067;&#x3001;Tat &#x9AD8;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3068;&#x7279;&#x7570;&#x6027; CycT1 &#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x3067;&#x305D;&#x306E;&#x540C;&#x65CF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30EB;&#x8981;&#x7D20;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067; RNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; II &#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30C3;&#x30B7;&#x30D6;&#x8EE2;&#x5199;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3001;Cdk9 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; CycT1 &#x3092;&#x52DF;&#x96C6;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;CycT1 &#x306E;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;1-272 &#x6B8B;&#x57FA;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x3001;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306A;&#x5206;&#x89E3;&#x3068;&#x5186;&#x4E8C;&#x8272;&#x6027;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5224;&#x65AD;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307E;&#x308C;&#x305F;&#x30B3;&#x30A2;&#x306F;&#x3001;&#x6240;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;C &#x672B;&#x7AEF; 20 &#x6B8B;&#x57FA;&#x306B; TRM &#x5BFE;&#x5FDC;&#x8868;&#x793A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DB;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x67D4;&#x8EDF;&#x306A;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4E71;&#x308C;&#x305F;&#x3002;TRM &#x306E;&#x725B; CycT1 (bCycT1) &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x3092;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x307E;&#x3060;&#x3072;&#x3068;&#x7531;&#x6765;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;bCycT1 &#x306F;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA; HIV &#x304C;&#x306A;&#x3044; BIV &#x4E09;&#x5143;&#x932F;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066; 261 &#x3067;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5909;&#x7570;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x304C;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x3068;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x3053;&#x306E;&#x91D1;&#x5C5E;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;TRM &#x306E;&#x898B;&#x304B;&#x3051;&#x306E;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DB;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x8A9E;&#x9806;&#x63DB;&#x3048; CycT1 Tat &#x30BF;&#x30FC;&#x30EB;&#x4E09;&#x5143;&#x932F;&#x4F53;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x30EC;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30BF;&#x30FC;&#x30EB;&#x8A8D;&#x8B58;&#x6226;&#x7565;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3; T1 &#x306E; Tat &#x30BF;&#x30FC;&#x30EB;&#x8A8D;&#x8B58;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3002;

Cyclin T1 (CycT1) &#xB610;&#xD55C; &#xC5EC;&#xB7EC; lentiviral &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBB38;&#xC2E0; &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC804;&#xC0AC; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC694;&#xC18C; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04; &#xBA74;&#xC5ED; &#xACB0;&#xD54D; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (HIV), CycT1 &#xD0C0;&#xB974;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xB2E8;&#xD788; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xBB38;&#xC2E0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8; &#xBB38;&#xC2E0; &#xD0C0;&#xB974; &#xC778;&#xC2DD; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; (TRM)&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; 3 &#xC9C4; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294;. &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; &#xC18C;&#xACFC; &#xBA74;&#xC5ED; &#xACB0;&#xD54D; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (BIV) &#xBB38;&#xC2E0; &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4;&#xC640; Cyct1&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC740; &#xB3D9;&#xC871; &#xD0C0;&#xB974; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xC778;&#xC2DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB450; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; CycT1 RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; II&#xB294; processive &#xC804;&#xC0AC; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xC0DD;&#xC131; phosphorylates Cdk9 &#xB2C8; &#xC2E0;&#xBCD1;. Cyct1&#xC758; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 1-272 &#xD558; &#xC815;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xBD80;&#xBD84; &#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4;&#xC640; &#xC6D0;&#xD615; &#x9EC4; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2EC;&#xD310;&#xC744; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC811;&#xD78C;&#xB41C; &#xD575; &#xBCF4;&#xC720;&#xB97C; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; TRM 20 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; conformationally &#xC720;&#xC5F0; &#xB098;&#xD0C0;&#xB098;&#xAC70;&#xB098; &#xBB34;&#xC9C8;&#xC11C;. &#xC18C;&#xACFC; Cyct1&#xC758; TRM (bCycT1) &#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC720;&#xC0AC; &#xD558; &#xAC8C; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC544;&#xC9C1; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xD788;, bCycT1 &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 261 &#xC5D0;&#xC774;&#xC988; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; BIV &#xC0BC;&#xD56D; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xC5D0; &#xBD80;&#xC871; &#xD558; &#xACE0; mutagenesis &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xAE08;&#xC18D; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0;&#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; &#xC5ED;&#xD560;&#xACFC; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294;. &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; &#xC720;&#xC5F0;&#xC131; &#xC788;&#xB294; TRM&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC7AC;&#xBC30;&#xC5F4; CycT1 &#xBB38;&#xC2E0; &#xD0C0;&#xB974; &#xC0BC;&#xD56D; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xB3D9;&#xBC18; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB2E4;&#xB978; lentiviruses&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB978; &#xD0C0;&#xB974; &#xC778;&#xC2DD; &#xC804;&#xB7B5;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBB38;&#xC2E0; &#xD0C0;&#xB974; &#xC778;&#xC2DD; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; cyclin t1&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC720;&#xC5F0;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC70;.

Ciclina T1 (CycT1) es un factor de elongaci&oacute;n de la transcripci&oacute;n celular que tambi&eacute;n participa en la activaci&oacute;n mediada por Tat de varios promotores lentivirales. En virus de inmunodeficiencia humana (VIH), CycT1 se requiere para Tat enlazar firmemente a TAR e interact&uacute;a en el complejo ternario v&iacute;a su motivo de reconocimiento de Tat-TAR (TRM). En el virus de la inmunodeficiencia bovina relacionadas (BIV), Tat reconoce su elemento TAR cognado con alta afinidad y especificidad en la ausencia de CycT1. En ambos promotores, CycT1 recluta la Quinasa Cdk9, que fosforila la ARN polimerasa II para generar complejos de transcripci&oacute;n procesual. Para examinar las propiedades f&iacute;sicas de CycT1, nosotros hab&iacute;a purificado un dominio funcional correspondiente a residuos 1-272 y encontramos que posee un n&uacute;cleo estable doblado, seg&uacute;n lo juzgado por proteolisis parcial y experimentos de dicro&iacute;smo circular. Curiosamente, el C-terminal 20 residuos correspondientes a la TRM aparecen conformationally flexible o desordenada. La TRM de la CycT1 bovina (bCycT1) es igualmente sensible a la proteolisis pero difiere en la secuencia de la prote&iacute;na humana. En particular, bCycT1 carece de una ciste&iacute;na en el residuo 261 conocido para ser cr&iacute;tico para el VIH pero no complejante ternario BIV y mutag&eacute;nesis datos son constantes con un papel propuesto para este ciste&iacute;na en el enlace de metal. La aparente flexibilidad de la TRM sugiere que los cambios conformacionales que acompa&ntilde;e la formaci&oacute;n de complejos ternarios CycT1-Tat-TAR y pueden contribuir a diferentes estrategias de reconocimiento de alquitr&aacute;n en diferentes lentivirus.

Pruebas de flexibilidad conformacional en el adorno de reconocimiento de Tat-TAR de ciclina T1.

&#x4EBA;&#x7C7B;&#x514D;&#x75AB;&#x7F3A;&#x9677;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7C7B;&#x578B; 1 &#xFF08;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;-1&#xFF09; &#x8F6C;&#x5F55;&#x53D7;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x7684; Tat &#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x514D;&#x9664;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5757;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4F38;&#x957F;&#x7387;&#x7531;&#x62DB;&#x8058;&#x4F38;&#x957F;&#x56E0;&#x7D20;&#xFF0C;P-TEFb&#xFF0C;&#x5411;&#x75C5;&#x6BD2;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E86;&#x8FBE;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5229;&#x7528;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4EE5;&#x76EE;&#x6807;&#x5360;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x6D88;&#x6781;&#x86CB;&#x767D;&#x5BF9;&#x5176;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x884C;&#x52A8;&#x3002;&#x878D;&#x5408;&#x8FBE;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x57DF;&#x5230;&#x4E00;&#x4E9B;&#x62FC;&#x63A5;&#x7684;&#x56E0;&#x7D20;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x5411; U2AF65&#xFF0C;Arg Ser (RS) &#x57DF;&#x521B;&#x5EFA;&#x8FBE;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x8D77;&#x4F0F;&#x6591;&#x70B9;&#xFF0C;&#x7AD9;&#x70B9;&#x524D; mRNA &#x52A0;&#x5DE5;&#x56E0;&#x7D20;&#x4E3A;&#x7EC4;&#x88C5;&#x6210;&#x8F6C;&#x5F55;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x5B58;&#x50A8;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;&#x540D;&#x4E3A; T RS U2AF65 &#x878D;&#x5408;&#x4E0E;&#x975E;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x9886;&#x57DF;&#x7684; RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176; II (RNAP II) &#x901A;&#x8FC7;&#x5176; RS &#x57DF;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8F7D;&#x5165; RNAP II &#x5168;&#x9176;&#x8FD8;&#x80FD;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x3002;T-RS &#x662F;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x62DB;&#x8058;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 RNAP II hyperphosphorylation &#x4E4B;&#x524D;&#x7684;&#x7126;&#x6CB9;&#x72EC;&#x7ACB;&#x65B9;&#x5F0F;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x8702;&#x7A9D;&#x5BA3;&#x4F20;&#x5458;&#x3002;&quot;&#x9884;&quot;&#x7684; T-RS &#x5230;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 preinitiation &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x53EF;&#x9632;&#x6B62;&#x8FBE;&#x6D3B;&#x8DC3;&#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;&#x4F38;&#x957F;&#x65E0;&#x80FD;&#x72B6;&#x6001;&#x79BB;&#x5F00;&#x914D;&#x5408;&#xFF0C;&#x80FD;&#x6709;&#x6548;&#x6291;&#x5236;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x6761;&#x76EE;&#x3002;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x5BF9;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x9488;&#x5BF9;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5F55;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x53EF;&#x80FD;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x548C;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x63D0;&#x4F9B;&#x65B0;&#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;

&#x9488;&#x5BF9;&#x8FBE;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x5728;&#x4EBA;&#x4F53;&#x514D;&#x75AB;&#x7F3A;&#x635F;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7C7B;&#x578B; 1 &#x8F6C;&#x5F55;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x5927;&#x4F1A;&#x3002;

Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) transcription is regulated by the viral Tat protein, which relieves a block to elongation by recruiting an elongation factor, P-TEFb, to the viral promoter. Here, we report the discovery of potent Tat inhibitors that utilize a localization signal to target a dominant negative protein to its site of action. Fusing the Tat activation domain to some splicing factors, particularly to the Arg-Ser (RS) domain of U2AF65, creates Tat inhibitors that localize to subnuclear speckles, sites where pre-mRNA processing factors are stored for assembly into transcription complexes. A U2AF65 fusion named T-RS interacts with the nonphosphorylated C-terminal domain of RNA polymerase II (RNAP II) via its RS domain and is loaded into RNAP II holoenzyme complexes. T-RS is recruited efficiently to the HIV-1 promoter in a TAR-independent manner before RNAP II hyperphosphorylation but not to cellular promoters. The "preloading" of T-RS into HIV-1 preinitiation complexes prevents the entry of active Tat molecules, leaving the complexes in an elongation-incompetent state and effectively suppressing HIV-1 replication. The ability to deliver inhibitors to transcription complexes through the use of targeting/localization signals may provide new avenues for designing viral and transcription inhibitors.

Targeting tat inhibitors in the assembly of human immunodeficiency virus type 1 transcription complexes.

Virus de l&#39;immunod&eacute;ficience humaine de type 1 (VIH-1) transcription est r&eacute;glement&eacute;e par la prot&eacute;ine virale Tat, ce qui &eacute;vite un bloc &agrave; allongement en recrutant un facteur d&#39;&eacute;longation, P-TEFb, le promoteur viral. Nous rapportons ici la d&eacute;couverte de puissants inhibiteurs de Tat qui utilisent un signal de localisation pour cibler une prot&eacute;ine n&eacute;gative dominante &agrave; son site d&#39;action. Le domaine d&#39;activation Tat &agrave; certains facteurs d&#39;&eacute;pissage, particuli&egrave;rement dans le domaine de Arg-Ser (RS) d&#39;U2AF65, de fusion cr&eacute;e Tat inhibiteurs que Localisez &agrave; mouchetures sub-nucl&eacute;aire, sites o&ugrave; les facteurs de transformation du pr&eacute;-ARNm sont stock&eacute;s pour montage dans des complexes de transcription. Une fusion U2AF65 appel&eacute;e T-RS interagit avec le domaine C-terminal phosphoryl&eacute; de l&#39;ARN polym&eacute;rase II (RNAP II) par l&#39;interm&eacute;diaire de son domaine de RS et est charg&eacute;e dans des complexes RNAP II holoenzyme. T-RS est recrut&eacute; efficacement au promoteur du VIH-1 de mani&egrave;re ind&eacute;pendante du goudron avant est hyperphosphoryl&eacute;e RNAP II mais pas aux promoteurs cellulaires. Le &laquo; pr&eacute;charge &raquo; de T-r dans le VIH-1 pr&eacute;-initiation complexes emp&ecirc;che l&#39;entr&eacute;e des mol&eacute;cules actives de Tat, laissant les complexes dans un &eacute;tat d&#39;allongement-incomp&eacute;tents et r&eacute;primer efficacement la r&eacute;plication du VIH-1. La capacit&eacute; de livrer des inhibiteurs des complexes de transcription par l&#39;utilisation de signaux de localisation/ciblage peut-&ecirc;tre offrir des nouvelles de conception virale et d&#39;inhibiteurs de la transcription.

Ciblage des inhibiteurs de la tat dans l&#39;assemblage des complexes de human immunodeficiency virus type 1 transcription.

Human-Immunodeficiency-Virus Typ 1 (HIV-1) Transkription der viralen Tat-Protein, das einen Block zu Dehnung entlastet durch die Rekrutierung eines Dehnung Faktor, P-TEFb, dem viralen Projekttr&auml;ger geregelt ist. Hier berichten wir &uuml;ber die Entdeckung von potenten Tat-Inhibitoren, die ein Signal Lokalisierung eine dominante negative Protein auf die Aktion als Ziel verwenden. Verschmelzung der Tat Aktivierungsdom&auml;ne einige Splei&szlig;en Faktoren, insbesondere auf die Arg-Ser (RS)-Dom&auml;ne des U2AF65, erstellt Tat Inhibitoren, die auf Elementarpartikel Sprenkeln, Websites lokalisieren wo Pre-mRNA Verarbeitungsfaktoren f&uuml;r Montage in Transkription-komplexe gespeichert sind. U2AF65 Verschmelzung mit dem Namen T-RS interagiert mit der nonphosphorylated der C-terminalen Dom&auml;ne des RNS-Polymerase II (Name II) &uuml;ber die RS-Dom&auml;ne und in Name II Erfahrung komplexe geladen wird. T-RS ist der HIV-1-Promoter in TAR-unabh&auml;ngigen Weise vor Name II Hyperphosphorylation aber nicht zellul&auml;re F&ouml;rderer effizient rekrutiert. Das &quot;Vorspannen&quot; von T-RS in HIV-1-preinitiation-komplexe verhindert das Eindringen von aktiven Tat Molek&uuml;le, verlassen die komplexe bewirkt Dehnung-inkompetent und effektiv unterdr&uuml;cken von HIV-1-Replikation. Die F&auml;higkeit, Inhibitoren Transkription-komplexen durch den Einsatz von targeting/Lokalisierung Signale kann neue Wege entwerfen virale und Transkription-Inhibitoren vorsehen.

Tat-Inhibitoren in der Versammlung des humanen Immundefizienz-Virus Typ 1 Transkription-komplexe im Visier.

Virus dell&#39;immunodeficienza umana tipo 1 (HIV-1) trascrizione &egrave; regolata dalla proteina virale Tat, che allevia un blocco all&#39;allungamento con l&#39;assunzione di un fattore di allungamento, P-TEFb, al promotore virale. Qui, segnaliamo la scoperta di potenti inibitori di Tat che utilizzano un segnale di localizzazione per indirizzare una proteina negativa dominante al suo sito di azione. Fondendo il dominio di attivazione Tat alcuni fattori di splicing, particolarmente al dominio di U2AF65, Arg-Ser (RS) crea Tat inibitori che localizzare a macchiettature subnucleare, siti dove fattori di trasformazione pre-mRNA vengono archiviati per il montaggio in complessi di trascrizione. Una fusione di U2AF65 denominata T-RS interagisce con il dominio C-terminale nonphosphorylated di RNA polimerasi II (RNAP II) tramite il dominio RS e viene caricata in complessi esonucleasica RNAP II. T-RS &egrave; reclutato in modo efficiente il promotore di HIV-1 in maniera indipendente dal TAR prima iperfosforilazione RNAP II ma non promotori cellulari. Il &quot;precarico&quot; di T-RS in HIV-1 preinitiation complessi impedisce l&#39;ingresso di molecole di Tat attive, lasciando i complessi in uno stato di allungamento-incompetente e sopprimere efficacemente la replicazione dell&#39;HIV-1. La capacit&agrave; di consegnare gli inibitori a complessi di trascrizione attraverso l&#39;uso di segnali di targeting e localizzazione pu&ograve; fornire nuove vie per la progettazione virale e inibitori della trascrizione.

Tat inibitori nell&#39;assemblaggio di complessi di human immunodeficiency virus type 1 trascrizione di targeting.

&#x3072;&#x3068;&#x514D;&#x75AB;&#x4E0D;&#x5168;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; 1 &#xFF08;HIV-1) &#x8EE2;&#x5199;&#x4F38;&#x9577;&#x3059;&#x308B;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x76F8;&#x4E92;&#x7D50;&#x5408;&#x4F38;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50; P TEFb &#x3092;&#x52DF;&#x96C6;&#x3092;&#x548C;&#x3089;&#x3052;&#x307E;&#x3059;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; Tat &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306F;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x5426;&#x5B9A;&#x7684;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x5316;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x306E; Tat &#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x767A;&#x898B;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Tat &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E; U2AF65&#x3001;Arg Ser (RS) &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x7279;&#x306B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x56E0;&#x5B50;&#x306B;&#x878D;&#x5408; Tat &#x306F;&#x6838;&#x5185;&#x6591;&#x70B9;&#x3001;mRNA &#x306E;&#x52A0;&#x5DE5;&#x56E0;&#x5B50;&#x304C;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x8EE2;&#x5199;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306B;&#x683C;&#x7D0D;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3059;&#x308B;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;T RS &#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x540D;&#x524D; U2AF65 &#x878D;&#x5408;&#x306F; RNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; (RNAP II) &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x306E; RS &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E; nonphosphorylated &#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x3084;&#x308A;&#x53D6;&#x308A;&#x3067; RNAP II &#x30DB;&#x30ED;&#x9175;&#x7D20;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306B;&#x8AAD;&#x307F;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;T-RS &#x306F;&#x3001;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x524D; RNAP II &#x30BF;&#x30A6;&#x306B; TAR &#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067; HIV-1 &#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x304C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x52DF;&#x96C6;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;T RS &#x306E;&#x300C;&#x4E88;&#x300D;HIV 1 &#x7D30;&#x80DE;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306B;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA; Tat &#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x932F;&#x4F53;&#x304C;&#x4F38;&#x9577;&#x7121;&#x80FD;&#x306A;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306B; HIV-1 &#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3092;&#x9632;&#x304E;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8EE2;&#x5199;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;/&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x6027;&#x8A2D;&#x8A08;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8EE2;&#x5199;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3092;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x9053;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Tat &#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x3072;&#x3068;&#x514D;&#x75AB;&#x4E0D;&#x5168;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; 1 &#x8EE2;&#x5199;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC778;&#xAC04; &#xBA74;&#xC5ED; &#xACB0;&#xD54D; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; 1 (hiv-1) &#xB179;&#xC74C; &#xC785;&#xB825; &#xD55C; &#xC5F0;&#xC2E0; &#xC728; &#xC694;&#xC18C;, P-TEFb, &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC744; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2E0;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xBE14;&#xB85D;&#xC744; &#xB35C;&#xC5B4; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; Tat &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC791;&#xC5C5;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xBB38;&#xC2E0; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xD2B9;&#xD788; U2AF65, Arg Ser (RS) &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xC811;&#xD569; &#xC77C;&#xBD80; &#xC694;&#xC778;&#xC5D0; &#xBB38;&#xC2E0; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC735;&#xD569; &#xBB38;&#xC2E0; subnuclear speckles, &#xC804;&#xC0AC; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0AC;&#xC804; mRNA &#xCC98;&#xB9AC; &#xC694;&#xC18C;&#xAC00; &#xC800;&#xC7A5; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4ED;&#xB2C8;&#xB2E4;. T-RS &#xB77C;&#xB294; U2AF65 &#xD4E8;&#xC804; RNA &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; II (RNAP II) &#xD574;&#xB2F9; RS &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; nonphosphorylated C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xACFC; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; RNAP II holoenzyme &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xB85C;&#xB4DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. RNAP II hyperphosphorylation &#xC804;&#xC5D0; &#xD0C0;&#xB974; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; T-RS &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &quot;Preloading&quot; T-RS&#xC758; HIV-1 preinitiation &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xBB34;&#xB2A5; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xB294; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xACE0; hiv-1 &#xBCF5;&#xC81C;&#xB97C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD65C;&#xC131; &#xBB38;&#xC2E0; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xD56D;&#xBAA9;&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC0C1;/&#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC804;&#xC1A1; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xB2A5;&#xB825; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xC124;&#xACC4; &#xBC0F; &#xC804;&#xC0AC; &#xC800; &#xD574;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4;&#xB3C4; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04; &#xBA74;&#xC5ED; &#xACB0;&#xD54D; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC720;&#xD615; 1 &#xC804;&#xC0AC; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xBB38;&#xC2E0; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C;.

Virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) transcripci&oacute;n est&aacute; regulada por la prote&iacute;na viral Tat, que alivia un bloque para alargamiento mediante la contrataci&oacute;n de un factor de elongaci&oacute;n, P-TEFb, al promotor viral. Aqu&iacute;, Divulgamos el descubrimiento de los inhibidores potentes de Tat que utilizan una se&ntilde;al de localizaci&oacute;n para orientar una prote&iacute;na dominante negativa a su sitio de acci&oacute;n. El dominio de la activaci&oacute;n de Tat a algunos factores que empalma, particularmente al dominio Arg-Ser (RS) de U2AF65, de la fusi&oacute;n crea Tat inhibidores que localizaci&oacute;n a los puntos subnuclear, sitios donde se almacenan los factores de procesamiento del pre-mRNA para montaje en complejos de transcripci&oacute;n. Una fusi&oacute;n de U2AF65 llamada T-RS interact&uacute;a con el nonphosphorylated dominio c-terminal de la ARN polimerasa II (RNAP II) mediante su dominio de la RS y se carga en complejos de holoenzyme RNAP II. T-RS es reclutado eficientemente al VIH-1 promotor de manera independiente de la TAR antes hiperfosforilaci&oacute;n RNAP II pero no a celulares promotores. El &quot;Cargando&quot; de T-RS en complejos preinitiation HIV-1 previene la entrada de mol&eacute;culas activas de Tat, dejando los complejos en un estado de elongaci&oacute;n-incompetente y efectivamente supresi&oacute;n de la replicaci&oacute;n del VIH-1. La capacidad de entregar inhibidores a complejos de transcripci&oacute;n mediante el uso de se&ntilde;ales dirigidas a/localizaci&oacute;n puede proporcionar nuevas v&iacute;as para dise&ntilde;ar viral e inhibidores de la transcripci&oacute;n.

Chandreyee Das

Bioscience Division

Millipore Inc

Determining Cell Number During Cell Culture using the Scepter Cell Counter

Chandreyee Das

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Bioscience Division

Millipore Inc

Determining Cell Number During Cell Culture using the Scepter Cell Counter

Bioscience Division