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Use of an Optical Trap for Study of Host-Pathogen Interactions for Dynamic Live Cell Imaging

Dynamic live cell imaging allows direct visualization of real-time interactions between cells of the immune system1, 2; however, the lack of spatial and ...

Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School

TLR9 &#x627F;&#x8BA4; unmethylated &#x7684; CpG DNA&#xFF0C;&#x5E76;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x56FA;&#x6709;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;TLR9 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x662F;&#x591A;&#x6B65;&#x9AA4;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x7684;&#x5288;&#x88C2;&#x548C;&#x8D29;&#x8FD0;&#x5230; endolysosomal &#x8F66;&#x53A2;&#x914D;&#x4F53;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x4E0D;&#x8FC7;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x786E;&#x7ACB;&#x7684;&#x89C4;&#x5219;&#x52A8;&#x6001;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D29;&#x5356;&#x4E3A; TLR9 &#x540E;&#x75C5;&#x539F;&#x5438;&#x6536;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x8BE5;&#x5438;&#x6536;&#x7684;&#x66F2;&#x9709;&#x70DF;&#x66F2;&#x9709;&#x5206;&#x751F;&#x5B62;&#x5B50;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6025;&#x5267;&#x7A7A;&#x95F4;&#x7684;&#x91CD;&#x65B0;&#x5206;&#x914D; TLR9 &#x81F3; A.&#x70DF;&#x66F2;&#x9709;&#x542B;&#x6709; phagosomes phagosomal &#x819C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x542B;&#x73E0; phagosomes &#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x3002;&#x771F;&#x83CC; phagosome &#x5177;&#x4F53; TLR9 &#x62DB;&#x52DF;&#x662F;&#x4E00;&#x81F4;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x840C;&#x53D1;&#x9636;&#x6BB5;&#x548C;&#x9009;&#x5B9A;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x5F71;&#x54CD;&#x771F;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7684; Ags &#x663E;&#x793A;&#x4F7F;&#x7528; A.&#x70DF;&#x66F2;&#x9709;&#x5B62;&#x5B50;&#x3002;&#x5230; A.&#x70DF;&#x66F2;&#x9709; phagosome TLR9 &#x5206;&#x5757;&#x7684;&#x65F6;&#x7A7A;&#x8C03;&#x63A7;&#x662F;&#x72EC;&#x7ACB; TLR2 &#x548C; TLR4&#xFF0C;&#x4E0B;&#x6E38;&#x5355;&#x53CD;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; TLR9 N-&#x672B;&#x7AEF;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x5288;&#x88C2;&#x57DF;&#x662F;&#x6210;&#x529F;&#x80DE;&#x5185;&#x8D29;&#x5356;&#x548C;&#x79EF;&#x7D2F;&#x4E2D;&#x542B;&#x6709; CpG &#x7684;&#x8F66;&#x53A2;&#x548C; A.&#x70DF;&#x66F2;&#x9709; phagosomal &#x819C; TLR9 &#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x8BC1;&#x636E;&#x5728;&#x54EA; A.&#x70DF;&#x66F2;&#x9709;&#x5B62;&#x5B50;&#x541E;&#x566C;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x6A21;&#x578B;&#x8BF1;&#x5BFC; A.&#x70DF;&#x66F2;&#x9709; phagosomes TLR9 &#x62DB;&#x52DF;&#x548C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4ECE;&#x800C;&#x8C03;&#x89E3; TLR9 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x6297;&#x771F;&#x83CC;&#x56FA;&#x6709;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;

TLR9 &#x79EF;&#x6781;&#x62DB;&#x52DF;&#x5230;&#x9ED1;&#x66F2;&#x9709;&#x70DF;&#x66F2;&#x9709; phagosomes &#x548C; N &#x672B;&#x7AEF;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x5288;&#x88C2;&#x57DF;&#x9700;&#x8981;&#x9002;&#x5F53;&#x80DE;&#x5185;&#x8D29;&#x5356;&#x3002;

TLR9 recognizes unmethylated CpG DNA and induces innate immune responses. TLR9 activation is a multistep process requiring proteolytic cleavage and trafficking to endolysosomal compartments for ligand-induced signaling. However, the rules that govern the dynamic subcellular trafficking for TLR9 after pathogen uptake have not been established. In this study, we demonstrate that uptake of Aspergillus fumigatus conidia induced drastic spatial redistribution of TLR9 to the phagosomal membrane of A. fumigatus-containing phagosomes but not to bead-containing phagosomes in murine macrophages. Specific TLR9 recruitment to the fungal phagosome was consistent using A. fumigatus spores at different germination stages and selected mutants affecting the display of Ags on the fungal cell surface. Spatiotemporal regulation of TLR9 compartmentalization to the A. fumigatus phagosome was independent of TLR2, TLR4, and downstream TLR signaling. Our data demonstrate that the TLR9 N-terminal proteolytic cleavage domain was critical for successful intracellular trafficking and accumulation of TLR9 in CpG-containing compartments and A. fumigatus phagosomal membranes. Our study provides evidence for a model in which A. fumigatus spore phagocytosis by macrophages specifically induces TLR9 recruitment to A. fumigatus phagosomes and may thereby mediate TLR9-induced antifungal innate immune responses.

TLR9 is actively recruited to Aspergillus fumigatus phagosomes and requires the N-terminal proteolytic cleavage domain for proper intracellular trafficking.

TLR9 reconna&#xEE;t l&#x26;#39;ADN CpG non m&#xE9;thyl&#xE9;s et induit des r&#xE9;ponses immunitaires inn&#xE9;es. TLR9 activation est un processus en plusieurs &#xE9;tapes n&#xE9;cessitant un clivage prot&#xE9;olytique et le trafic de compartiments endolysosomal pour la signalisation induite par le ligand. Toutefois, les r&#xE8;gles qui r&#xE9;gissent le trafic subcellulaire dynamique pour TLR9 apr&#xE8;s l&#x26;#39;absorption des agents pathog&#xE8;nes n&#x26;#39;ont pas &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tablies. Dans cette &#xE9;tude, nous d&#xE9;montrons que l&#x26;#39;absorption d&#x26;#39;Aspergillus fumigatus conidies induite drastique redistribution spatiale des TLR9 &#xE0; la membrane du phagosome de A. fumigatus contenant phagosomes, mais pas &#xE0; talon contenant phagosomes dans les macrophages murins. Sp&#xE9;cifique TLR9 de recrutement pour le phagosome fongique &#xE9;tait conforme &#xE0; l&#x26;#39;aide A. fumigatus spores &#xE0; des stades diff&#xE9;rents de germination et des mutants s&#xE9;lectionn&#xE9;s affectent l&#x26;#39;affichage des Ags sur la surface de la cellule fongique. La r&#xE9;glementation spatio-temporelle du TLR9 cloisonnement &#xE0; l&#x26;#39;phagosome A. fumigatus &#xE9;tait ind&#xE9;pendante de TLR2, TLR4, et la signalisation TLR aval. Nos donn&#xE9;es d&#xE9;montrent que le TLR9 domaine N-terminal de clivage prot&#xE9;olytique a &#xE9;t&#xE9; critique pour le trafic intracellulaire de succ&#xE8;s et l&#x26;#39;accumulation de TLR9 dans CpG contenant compartiments et A. fumigatus membranes phagosome. Notre &#xE9;tude fournit des preuves pour un mod&#xE8;le dans lequel A. fumigatus spores phagocytose par les macrophages induit sp&#xE9;cifiquement TLR9 de recrutement pour A. fumigatus phagosomes et peuvent ainsi servir de m&#xE9;diateur TLR9-induites antifongiques les r&#xE9;ponses immunitaires inn&#xE9;es.

TLR9 est recrut&#xE9; activement &#xE0; Aspergillus fumigatus et phagosomes N&#xE9;cessite le domaine N-terminal prot&#xE9;olytique de clivage pour trafic intracellulaire correcte

TLR9 erkennt unmethylated CpG-DNA und angeborenen Immunantwort induziert. TLR9-Aktivierung ist ein Vorgang, die proteolytische Spaltung und Menschenhandel zu Endolysosomal F&auml;cher f&uuml;r Signalisierung Ligand induziert. Jedoch haben die Regeln des dynamischen subzellulare Handels f&uuml;r TLR9 nach Aufnahme der Erreger nicht nachgewiesen. In dieser Studie zeigen wir die Aufnahme von Aspergillus Fumigatus Konidien induzierte drastische r&auml;umlichen Umverteilung von TLR9 der phagosomal Membran von A. Fumigatus-haltigen Phagosomen aber nicht Perlen-haltigen Phagosomen in murinen Makrophagen. Spezifische TLR9 Anwerbung f&uuml;r die Pilz-Phagosom stimmte mit A. Fumigatus Sporen bei verschiedenen Keimen Stufen und ausgew&auml;hlten Mutanten, die Auswirkungen auf die Anzeige der Ags auf der pilzartigen Zellenoberfl&auml;che. Raumzeitliche war TLR9 Untergliederung, die A. Fumigatus Phagosom unabh&auml;ngig von TLR2 und TLR4 nachgeschaltete TLR-Signalisierung. Unsere Daten zeigen, dass die TLR9 N-terminalen proteolytische Spaltung Dom&auml;ne f&uuml;r erfolgreichen intrazellul&auml;ren Menschenhandel und Anh&auml;ufung von TLR9 in CpG-haltigen F&auml;cher und A. Fumigatus phagosomal Membranen von entscheidender Bedeutung war. Unsere Studie liefert Beweise f&uuml;r ein Modell, in welchem A. Fumigatus Phagozytose durch Makrophagen speziell Spore, TLR9 Rekrutierung durch A. Fumigatus Phagosomen induziert und kann dadurch TLR9 induziert antimykotische angeborenen Immunantworten vermitteln.

TLR9 ist aktiv auf Aspergillus Fumigatus Phagosomen rekrutiert und erfordert von die N-terminalen proteolytische Spaltung Dom&auml;ne f&uuml;r ordnungsgem&auml;&szlig;e intrazellul&auml;re Menschenhandel.

TLR9 riconosce unmethylated CpG DNA e induce risposte immunitarie innate. TLR9 attivazione &egrave; un processo a pi&ugrave; fasi che richiedono il clivaggio proteolitico e traffico a compartimenti endolisosomiale per segnalazione indotta dal ligando. Tuttavia, non sono state stabilite le regole che governano la dinamica sottocellulari traffico per TLR9 dopo assorbimento di agenti patogeni. In questo studio dimostriamo che assorbimento di Aspergillus fumigatus conidi indotte drastica spaziale ridistribuzione di TLR9 alla membrana phagosomal di a. fumigatus contenenti phagosomes, ma non contenente perle phagosomes in macrofagi murini. Reclutamento TLR9 specifico per il Fagosoma fungina era coerenza utilizzando a. fumigatus spore in germinazione differenti fasi e selezionati mutanti che influenzano la visualizzazione di Ags sulla superficie delle cellule fungine. Regolamento spatiotemporal di compartimentazione TLR9 per il Fagosoma di a. fumigatus era indipendente di TLR2 TLR4 e TLR di segnalazione a valle. I nostri dati dimostrano che il dominio di clivaggio proteolitico TLR9 N-terminale &egrave; stato critico per il successo di traffico intracellulare e accumulo di TLR9 in compartimenti contenenti CpG e membrane phagosomal a. fumigatus. Il nostro studio fornisce prove per un modello di cui al quale A. fumigatus spore fagocitosi dai macrofagi in particolare induce TLR9 assunzione di a. fumigatus phagosomes e possono quindi mediare indotta TLR9 antimicotico risposta immunitaria innata.

TLR9 attivamente &egrave; reclutato per phagosomes di Aspergillus fumigatus e richiede il dominio N-terminale clivaggio proteolitico per buon traffico intracellulare.

TLR9&#x306F;&#x975E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;CpG DNA&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3057;&#x3001;&#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3002; TLR9&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x8A98;&#x5C0E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;endolysosomal&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x7684;&#x5207;&#x65AD;&#x3068;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x591A;&#x6BB5;&#x968E;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x5F8C;&#x3001;TLR9&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x8F38;&#x9001;&#x3092;&#x652F;&#x914D;&#x3059;&#x308B;&#x30EB;&#x30FC;&#x30EB;&#x304C;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30B9;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AE;&#x30EB;&#x30B9;&#x80DE;&#x5B50;&#x306E;&#x305D;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306F;A. fumigatus&#x306E;&#x542B;&#x6709;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x819C;&#x306B;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x542B;&#x6709;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;TLR9&#x306E;&#x629C;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x7A7A;&#x9593;&#x306E;&#x518D;&#x914D;&#x5206;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x771F;&#x83CC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;TLR9&#x52DF;&#x96C6;&#x306F;&#x83CC;&#x985E;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x306E;AGS&#x306E;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EC;&#x30A4;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x5225;&#x306E;&#x767A;&#x82BD;&#x6BB5;&#x968E;&#x3068;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x3057;&#x305F;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3067;&#x306F;A. fumigatus&#x306E;&#x80DE;&#x5B50;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x4E00;&#x8CAB;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002; A. fumigatus&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3078;TLR9&#x533A;&#x753B;&#x306E;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306F;&#x3001;TLR2&#x3001;TLR4&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x3068;&#x4E0B;&#x6D41;&#x306E;TLR&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;TLR9&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x7684;&#x5207;&#x65AD;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;CpG&#x542B;&#x6709;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;A. fumigatus&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x819C;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;TLR9&#x306E;&#x6210;&#x529F;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x8F38;&#x9001;&#x3068;&#x84C4;&#x7A4D;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6279;&#x5224;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306B;&#x3088;&#x308B;A. fumigatus&#x306E;&#x80DE;&#x5B50;&#x306E;&#x8CAA;&#x98DF;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x306B;A. fumigatus&#x306E;&#x306F;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;TLR9&#x52D5;&#x54E1;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;TLR9&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x6297;&#x771F;&#x83CC;&#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

TLR9&#x306F;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306B;&#x30A2;&#x30B9;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AE;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x88DC;&#x5145;&#x3057;&#x3001;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x8F38;&#x9001;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;N-&#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x5207;&#x65AD;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;

TLR9 unmethylated CpG DNA&#xB97C; &#xC778;&#xC2DD; &#xD558; &#xACE0; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD55C;&#xB2E4;. TLR9 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC744; &#xC694;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xC720;&#xB3C4; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; endolysosomal &#xAD6C;&#xD68D;&#xC744; &#xBC00;&#xB9E4; &#xB2E4;&#xB2E8;&#xACC4; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;,&#xB294; &#xB3D9;&#xC801; subcellular &#xBC00;&#xB9E4; TLR9 &#xC704;&#xD574; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00; &#xD6C4; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xADDC;&#xCE59; &#xC124;&#xB9BD; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xB204; fumigatus conidia &#xC720;&#xB3C4; &#xACFC;&#xAC10; &#xD55C; &#xACF5;&#xAC04; &#xC7AC;&#xBC30;&#xD3EC; TLR9 A. fumigatus &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; phagosomes&#xC758; phagosomal &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xBE44;&#xB4DC;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00; &#xC2DC;&#xC5F0; murine &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; phagosomes. &#xACF0; &#xD321;&#xC774; phagosome&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC815; TLR9 &#xBAA8;&#xC9D1; A. fumigatus &#xD3EC;&#xC790;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC120;&#xD0DD; &#xB41C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xACF0; &#xD321;&#xC774; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; Ags&#xC758; &#xB514;&#xC2A4;&#xD50C;&#xB808;&#xC774; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC1C; &#xC544; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC77C;&#xCE58; &#xD588;&#xB2E4;. A. fumigatus phagosome TLR9 &#xBCF4;&#xD5D8;&#xD68C;&#xC0AC;&#xC758; spatiotemporal &#xADDC;&#xC81C; TLR2, TLR4, &#xBC0F; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; TLR &#xC2E0;&#xD638; &#xB3C5;&#xB9BD; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; TLR9 N &#xB9E8;&#xB05D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD84;&#xC5F4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC740; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC778; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; &#xBC0F; TLR9 &#xD3EC;&#xC7A5; &#xC18C;&#xBE44;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xAD6C;&#xD68D; &#xBC0F; A. fumigatus phagosomal &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xCD95;&#xC801;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; a&#xC5D0;&#xC11C; fumigatus &#xD3EC;&#xC790; &#xC2DD; &#xADE0; &#xC791;&#xC6A9; &#xD55C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC70; A. fumigatus phagosomes TLR9 &#xCC44;&#xC6A9;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xBA70; &#xD56D;&#xC9C4;&#xADE0; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751; TLR9 &#xC720;&#xB3C4; &#xC911;&#xC7AC; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

TLR9 &#xB204; fumigatus phagosomes&#xB97C; &#xC801;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xD558; &#xACE0; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; N &#xB9E8;&#xB05D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD84;&#xC5F4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xC694;&#xAD6C; &#xD55C;&#xB2E4;.

TLR9 reconoce ADN CpG no metilado e induce la respuesta inmune innata. TLR9 activaci&#xF3;n es un proceso de m&#xFA;ltiples pasos que requiere la escisi&#xF3;n proteol&#xED;tica y la trata de compartimentos para endolisos&#xF3;mica inducida por ligandos de se&#xF1;alizaci&#xF3;n. Sin embargo, las normas que rigen el tr&#xE1;fico subcelular din&#xE1;mica para TLR9 despu&#xE9;s de la absorci&#xF3;n de pat&#xF3;genos no se han establecido. En este estudio, se demuestra que la absorci&#xF3;n de Aspergillus fumigatus conidias inducida dr&#xE1;stica redistribuci&#xF3;n espacial de TLR9 a la membrana phagosomal de A. fumigatus fagosomas que contienen, pero no a bolas que contienen fagosomas de los macr&#xF3;fagos murinos. Espec&#xED;fico TLR9 reclutamiento a la fagosoma hongos fue consistente con A. fumigatus esporas en las etapas de germinaci&#xF3;n diferentes y mutantes seleccionados que afectan a la pantalla de AGS en la superficie de la c&#xE9;lula f&#xFA;ngica. La regulaci&#xF3;n espacio-temporal de TLR9 compartimentaci&#xF3;n del fagosoma A. fumigatus es independiente de TLR2, TLR4, y la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de TLR abajo. Nuestros datos demuestran que la TLR9 dominio N-terminal de corte proteol&#xED;tico fue cr&#xED;tico para el tr&#xE1;fico intracelular de &#xE9;xito y la acumulaci&#xF3;n de TLR9 en los compartimentos que contienen CpG y A. fumigatus phagosomal membranas. Nuestro estudio proporciona evidencia de un modelo en el que A. fumigatus la fagocitosis por los macr&#xF3;fagos de esporas espec&#xED;ficamente induce TLR9 contrataci&#xF3;n para A. fumigatus fagosomas y por lo tanto pueden mediar TLR9 inducidos antimic&#xF3;ticos la respuesta inmune innata.

TLR9 se reclut&#xF3; activamente a Aspergillus fumigatus y fagosomas Requiere el dominio N-terminal proteol&#xED;tica de corte para el tr&#xE1;fico intracelular adecuada

CD82 &#x662F; tetraspanin &#x5BB6;&#x65CF;&#xFF0C;&#x5176;&#x751F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x6700;&#x4F73;&#x63CF;&#x8FF0;&#x5728;&#x80BF;&#x7624;&#x8F6C;&#x79FB;&#x65B9;&#x9762;&#x7684;&#x6210;&#x5458;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;CD82 &#x8FD8;&#x5173;&#x8054;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x7C7B;&#x4E8C;&#x3001; &#x4E3B;&#x8981;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x76F8;&#x5BB9;&#x6027;&#x590D;&#x6742; (MHC) &#x6297;&#x539F;&#x6F14;&#x793A;&#x6587;&#x7A3F;&#x9014;&#x5F84;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x7C7B;&#x4E8C; MHC &#x5206;&#x5B50;&#x548C;&#x80BD;&#x88C5;&#x8F7D;&#x673A;&#x68B0;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA; CD63&#xFF0C;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A; tetraspanin&#xFF0C;&#x5728;&#x6297;&#x539F;&#x63D0;&#x5448;&#x7684; CD82 &#x6697;&#x793A;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x901A;&#x8FC7;&#x6210;&#x50CF; CD82 mRFP1 &#x5C0F;&#x5B66;&#x751F;&#x6D3B;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x75C5;&#x539F;&#x5438;&#x6536;&#x540E;&#x7684; CD82 &#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x91CD;&#x65B0;&#x6392;&#x5217;&#x3002;CD82 &#x663E;&#x793A;&#x5FEB;&#x901F;&#x548C;&#x65B0;&#x578B;&#x9690;&#x7403;&#x83CC;&#x6027;&#x542B; phagosomes &#x5177;&#x4F53;&#x62DB;&#x52DF;&#x76F8;&#x6BD4;&#x805A;&#x82EF;&#x4E59;&#x70EF;&#x5305;&#x542B; phagosomes&#xFF0C;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E; CD63&#x3002;CD82 &#x662F;&#x8FD8;&#x79EF;&#x6781;&#x62DB;&#x52DF;&#x5230;&#x5305;&#x542B;&#x5176;&#x4ED6;&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x771F;&#x83CC;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x767D;&#x8272;&#x5FF5;&#x73E0;&#x83CC;&#x548C;&#x9709;&#x83CC;&#x7684; phagosomes&#x3002;&#x771F;&#x83CC; phagosomes &#x7684; CD82 &#x62DB;&#x52DF;&#x53D1;&#x751F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E; Toll &#x6837;&#x53D7;&#x4F53; (&#x5355;&#x53CD;) &#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x62DB;&#x8058;&#x5E76;&#x4E0D;&#x662F;&#x5C40;&#x9650;&#x4E8E;&#x771F;&#x83CC;&#xFF0C;&#x5982;&#x7EC6;&#x83CC;&#x751F;&#x7269;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x3001; &#x91D1;&#x9EC4;&#x8272;&#x8461;&#x8404;&#x7403;&#x83CC;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x8BF1;&#x5BFC; phagosome CD82 &#x62DB;&#x52DF;&#x3002;CD82 &#x76F8;&#x4EA4;&#x541E;&#x9014;&#x5F84;&#x7531;&#x8102;&#x591A;&#x7CD6; (LPS)&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528; CD82 &#x5728;&#x8D29;&#x5356;&#x5C0F;&#x3001; &#x75C5;&#x539F;&#x76F8;&#x5173;&#x5206;&#x5B50;&#x6709;&#x7275;&#x8FDE;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x4E0E;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x8F66;&#x53A2;&#x53CA;&#x5176;&#x90E8;&#x5206;&#x91CD;&#x53E0;&#xFF0C;C.&#x9690;&#x7403;&#x83CC;&#x542B; phagosomes CD82 &#x62DB;&#x52DF;&#x53D1;&#x751F;&#x72EC;&#x7ACB; phagosome &#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x8367;&#x5149;&#x6210;&#x50CF;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E; CD82 &#x548C; MHC II &#x7C7B;&#x540C;&#x65F6;&#x51FA;&#x73B0;&#x5728; phagosome&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x53EF;&#x80FD;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x4E24;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x663E;&#x793A; CD82 tetraspanin &#x4E13;&#x95E8;&#x62DB;&#x52DF;&#x5230;&#x542B;&#x6709;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x7684; phagosomes &#x4E8B;&#x5148;&#x4E0E;&#x6EB6;&#x9176;&#x4F53;&#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x3002;

Tetraspanin CD82 &#x5E94;&#x8058;&#x524D;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x771F;&#x83CC;&#x548C;&#x7EC6;&#x83CC; phagosomes &#x662F;&#x4E13;&#x7684;&#x3002;

CD82 is a member of the tetraspanin superfamily, whose physiological role is best described in the context of cancer metastasis. However, CD82 also associates with components of the class II major histocompatibility complex (MHC) antigen presentation pathway, including class II MHC molecules and the peptide-loading machinery, as well as CD63, another tetraspanin, suggesting a role for CD82 in antigen presentation. Here, we observe the dynamic rearrangement of CD82 after pathogen uptake by imaging CD82-mRFP1 expressed in primary living dendritic cells. CD82 showed rapid and specific recruitment to Cryptococcus neoformans-containing phagosomes compared to polystyrene-containing phagosomes, similar to CD63. CD82 was also actively recruited to phagosomes containing other pathogenic fungi, including Candida albicans and Aspergillus fumigatus. Recruitment of CD82 to fungal phagosomes occurred independently of Toll-like receptor (TLR) signaling. Recruitment was not limited to fungi, as bacterial organisms, including Escherichia coli and Staphylococcus aureus, also induced CD82 recruitment to the phagosome. CD82 intersected the endocytic pathway used by lipopolysaccharide (LPS), implicating CD82 in trafficking of small, pathogen-associated molecules. Despite its partial overlap with lysosomal compartments, CD82 recruitment to C. neoformans-containing phagosomes occurred independently of phagosome acidification. Kinetic analysis of fluorescence imaging revealed that CD82 and class II MHC simultaneously appear in the phagosome, indicating that the two proteins may be associated. Together, these data show that the CD82 tetraspanin is specifically recruited to pathogen-containing phagosomes prior to fusion with lysosomes.

The tetraspanin CD82 is specifically recruited to fungal and bacterial phagosomes prior to acidification.

CD82 est un membre de la superfamille des t&#xE9;traspanines, dont le r&#xF4;le physiologique est mieux d&#xE9;crit dans le contexte de m&#xE9;tastases du cancer. Toutefois, CD82 associe &#xE9;galement avec des composants du complexe majeur d&#x26;#39;histocompatibilit&#xE9; de classe II (CMH) voie pr&#xE9;sentation de l&#x26;#39;antig&#xE8;ne, y compris mol&#xE9;cules de classe II du CMH et le peptide-machines de chargement, ainsi que CD63, un autre t&#xE9;traspanines, sugg&#xE9;rant un r&#xF4;le pour CD82 dans la pr&#xE9;sentation antig&#xE9;nique. Ici, nous observons le r&#xE9;arrangement dynamique de CD82 apr&#xE8;s l&#x26;#39;absorption des agents pathog&#xE8;nes par l&#x26;#39;imagerie CD82-mRFP1 exprim&#xE9; dans des cellules primaires dendritiques de vie. CD82 a montr&#xE9; le recrutement rapide et sp&#xE9;cifique &#xE0; Cryptococcus neoformans contenant phagosomes par rapport au polystyr&#xE8;ne contenant phagosomes, semblables &#xE0; CD63. CD82 a &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; activement recrut&#xE9;s pour phagosomes contenant des champignons pathog&#xE8;nes, y compris Candida albicans et Aspergillus fumigatus. Le recrutement de CD82 &#xE0; phagosomes fongiques s&#x26;#39;est produite ind&#xE9;pendamment du r&#xE9;cepteur Toll-like (TLR) de signalisation. Le recrutement a &#xE9;t&#xE9; ne se limitent pas &#xE0; des champignons, comme les organismes bact&#xE9;riens, dont Escherichia coli et Staphylococcus aureus, a &#xE9;galement induit le recrutement de CD82 du phagosome. CD82 a recoup&#xE9; la voie d&#x26;#39;endocytose utilis&#xE9;s par le lipopolysaccharide (LPS), impliquant CD82 dans le trafic de petites mol&#xE9;cules associ&#xE9;s &#xE0; des pathog&#xE8;nes. En d&#xE9;pit de ses chevauchement partiel avec des compartiments lysosomales, CD82 recrutement &#xE0; C. neoformans contenant phagosomes a eu lieu ind&#xE9;pendamment de l&#x26;#39;acidification du phagosome. L&#x26;#39;analyse cin&#xE9;tique de l&#x26;#39;imagerie de fluorescence a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que CD82 et CMH de classe II apparaissent simultan&#xE9;ment dans le phagosome, ce qui indique que les deux prot&#xE9;ines peut &#xEA;tre associ&#xE9;e. Ensemble, ces donn&#xE9;es montrent que la t&#xE9;traspanine CD82 est sp&#xE9;cifiquement recrut&#xE9;s pour des agents pathog&#xE8;nes contenant phagosomes avant la fusion avec les lysosomes.

Le CD82 est pr&#xE9;cis&#xE9;ment Tetraspanin Recrut&#xE9; pour phagosomes fongiques et bact&#xE9;riennes avant l&#x26;#39;acidification

CD82 ist Mitglied der Tetraspanin-Superfamilie, dessen physiologische Rolle im Rahmen der Krebsmetastase am besten beschrieben ist. Jedoch ordnet CD82 auch Komponenten von der Klasse II major Histocompatibility komplexes (MHC) Antigen Pr&auml;sentation Weg, einschlie&szlig;lich der Klasse II MHC-Molek&uuml;le und die Peptid-laden-Maschinen sowie CD63, ein weiterer Tetraspanin, was auf eine Rolle f&uuml;r CD82 in Antigen-Pr&auml;sentation. Hier beobachten wir die dynamische Neuordnung der CD82 nach Aufnahme der Erreger von imaging CD82-mRFP1 ausgedr&uuml;ckt in prim&auml;ren lebenden dendritischen Zellen. CD82 zeigten schnelle und spezifische Rekrutierung durch Cryptococcus Neoformans-haltigen Phagosomen im Vergleich zu Polystyrol-haltigen Phagosomen, &auml;hnlich dem CD63. CD82 war auch aktiv an Phagosomen mit anderen pathogenen Pilze, einschlie&szlig;lich Candida Albicans und Aspergillus Fumigatus rekrutiert. Anwerbung von CD82 f&uuml;r pilzartige Phagosomen aufgetreten unabh&auml;ngig von Toll-Like-Rezeptor (TLR) signalisieren. Rekrutierung beschr&auml;nkte sich nicht Pilze, bakterielle Organismen, einschlie&szlig;lich Escherichia coli und Staphylococcus Aureus, auch CD82 Anwerbung f&uuml;r die Phagosom gelassen. CD82 durchschnitten den endocytic Weg von Lipopolysaccharid (LPS), verwendet Nicht&uuml;bernahme CD82 im Handel mit kleinen, Pathogen-assoziierte Molek&uuml;le. Trotz seiner teilweise &Uuml;berschneidungen mit lysosomalen F&auml;chern aufgetreten CD82 Anwerbung f&uuml;r C. Neoformans-haltigen Phagosomen unabh&auml;ngig von Phagosom Versauerung. Kinetische Analyse der Fluoreszenz-Bildgebung ergab, dass CD82 und Klasse II MHC gleichzeitig angezeigt in das Phagosom, dass zwei Proteine zusammenh&auml;ngen k&ouml;nnten. Gemeinsam zeigen diese Daten, dass die CD82 Tetraspanin speziell f&uuml;r Pathogen-haltigen Phagosomen vor der Fusion mit Lysosomen angeworben wird.

Die Tetraspanin CD82 ist speziell f&uuml;r Pilz- und bakterielle Phagosomen vor Versauerung angeworben.

CD82 &egrave; un membro della superfamiglia tetraspanin, cui ruolo fisiologico &egrave; meglio descritta nel contesto delle metastasi del cancro. Tuttavia, CD82 associa anche componenti della classe II istocompatibilit&agrave; complex (MHC) antigene presentazione via, tra cui molecole MHC di II classe e le macchine di caricamento del peptide, come pure CD63, tetraspanin un altro, suggerendo un ruolo per CD82 nella presentazione dell&#39;antigene. Qui, osserviamo la ridisposizione dinamica della CD82 dopo assorbimento di agenti patogeni da imaging CD82-mRFP1 espresse in cellule dendritiche viventi primaria. CD82 ha mostrato rapida e specifica assunzione a phagosomes di Cryptococcus neoformans-contenente rispetto al polistirolo contenenti phagosomes, simili a CD63. CD82 anche attivamente &egrave; stato reclutato per phagosomes contenenti altri funghi patogeni, tra cui la Candida albicans e Aspergillus fumigatus. Reclutamento di CD82 a phagosomes fungine si sono verificati indipendentemente dalla segnalazione del recettore Toll-like (TLR). Reclutamento non era limitato ai funghi, come gli organismi batterici, tra cui Escherichia coli e Staphylococcus aureus, anche indotta CD82 reclutamento per il Fagosoma. CD82 intersecato il sentiero endocitico utilizzato dal lipopolisaccaride (LPS), implicando CD82 traffico di piccole molecole associate all&#39;agente patogeno. Nonostante la sua parziale sovrapposizione con compartimenti lisosomiali, CD82 reclutamento di c. neoformans contenenti phagosomes si &egrave; verificato indipendentemente dall&#39;acidificazione del Fagosoma. Analisi cinetica di formazione immagine di fluorescenza ha rivelato che CD82 e classe II MHC contemporaneamente appaiono in Fagosoma, che indica che le due proteine possono essere associate. Insieme, questi dati mostrano che il tetraspanin CD82 &egrave; specificamente reclutato al priore di phagosomes contenenti agenti patogeni alla fusione con i lisosomi.

Tetraspanin CD82 specificamente &egrave; reclutato per fungine e batteriche phagosomes prima dell&#39;acidificazione.

CD82&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x6700;&#x9AD8;&#x306E;&#x764C;&#x8EE2;&#x79FB;&#x306E;&#x6587;&#x8108;&#x3067;&#x8AAC;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B9;&#x30D1;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;II&#x4E3B;&#x8981;&#x7D44;&#x7E54;&#x9069;&#x5408;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#xFF08;MHC&#xFF09;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;II MHC&#x5206;&#x5B50;&#x3068;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x6A5F;&#x68B0;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;CD63&#x3001;&#x5225;&#x306E;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B9;&#x30D1;&#x30CB;&#x30F3;&#x3001;&#x6297;&#x539F;&#x63D0;&#x793A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;CD82&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x6297;&#x539F;&#x63D0;&#x793A;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x6301;&#x3064;CD82&#x306B;&#x3082;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x751F;&#x6D3B;&#x306E;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;CD82-mRFP1&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x6442;&#x53D6;&#x5F8C;&#x306E;CD82&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; CD82&#x306F;&#x3001;CD63&#x306B;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x305F;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C1;&#x30EC;&#x30F3;&#x542B;&#x6709;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30B3;&#x30C3;&#x30AB;&#x30B9; - &#x30CD;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A9;&#x30EB;&#x30DE;&#x30F3;&#x30B9;&#x542B;&#x6709;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3078;&#x306E;&#x8FC5;&#x901F;&#x304B;&#x3064;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x52D5;&#x54E1;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; CD82&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306B;&#x30AB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30C0;&#x3068;&#x30A2;&#x30B9;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AE;&#x30EB;&#x30B9;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x4ED6;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x771F;&#x83CC;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x63A1;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x771F;&#x83CC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3078;&#x306E;CD82&#x306E;&#x52DF;&#x96C6;&#x306F;&#x3001;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x3001;Toll&#x69D8;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;TLR&#xFF09;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3068;&#x9EC4;&#x8272;&#x30D6;&#x30C9;&#x30A6;&#x7403;&#x83CC;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x3082;&#x3001;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;CD82&#x52DF;&#x96C6;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x52DF;&#x96C6;&#x306F;&#x3001;&#x83CC;&#x985E;&#x306B;&#x9650;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002; CD82&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x95A2;&#x9023;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x8F38;&#x9001;&#x306B;CD82&#x304C;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30EA;&#x30DD;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B5;&#x30C3;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#xFF08;LPS&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x4EA4;&#x5DEE;&#x3002;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x533A;&#x753B;&#x3068;&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306A;&#x91CD;&#x8907;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;C. neoformans&#x306E;&#x542B;&#x6709;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3078;&#x306E;CD82&#x52DF;&#x96C6;&#x306F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x9178;&#x6027;&#x5316;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x52D5;&#x614B;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x306F;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;CD82&#x304A;&#x3088;&#x3073;MHC&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;II&#x304C;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;CD82&#x306E;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B9;&#x30D1;&#x30CB;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x878D;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x524D;&#x306B;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x542B;&#x6709;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x52D5;&#x54E1;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B9;&#x30D1;&#x30CB;&#x30F3;CD82&#x306F;&#x3001;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x9178;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x524D;&#x306B;&#x771F;&#x83CC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x83CC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x52D5;&#x54E1;&#x3055;&#x308C;

Cd82&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC5ED;&#xD560;&#xC740; &#xCD5C;&#xACE0;&#xC758; &#xC554; &#xC804;&#xC774;&#xC758; &#xB9E5;&#xB77D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; tetraspanin superfamily&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, CD82 &#xB610;&#xD55C; &#xACBD;&#xB85C;&#xC758; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; II &#xC8FC;&#xC694; &#xC870;&#xC9C1; &#xC801;&#xD569;&#xC131; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; (MHC) &#xD56D; &#xC6D0; &#xD504;&#xB808; &#xC820; &#xD14C;&#xC774; &#xC158;, &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; II MHC &#xBD84;&#xC790;&#xC640;&#xB294; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xB85C;&#xB4DC; &#xAE30;&#xACC4;&#xB85C; CD63, &#xB2E4;&#xB978; tetraspanin &#xD56D; &#xC6D0; &#xC81C;&#xC2DC;&#xC5D0; cd82&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; CD82 mRFP1 &#xAE30;&#xBCF8; &#xC0DD;&#xD65C; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00; &#xD6C4; cd82&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xC7AC;&#xBC30;&#xCE58;&#xB97C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. CD82 &#xBE60;&#xB978; &#xC8FC;&#xBA70; Cryptococcus &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; neoformans phagosomes&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC815; &#xBAA8;&#xC9D1;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xD3F4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xD2F0; &#xB80C;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; phagosomes, cd63&#xC640; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. CD82 Candida albicans &#xBC0F; &#xB204; fumigatus &#xB4F1; &#xB2E4;&#xB978; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xADE0; &#xB958;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; phagosomes&#xB97C; &#xC801;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCC44;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xACF0; &#xD321;&#xC774; phagosomes cd82&#xC758; &#xCC44;&#xC6A9; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD1B5;&#xD589;&#xC138; &#xAC19;&#xC774; (TLR) &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC4;&#xB3C4;&#xB85C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD3EC;&#xB3C4; &#xC0C1; &#xAD6C; &#xADE0;, &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xB4F1; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4; &#xB610;&#xD55C; &#xC720;&#xB3C4; phagosome CD82 &#xCC44;&#xC6A9; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xACF0; &#xD321;&#xC774;, &#xC81C;&#xD55C; &#xD588;&#xB2E4;. CD82 CD82, &#xC791;&#xC740; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; endocytic &#xD1B5;&#xB85C; lipopolysaccharide (LPS)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAD50;&#xCC28;. Lysosomal &#xAD6C;&#xD68D;&#xC758; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801; &#xC911;&#xBCF5;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; CD82 C. neoformans &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; phagosomes &#xCC44;&#xC6A9; phagosome &#xC0B0;&#xC131;&#xD654; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD615;&#xAD11; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC758; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xBD84;&#xC11D; &#xACF5;&#xAC1C; CD82 &#xBC0F; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; II MHC &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xB098;&#xD0C0;&#xB098;&#xB294;&#xC9C0;&#xB294; phagosome&#xC5D0; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xB450; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; CD82 tetraspanin &#xBAA8;&#xC9D1; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC880;&#xACFC; &#xC735;&#xD569; &#xD558;&#xAE30; phagosomes &#xC804;&#xC5D0; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xC744; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

Tetraspanin CD82 &#xD2B9;&#xBCC4;&#xD788; &#xC0B0;&#xC131;&#xD654; &#xC804;&#xC5D0; &#xACF0; &#xD321;&#xC774; &#xBC0F; &#xC138;&#xADE0; phagosomes&#xB97C; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

CD82 es un miembro de la superfamilia tetraspanin, cuyo papel fisiol&#xF3;gico se describe mejor en el contexto de la met&#xE1;stasis del c&#xE1;ncer. Sin embargo, CD82 tambi&#xE9;n se asocia con los componentes del complejo de la clase II de histocompatibilidad (MHC) v&#xED;a la presentaci&#xF3;n de ant&#xED;geno, incluyendo clase II mol&#xE9;culas MHC y el p&#xE9;ptido de maquinaria de carga, as&#xED; como CD63, tetraspaninas otra, lo que sugiere un papel de CD82 en la presentaci&#xF3;n antig&#xE9;nica. En este sentido, se observa la reestructuraci&#xF3;n din&#xE1;mica de CD82 despu&#xE9;s de la absorci&#xF3;n del pat&#xF3;geno mediante im&#xE1;genes CD82-mRFP1 expresado en c&#xE9;lulas primarias de vida dendr&#xED;ticas. CD82 mostr&#xF3; una contrataci&#xF3;n r&#xE1;pida y espec&#xED;fica a Cryptococcus neoformans que contienen fagosomas en comparaci&#xF3;n con los de poliestireno que contienen fagosomas, similar a CD63. CD82 tambi&#xE9;n fue reclutado activamente a los fagosomas que contienen otros hongos pat&#xF3;genos, incluyendo Candida albicans y Aspergillus fumigatus. La contrataci&#xF3;n de CD82 de fagosomas hongos producido en forma independiente de los receptores Toll-like (TLR) de se&#xF1;alizaci&#xF3;n. El reclutamiento no se limita a los hongos, como los organismos bacterianos, incluyendo Escherichia coli y Staphylococcus aureus, tambi&#xE9;n inducida por CD82 contrataci&#xF3;n para el fagosoma. CD82 cruza la v&#xED;a endoc&#xED;tica utilizado por lipopolisac&#xE1;rido (LPS), que implican a CD82 en el tr&#xE1;fico de peque&#xF1;as mol&#xE9;culas asociadas a pat&#xF3;genos. A pesar de sus superposici&#xF3;n parcial con compartimentos lisosomales, CD82 contrataci&#xF3;n de C. neoformans que contienen fagosomas se produjo de forma independiente de la acidificaci&#xF3;n del fagosoma. El an&#xE1;lisis cin&#xE9;tico de im&#xE1;genes de fluorescencia revel&#xF3; que CD82 y MHC de clase II simult&#xE1;neamente aparecen en el fagosoma, lo que indica que las dos prote&#xED;nas pueden estar asociados. En conjunto, estos datos muestran que la tetraspanin CD82 est&#xE1; contratado espec&#xED;ficamente para pat&#xF3;genos que contienen fagosomas antes de la fusi&#xF3;n con los lisosomas.

El CD82 es tetraspanin Espec&#xED;ficamente Reclutado para fagosomas de hongos y bacterias Antes de la acidificaci&#xF3;n

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&#x63A7;&#x5236;&#x548C;&#x64CD;&#x7EB5;&#x7684;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x95F4;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x5149;&#x5B66;&#x9677;&#x9631;&#x3002;

The application of live cell imaging allows direct visualization of the dynamic interactions between cells of the immune system. Some preliminary observations challenge long-held beliefs about immune responses to microorganisms; however, the lack of spatial and temporal control between the phagocytic cell and microbe has rendered focused observations into the initial interactions of host response to pathogens difficult. This paper outlines a method that advances live cell imaging by integrating a spinning disk confocal microscope with an optical trap, also known as an optical tweezer, in order to provide exquisite spatial and temporal control of pathogenic organisms and place them in proximity to host cells, as determined by the operator. Polymeric beads and live, pathogenic organisms (Candida albicans and Aspergillus fumigatus) were optically trapped using non-destructive forces and moved adjacent to living cells, which subsequently phagocytosed the trapped particle. High resolution, transmitted light and fluorescence-based movies established the ability to observe early events of phagocytosis in living cells. To demonstrate the broad applicability of this method to immunological studies, anti-CD3 polymeric beads were also trapped and manipulated to form synapses with T cells in vivo, and time-lapse imaging of synapse formation was also obtained. By providing a method to exert fine control of live pathogens with respect to immune cells, cellular interactions can be captured by fluorescence microscopy with minimal perturbation to cells and can yield powerful insight into early responses of innate and adaptive immunity.

Control and manipulation of pathogens with an optical trap for live cell imaging of intercellular interactions.

L&#x26;#39;application de l&#x26;#39;imagerie des cellules vivantes permet la visualisation directe des interactions dynamiques entre les cellules du syst&#xE8;me immunitaire. Quelques observations pr&#xE9;liminaires d&#xE9;fi &#xE0; long croyances au sujet de la r&#xE9;ponse immunitaire &#xE0; des micro-organismes, mais le manque de contr&#xF4;le spatial et temporel entre la cellule phagocytaire et microbe a rendus port&#xE9; observations sur les interactions initiales de r&#xE9;ponse de l&#x26;#39;h&#xF4;te aux agents pathog&#xE8;nes difficiles. Le pr&#xE9;sent document d&#xE9;crit une m&#xE9;thode que les progr&#xE8;s vivre l&#x26;#39;imagerie cellulaire par l&#x26;#39;int&#xE9;gration d&#x26;#39;un microscope confocal &#xE0; disque rotatif un pi&#xE8;ge optique, &#xE9;galement connu sous le nom une pince optique, afin de fournir exquise de contr&#xF4;le spatial et temporel d&#x26;#39;organismes pathog&#xE8;nes et de les placer &#xE0; proximit&#xE9; des cellules h&#xF4;tes, tel que d&#xE9;termin&#xE9; par l&#x26;#39;op&#xE9;rateur. Les granules et les organismes vivants pathog&#xE8;nes (Candida albicans et Aspergillus fumigatus) ont &#xE9;t&#xE9; captur&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;aide optiquement non-destructrices des forces et a d&#xE9;m&#xE9;nag&#xE9; &#xE0; c&#xF4;t&#xE9; de cellules vivantes, qui ont ensuite phagocyt&#xE9;es la particule pi&#xE9;g&#xE9;e. Haute r&#xE9;solution, transmise films l&#xE9;gers et bas&#xE9; sur la fluorescence cr&#xE9;&#xE9; la possibilit&#xE9; d&#x26;#39;observer les &#xE9;v&#xE9;nements pr&#xE9;coces de la phagocytose dans les cellules vivantes. Pour d&#xE9;montrer la large applicabilit&#xE9; de cette m&#xE9;thode pour des &#xE9;tudes immunologiques, anti-CD3 perles polym&#xE8;res ont &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; pris au pi&#xE8;ge et manipul&#xE9;es pour former des synapses avec les cellules T in vivo, et imagerie time-lapse de formation de la synapse ont &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; obtenues. En fournissant une m&#xE9;thode d&#x26;#39;exercer un contr&#xF4;le pr&#xE9;cis de pathog&#xE8;nes vivants en ce qui concerne les cellules immunitaires, les interactions cellulaires peuvent &#xEA;tre captur&#xE9;s par microscopie &#xE0; fluorescence avec une perturbation minimale pour les cellules et peut donner un aper&#xE7;u puissante dans les r&#xE9;ponses au d&#xE9;but de l&#x26;#39;immunit&#xE9; inn&#xE9;e et adaptative.

Contr&#xF4;le et la manipulation des agents pathog&#xE8;nes d&#x26;#39;un pi&#xE8;ge optique pour l&#x26;#39;imagerie des cellules vivantes des interactions intercellulaires

Die Anwendung von live Cell Imaging erm&ouml;glicht direkte Visualisierung der dynamischen Wechselwirkungen zwischen Zellen des Immunsystems. Einige Vorbemerkungen fordern lang gehegte &Uuml;berzeugungen &uuml;ber Immunantworten zu Mikroorganismen; Allerdings hat die mangelnde r&auml;umliche und zeitliche Kontrolle zwischen dem phagozytische Zelle und Mikrobe gezielte Beobachtungen in die ersten Interaktionen der Wirtsantwort gegen Krankheitserreger schwierig gerendert. Dieses Papier legt eine Methode, dass Fortschritte Zelle Darstellung Leben durch die Integration eines drehenden Scheibe Konfokales Mikroskops mit einer optischen Falle, auch eine optische Pinzette, um exquisite r&auml;umliche und zeitliche Steuerung der pathogenen Organismen und legen Sie sie in der N&auml;he Wirtszellen, wie vom Betreiber bestimmt. Polymer Perlen und live, pathogenen Organismen (Candida Albicans und Aspergillus Fumigatus) wurden optisch gefangen, mittels nicht-destruktive Kr&auml;fte und angrenzend an lebenden Zellen, die anschlie&szlig;end das aufgefangene Partikel phagozytierte verschoben. Hohe Aufl&ouml;sung, &uuml;bertrug Licht und Fluoreszenz basierenden Filmen etabliert die F&auml;higkeit, Fr&uuml;he Veranstaltungen der Phagozytose in lebenden Zellen beobachten. Um die breite Anwendbarkeit dieser Methode auf immunologische Studien zu demonstrieren, wurden Anti-CD3 Polymer Perlen auch gefangen in Form Synapsen mit T-Zellen in vivo manipuliert und Zeitraffer Bildgebung Synapse-Formation wurde auch erhalten. Durch die Bereitstellung einer Methode, um feine Kontrolle Leben Krankheitserreger in Bezug auf Immunzellen, zellul&auml;re Interaktionen durch Fluoreszenzmikroskopie mit minimaler St&ouml;rung auf Zellen erfasst werden k&ouml;nnen und leistungsf&auml;hige Einblick in fr&uuml;hen Antworten der angeborenen und erworbenen Immunit&auml;t ergeben k&ouml;nnen.

Kontrolle und Manipulation von Krankheitserregern mit einer optischen Falle f&uuml;r live Cell Imaging interzellul&auml;re Wechselwirkungen.

L&#39;applicazione di imaging cellulare diretta permette la visualizzazione diretta delle interazioni dinamiche tra le cellule del sistema immunitario. Alcune osservazioni preliminari sfidano lunga convinzioni sulla risposta immunitaria ai microrganismi; Tuttavia, la mancanza di controllo spaziale e temporale tra la cellula fagocitaria e microbo ha reso difficile osservazioni mirate nelle interazioni iniziali della risposta ospite ad agenti patogeni. Questo documento delinea un metodo che anticipi live imaging cellulare integrando un microscopio confocale del disco rotante con un&#39;ottica trappola, noto anche come una pinzetta ottica, al fine di fornire squisito controllo spaziale e temporale degli organismi patogeni e posizionarli in prossimit&agrave; di cellule ospiti, come determinato dall&#39;operatore. PERLINE polimerici e organismi vivi, patogeni (Candida albicans e Aspergillus fumigatus) erano intrappolati otticamente usando le forze non-distruttive e spostato adiacenti alle cellule viventi, che successivamente phagocytosed la particella intrappolata. Luce emessa ad alta risoluzione e filmati basati sulla fluorescenza stabilirono la possibilit&agrave; di osservare i primi eventi della fagocitosi in cellule viventi. Per dimostrare l&#39;ampia applicabilit&agrave; di questo metodo per studi immunologici, anti-CD3 polimerici perline erano anche intrappolati e manipolati a forma sinapsi con le cellule T in vivo, e time-lapse imaging di formazione sinapsi anche &egrave; stato ottenuto. Fornendo un metodo per esercitare un controllo accurato del live patogeni nei confronti di cellule del sistema immunitario, interazioni cellulari possono essere catturate da microscopia di fluorescenza con minima perturbazione alle cellule e possono produrre potente intuizione prime risposte dell&#39;immunit&agrave; innata e adattiva.

Controllo e la manipolazione di agenti patogeni con un&#39;ottica trappola per l&#39;acquisizione diretta delle cellule delle interazioni intercellulari.

&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30BB;&#x30EB;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x4E88;&#x5099;&#x7684;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306F;&#x3001;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306E;&#x9577;&#x5E74;&#x306E;&#x4FE1;&#x5FF5;&#x306B;&#x6311;&#x6226;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x98DF;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x304C;&#x56F0;&#x96E3;&#x306A;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3092;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C0;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7A3F;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x9032;&#x6B69;&#x306F;&#x75C5;&#x539F;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x7D76;&#x5999;&#x306A;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#x306A;&#x5236;&#x5FA1;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x8FD1;&#x63A5;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x914D;&#x7F6E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x5149;&#x30D4;&#x30F3;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5149;&#x5B66;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x3001;&#x3068;&#x30B9;&#x30D4;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7D71;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x751F;&#x304D;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x6982;&#x8AAC;&#x3057;as&#x6F14;&#x7B97;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x3084;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x3001;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x751F;&#x7269;&#xFF08;&#x30AB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30C0;&#x3068;&#x30A2;&#x30B9;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AE;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF09;&#x306F;&#x5149;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x7834;&#x58CA;&#x7684;&#x306A;&#x529B;&#x3092;&#x4F7F;&#x3063;&#x3066;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x9589;&#x3058;&#x8FBC;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x7C92;&#x5B50;&#x3092;&#x8CAA;&#x98DF;&#x751F;&#x304D;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x96A3;&#x63A5;&#x3057;&#x3066;&#x79FB;&#x52D5;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9AD8;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x3001;&#x900F;&#x904E;&#x5149;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30E0;&#x30FC;&#x30D3;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x304D;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x98DF;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x5B66;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3078;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x9069;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6297;CD3&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x3055;&#x308C;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x306E;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3057;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30E9;&#x30D7;&#x30B9;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x200B;&#x200B;&#x3001;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306E;&#x5FAE;&#x8ABF;&#x6574;&#x3092;&#x767A;&#x63EE;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306E;&#x6442;&#x52D5;&#x3092;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3067;&#x6355;&#x6349;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x3068;&#x7372;&#x5F97;&#x514D;&#x75AB;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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La aplicaci&#xF3;n de im&#xE1;genes de c&#xE9;lulas vivas permite la visualizaci&#xF3;n directa de las interacciones din&#xE1;micas entre las c&#xE9;lulas del sistema inmune. Algunas observaciones preliminares desafiar a las viejas creencias acerca de la respuesta inmune a los microorganismos, sin embargo, la falta de control espacial y temporal entre la c&#xE9;lula fagoc&#xED;tica y el microbio ha hecho observaciones se centr&#xF3; en las interacciones iniciales de la respuesta del hu&#xE9;sped a los pat&#xF3;genos dif&#xED;ciles. Este documento describe un m&#xE9;todo que avanza vivo im&#xE1;genes de c&#xE9;lulas mediante la integraci&#xF3;n de un microscopio confocal de disco giratorio con una trampa &#xF3;ptica, tambi&#xE9;n conocida como una pinza &#xF3;ptica, a fin de proporcionar un exquisito control espacial y temporal de organismos pat&#xF3;genos y colocarlos en la proximidad de las c&#xE9;lulas hu&#xE9;sped, seg&#xFA;n lo determinado por el operador. Perlas de pol&#xED;mero y de los organismos vivos, pat&#xF3;genos (Candida albicans y Aspergillus fumigatus) quedaron atrapados &#xF3;pticamente usando no destructivas fuerzas y se traslad&#xF3; junto a las c&#xE9;lulas vivas, que posteriormente fagocitados la part&#xED;cula atrapada. De alta resoluci&#xF3;n, transmite pel&#xED;culas de luz y fluorescencia basada en establecer la capacidad de observar los acontecimientos iniciales de la fagocitosis de las c&#xE9;lulas vivas. Para demostrar la amplia aplicabilidad de este m&#xE9;todo para los estudios inmunol&#xF3;gicos, anti-CD3 perlas polim&#xE9;ricas fueron atrapados tambi&#xE9;n y se manipula para formar sinapsis con las c&#xE9;lulas T in vivo, y el tiempo de im&#xE1;genes a intervalos de formaci&#xF3;n de sinapsis se obtuvo tambi&#xE9;n. Al proporcionar un m&#xE9;todo para ejercer un control preciso de pat&#xF3;genos vivos con respecto a las c&#xE9;lulas inmunes, las interacciones celulares pueden ser capturados por microscop&#xED;a de fluorescencia con un m&#xED;nimo de perturbaci&#xF3;n a las c&#xE9;lulas y pueden producir una poderosa comprensi&#xF3;n de las respuestas iniciales de la inmunidad innata y adaptativa.

Michael L. Cardenas

Department of Medicine,
Division of Infectious Diseases,
Department of Medicine, Division of Infectious Diseases

Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School

Use of an Optical Trap for Study of Host-Pathogen Interactions for Dynamic Live Cell Imaging

Michael L. Cardenas

Department of Medicine,Division of Infectious Diseases,Department of Medicine, Division of Infectious Diseases

Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School

Use of an Optical Trap for Study of Host-Pathogen Interactions for Dynamic Live Cell Imaging

Department of Medicine,
Division of Infectious Diseases,
Department of Medicine, Division of Infectious Diseases