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A Simple Chelex Protocol for DNA Extraction from <em>Anopheles</em> spp.

Endemic countries are increasingly adopting molecular tools for  efficient typing, identification and surveillance against malaria parasites and  vector ...

Malaria Institute at Macha

En Zambie, le traitement de premi&egrave;re intention contre le paludisme sans complications est art&eacute;misinine (ACT), avec l&#39;art&eacute;m&eacute;ther-lum&eacute;fantrine actuellement utilis&eacute;. Toutefois, le r&eacute;gime antifoliques, sulphadoxine-pyrim&eacute;thamine (SP), demeure le traitement de choix chez les enfants pesant moins de 5 kg et &eacute;galement dans les futures mamans. SP est aussi le m&eacute;dicament de choix pour le traitement pr&eacute;ventif intermittent pendant la grossesse et sert de stand by traitement lors des ruptures de stocks ACT. La pr&eacute;sente &eacute;tude a &eacute;valu&eacute; l&#39;&eacute;tat de Plasmodium falciparum point mutations associ&eacute;es &agrave; la r&eacute;sistance aux m&eacute;dicaments antifoliques dans les environs de Macha.

Escalade des mutations de r&eacute;sistance m&eacute;dicaments antifoliques Plasmodium falciparum &agrave; Macha, Zambie rurale.

In Sambia ist die Erstbehandlung f&uuml;r unkomplizierte Malaria Kombinationstherapie mit Artemisinin (ACT) mit Artemether-Lumefantrin gerade verwendet wird. Hatte das struktur&auml;hnliche, Sulphadoxine-Pyrimethamin (SP), bleibt jedoch die Therapie der Wahl bei Kindern mit einem Gewicht von weniger als 5 kg und auch werdende M&uuml;tter. SP ist auch das Wahl Medikament zur intermittierenden pr&auml;ventiven Therapie in der Schwangerschaft und dient als Stand-by-Behandlung w&auml;hrend ACT hat Nachteilen. Die aktuelle Studie untersucht den Status von Plasmodium Falciparum Punktmutationen struktur&auml;hnliche Resistenzen in der Gegend um Macha zugeordnet.

Plasmodium Falciparum struktur&auml;hnliche Droge Widerstand Mutationen in Macha, l&auml;ndliche Sambia eskaliert.

In Zambia la prima linea di trattamento per la malaria non complicata &egrave; la terapia di combinazione di artemisinina (ACT), con artemether-lumefantrina attualmente in uso. Tuttavia, il regime antifolate, sulphadoxine-pirimetamina (SP), resta la terapia di scelta nei bambini di peso inferiore a 5 kg e anche in donne in gravidanza. SP &egrave; anche il farmaco di scelta per la terapia preventiva intermittente in gravidanza e serve come trattamento di stand-by durante stock out ACT. Lo studio attuale ha valutato lo stato del Plasmodium falciparum punto mutazioni associate a farmacoresistenza antifolate nella zona intorno a Macha.

Escalation Plasmodium falciparum antifolate farmaco resistenza mutazioni Macha, Zambia rurale.

&#x5728;&#x8D5E;&#x6BD4;&#x4E9A;&#x7684;&#x4E00;&#x7EBF;&#x6CBB;&#x7597;&#x7B80;&#x5355;&#x759F;&#x75BE;&#x662F;&#x9752;&#x84BF;&#x7D20;&#x7EFC;&#x5408;&#x7597;&#x6CD5; &#xFF08;&#x6CD5;&#xFF09; &#x84BF;&#x7532;&#x919A;&#x82B4;&#x5F53;&#x524D;&#x6B63;&#x5728;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;antifolate &#x517B;&#x751F;&#xFF0C;sulphadoxine-&#x4E59;&#x80FA;&#x5627;&#x5576; (SP)&#xFF0C;&#x4ECD;&#x7136;&#x662F;&#x9009;&#x62E9;&#x5C0F;&#x4E8E; 5 &#x516C;&#x65A4;&#x7684;&#x513F;&#x7AE5;&#x548C;&#x5B55;&#x5987;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;SP &#x4E5F;&#x662F;&#x9009;&#x62E9;&#x836F;&#x7269;&#x6CBB;&#x7597;&#x598A;&#x5A20;&#x4E2D;&#x95F4;&#x6B47;&#x6027;&#x9884;&#x9632;&#x6CBB;&#x7597;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5F85;&#x547D;&#x671F;&#x95F4;&#x6CD5;&#x80A1;&#x7968;&#x51FA;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;&#x76EE;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8BC4;&#x4F30;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x4E0E;&#x9A6C;&#x5361;&#x5468;&#x56F4;&#x5730;&#x533A; antifolate &#x8010;&#x836F;&#x6027;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;

&#x4E0D;&#x65AD;&#x5347;&#x7EA7;&#x7684;&#x9A6C;&#x5361;&#xFF0C;&#x519C;&#x6751;&#x8D5E;&#x6BD4;&#x4E9A;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B; antifolate &#x836F;&#x7269;&#x6297;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;

In Zambia the first-line treatment for uncomplicated malaria is artemisinin combination therapy (ACT), with artemether-lumefantrine currently being used. However, the antifolate regimen, sulphadoxine-pyrimethamine (SP), remains the treatment of choice in children weighing less than 5 kg and also in expectant mothers. SP is also the choice drug for intermittent preventive therapy in pregnancy and serves as stand-by treatment during ACT stock outs. The current study assessed the status of Plasmodium falciparum point mutations associated with antifolate drug resistance in the area around Macha.

Escalating Plasmodium falciparum antifolate drug resistance mutations in Macha, rural Zambia.

&#x30B6;&#x30F3;&#x30D3;&#x30A2;&#x3067;&#x306F;&#x5408;&#x4F75;&#x75C7;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x6CBB;&#x7642;&#x85AC;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C6;&#x30DF;&#x30B7;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x4F75;&#x7528;&#x7642;&#x6CD5; &#xFF08;&#x6CD5;&#xFF09;&#x3001;&#x30A2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF; lumefantrine &#x73FE;&#x5728;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;antifolate &#x7642;&#x6CD5;&#x3001;sulphadoxine-&#x30D4;&#x30EA;&#x30E1;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3; (SP) &#x9078;&#x629E; 5 kg &#x672A;&#x6E80;&#x306E;&#x5B50;&#x4F9B;&#x3084;&#x598A;&#x5A66;&#x3067;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x6B8B;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;SP &#x3082;&#x598A;&#x5A20;&#x3067;&#x65AD;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x4E88;&#x9632;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x85AC;&#x3067;&#x3001;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6CBB;&#x7642;&#x6CD5;&#x5728;&#x5EAB;&#x5207;&#x308C;&#x4E2D;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x70B9; antifolate &#x85AC;&#x5264;&#x8010;&#x6027;&#x62B9;&#x8336;&#x306E;&#x5468;&#x56F2;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3002;

&#x62B9;&#x8336;&#x3001;&#x8FB2;&#x6751;&#x30B6;&#x30F3;&#x30D3;&#x30A2;&#x3067;&#x306E;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B; antifolate &#x85AC;&#x5264;&#x8010;&#x6027;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x30A8;&#x30B9;&#x30AB;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC7A0;&#xBE44;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xC21C;&#xD55C; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xB77C;&#xC778; &#xCE58;&#xB8CC; artemisinin &#xCF64;&#xBE44;&#xB124;&#xC774;&#xC158; &#xCE58;&#xB8CC; (ACT), artemether-lumefantrine &#xD604;&#xC7AC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xC911;&#xC778;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, sulphadoxine-pyrimethamine (SP) antifolate &#xCC98;&#xBC29; &#xC120;&#xD0DD; &#xBB34;&#xAC8C; 5kg &#xBBF8;&#xB9CC; &#xC5B4;&#xB9B0;&#xC774; &#xC784;&#xC0B0;&#xBD80;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C; &#xC784;&#xC2E0;&#xC5D0; &#xAC04;&#xD5D0;&#xC801;&#xC778; &#xC608;&#xBC29; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC758; &#xC5EC;&#xC9C0;&#xAC00; &#xC57D;&#xBB3C; SP &#xACE0; &#xB300;&#xAE30;&#xC911; &#xCE58;&#xB8CC; &#xBC95; &#xC7AC;&#xACE0; &#xC544;&#xC6C3; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC5ED;&#xD560;. &#xD604;&#xC7AC; &#xC5F0;&#xAD6C; Plasmodium falciparum &#xD3EC;&#xC778;&#xD2B8; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; antifolate &#xC57D;&#xBB3C; &#xC800;&#xD56D; Macha &#xC8FC;&#xBCC0; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xAD00; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xD3C9;&#xAC00;.

Plasmodium falciparum antifolate &#xC57D;&#xBB3C; &#xC800;&#xD56D;&#xC740; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; Macha, &#xB18D;&#xCD0C; &#xC7A0;&#xBE44;&#xC544;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xC870;.

En Zambia el tratamiento de primera l&iacute;nea para el paludismo es la terapia de la combinaci&oacute;n de artemisinina (ACT), con artem&eacute;ter-lumefantrina se utiliza actualmente. Sin embargo, el r&eacute;gimen antifolatos, sulfadoxina-pirimetamina (SP), sigue siendo el tratamiento de elecci&oacute;n en ni&ntilde;os de menos de 5 kg y tambi&eacute;n en embarazadas. SP es tambi&eacute;n la droga de elecci&oacute;n para el tratamiento preventivo intermitente en embarazo y sirve como tratamiento de stand-by durante salidas stock ACT. El presente estudio evalu&oacute; el estado de Plasmodium falciparum punto mutaciones asociadas a resistencia a los medicamentos bloquean en los alrededores de Macha.

Escalada de mutaciones de resistencia de Plasmodium falciparum drogas bloquean en Macha, Zambia rural.

Plasmodium Falciparum Genotypisierung mit molekularer polymorpher Marker wird allgemein eingesetzt, um mitverursachten aus Reinfektion in Wirksamkeit von gegen Malaria Medikamenten &Uuml;berwachungsprogramme zu unterscheiden. Jedoch treten Einschr&auml;nkungen auf Agarose-Gel-DNA-Messungen zum Aufl&ouml;sen der Polymorphisms. Ohne empirische Daten ist die aktuelle Unterscheidung von vor- und Nachbehandlung Bands, wie dauerhafte oder neue Infektion, subjektiv und oft unterschiedliche vom Autor. Die Studie misst empirische Toleranzgrenzen f&uuml;r die Klassifizierung von unterschiedlich gro&szlig;en B&auml;nder als dieselben oder unterschiedliche Allele w&auml;hrend MSP2 Genotypisierung.

Unterscheidung von Plasmodium Falciparum mitverursachten und Reinfektion durch MSP2 Genotypisierung: Achtung &uuml;ber nicht standardisierte Klassifizierungskriterien.

Genotipizzazione di Plasmodium falciparum con marcatori molecolari polimorfici &egrave; ampiamente impiegata per distinguere la recrudescenza da reinfezione nell&#39;efficacia del farmaco antimalarico programmi di monitoraggio. Tuttavia, limitazioni si verificano sulle misurazioni di DNA gel di agarosio utilizzate per risolvere i polimorfismi. Senza dati empirici, l&#39;attuale distinzione tra bande di pre- e post-trattamento, come infezioni persistenti o nuove, &egrave; soggettiva e spesso variabili da autore. Questo studio misure limiti di tolleranza empirico per la classificazione delle bande di dimensioni diverse come uguali o diversi alleli durante MSP2 genotipizzazione.

Distinzione della recrudescenza di Plasmodium falciparum e re-infezione da MSP2 genotipizzazione: un&#39;attenzione sui criteri di classificazione.

&#x5E7F;&#x6CDB;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x57FA;&#x56E0;&#x5206;&#x578B;&#x4E0E;&#x5206;&#x5B50;&#x591A;&#x6001;&#x6027;&#x6807;&#x8BB0;&#x6765;&#x533A;&#x5206;&#x4ECE;&#x6297;&#x759F;&#x836F;&#x7269;&#x7597;&#x6548;&#x76D1;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6848;&#x518D;&#x6B21;&#x611F;&#x67D3;&#x590D;&#x53D1;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x9650;&#x5236;&#x7528;&#x4E8E;&#x89E3;&#x6790;&#x57FA;&#x56E0;&#x591A;&#x6001;&#x6027;&#x7684;&#x743C;&#x8102;&#x7CD6;&#x51DD;&#x80F6; DNA &#x6D4B;&#x91CF;&#x4E0A;&#x53D1;&#x751F;&#x3002;&#x5982;&#x679C;&#x6CA1;&#x6709;&#x5B9E;&#x8BC1;&#x6570;&#x636E;&#xFF0C;&#x524D;&#x540E;&#x5E26;&#x7684;&#x6301;&#x4E45;&#x6027;&#x6216;&#x65B0;&#x7684;&#x611F;&#x67D3;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x533A;&#x522B;&#x662F;&#x4E3B;&#x89C2;&#x548C;&#x7531;&#x4F5C;&#x8005;&#x5F80;&#x5F80;&#x4E0D;&#x540C;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x63AA;&#x65BD;&#x671F;&#x95F4; MSP2 &#x57FA;&#x56E0;&#x5206;&#x578B;&#x5206;&#x7C7B;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x6216;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x5927;&#x5C0F;&#x7684;&#x4E50;&#x961F;&#x5B9E;&#x8BC1;&#x516C;&#x5DEE;&#x9650;&#x503C;&#x3002;

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Plasmodium falciparum genotyping with molecular polymorphic markers is widely employed to distinguish recrudescence from re-infection in antimalarial drug efficacy monitoring programmes. However, limitations occur on agarose gel DNA measurements used to resolve the polymorphisms. Without empirical data, the current distinction of pre- and post-treatment bands, as persistent or new infection, is subjective and often varying by author. This study measures empirical tolerance limits for classifying different-sized bands as same or different alleles during MSP2 genotyping.

Distinction of Plasmodium falciparum recrudescence and re-infection by MSP2 genotyping: a caution about unstandardized classification criteria.

G&eacute;notypage de Plasmodium falciparum avec marqueurs polymorphes est largement employ&eacute; pour distinguer une recrudescence de r&eacute;infection dans l&#39;efficacit&eacute; des m&eacute;dicaments antipaludiques des programmes de surveillance. Toutefois, certaines limitations se produisent sur des mesures d&#39;ADN de gel d&#39;agarose permet de r&eacute;soudre les polymorphismes. Absence de donn&eacute;es empiriques, la distinction actuelle des bandes pr&eacute;- et post-traitement, comme une infection persistante ou nouvelle, est subjective et souvent variables par l&#39;auteur. Cette &eacute;tude mesure les limites de tol&eacute;rance empirique pour la classification des bandes de diff&eacute;rentes tailles comme des all&egrave;les identiques ou diff&eacute;rents pendant MSP2 g&eacute;notypage.

Distinction de la recrudescence de Plasmodium falciparum et de r&eacute;infection par g&eacute;notypage MSP2 : une mise en garde sur les crit&egrave;res de classification non normalis&eacute;s.

&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x306E;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x306E;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CE;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x5206;&#x5B50;&#x591A;&#x578B;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x306F;&#x3001;&#x5E83;&#x304F;&#x518D;&#x71C3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0; &#x30E2;&#x30CB;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x6297;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x85AC;&#x306E;&#x6709;&#x52B9;&#x6027;&#x306E;&#x518D;&#x611F;&#x67D3;&#x304B;&#x3089;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x5236;&#x9650;&#x304C;&#x591A;&#x578B;&#x3092;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528; agarose &#x306E;&#x30B2;&#x30EB; DNA &#x6E2C;&#x5B9A;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D4C;&#x9A13;&#x7684;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x304C;&#x306A;&#x3051;&#x308C;&#x3070;&#x3001;&#x524D;&#x51E6;&#x7406;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5F8C;&#x51E6;&#x7406;&#x306E;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x3001;&#x6C38;&#x7D9A;&#x7684;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x611F;&#x67D3;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x533A;&#x5225;&#x306F;&#x4E3B;&#x89B3;&#x3068;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x8457;&#x8005;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306E;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9; MSP2 &#x30B8;&#x30A7;&#x30CE;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x4E2D;&#x306B;&#x540C;&#x3058;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x5206;&#x985E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x7684;&#x306A;&#x8A31;&#x5BB9;&#x7BC4;&#x56F2;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x306E;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x306E;&#x518D;&#x71C3;&#x3068; MSP2 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x578B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x518D;&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x533A;&#x5225;: &#x8981;&#x54E1;&#x5206;&#x985E;&#x57FA;&#x6E96;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306E;&#x6CE8;&#x610F;&#x3002;

&#xBD84;&#xC790; &#xB2E4;&#xD615; &#xB9C8;&#xCEE4;&#xB85C; plasmodium falciparum &#xC720;&#xC804;&#xD615; recrudescence&#xC5D0;&#xC11C; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD558;&#xB294; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xC57D;&#xBB3C; &#xD6A8;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC744; &#xAD6C;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB110;&#xB9AC; &#xCC44;&#xD0DD; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xD55C;&#xACC4;&#xB294; polymorphisms &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; agarose &#xC824; DNA &#xCE21;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACBD;&#xD5D8;&#xC801; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC5C6;&#xC774; &#xC601;&#xAD6C; &#xB610;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC73C;&#xB85C; &#xC804;&#xCC98;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xD6C4; &#xCC98;&#xB9AC; &#xBC34;&#xB4DC;&#xC758; &#xD604;&#xC7AC; &#xAD6C;&#xBCC4;&#xC740; &#xC8FC;&#xAD00;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xC885;&#xC885; &#xC800;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; MSP2 &#xC720;&#xC804;&#xD615; &#xC911; &#xAC19;&#xAC70;&#xB098; &#xB2E4;&#xB978; &#xB300;&#xB9BD;&#xC73C;&#xB85C; &#xD06C;&#xAE30;&#xAC00; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC34;&#xB4DC;&#xB97C; &#xBD84;&#xB958; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xACBD;&#xD5D8;&#xC801; &#xACF5;&#xCC28; &#xD55C;&#xACC4;&#xB97C; &#xCE21;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Plasmodium falciparum recrudescence &#xBC0F; MSP2 &#xC720;&#xC804;&#xD615;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC7AC;&#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xCC28;&#xC774;: unstandardized &#xBD84;&#xB958; &#xAE30;&#xC900;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC8FC;&#xC758;.

Genotipado de Plasmodium falciparum con marcadores moleculares polim&oacute;rficos se emplea extensamente para distinguir el recrudecimiento de la reinfecci&oacute;n en la eficacia de los medicamentos antimal&aacute;ricos programas de seguimiento. Sin embargo, las limitaciones se producen en mediciones de ADN de gel de agarosa utilizadas para resolver los polimorfismos. Sin datos emp&iacute;ricos, la distinci&oacute;n actual de bandas previas y postratamiento, como infecci&oacute;n persistente o nueva, es subjetiva y a menudo diferentes por el autor. Este estudio mide l&iacute;mites de tolerancia emp&iacute;rica para la clasificaci&oacute;n de bandas de diferentes tama&ntilde;os como iguales o diferentes alelos durante MSP2 genotipificaci&oacute;n.

Distinci&oacute;n de recrudecimiento de Plasmodium falciparum y reinfecci&oacute;n por MSP2 genotipado: una advertencia sobre los criterios de clasificaci&oacute;n cerquero.

&#x4EBA;&#x4F53;&#x8840;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x7684;&#x836F;&#x7269;&#x6297;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x76D1;&#x6D4B;&#x662F;&#x759F;&#x75BE;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x91CD;&#x5927;&#x52AA;&#x529B;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x5BF9;&#x6BD4; antifolate &#x6297;&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x7684;&#x591A;&#x6001;&#x6027;&#xFF0C;&#x5F53;&#x4EBA;&#x4F53;&#x8840;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x7684;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x4E0E;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x75C5;&#x75C5;&#x5A92;&#x868A;&#x4ECE;&#x7761;&#x5728;&#x519C;&#x6751;&#x8D5E;&#x6BD4;&#x4E9A;&#x5C0F;&#x5C4B;&#x4F5C;&#x4E86;&#x6BD4;&#x8F83;&#x3002;DNA &#x7F16;&#x7801;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x4E8C;&#x6C22;&#x53F6;&#x9178;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176; (EC 1.5.1.3) &#x662F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x9650;&#x5236;&#x9176;&#x6D88;&#x89E3; pcr &#x6269;&#x589E;&#x3002;&#x660E;&#x663E;&#x6D41;&#x884C;&#x4E59;&#x80FA;&#x5627;&#x5576;&#x8010;&#x836F;&#x7A81;&#x53D8;&#x682A;&#x663E;&#x800C;&#x6613;&#x89C1;&#xFF1A; &#x4EBA;&#x7C7B;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x611F;&#x67D3; &mdash; &mdash; S108N (&gt; 90%)&#x3001; N51I&#x3001; C59R&#xFF0C;&#x4E0E; 108N + 51I + 59R &#x4E09;&#x500D;&#x7A81;&#x53D8; (30-80%)&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x963B;&#x529B;&#x6C34;&#x5E73;&#x53EF;&#x80FD;&#x4ECE;&#x9009;&#x62E9;&#x538B;&#x529B;&#x56E0;&#x5728;&#x8BE5;&#x533A;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x78FA;&#x80FA;/&#x4F7F;&#x7528;&#x51E0;&#x5341;&#x5E74;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;cycloguanil &#x8010;&#x836F;&#x7A81;&#x53D8;&#x682A;&#x4E2D;&#x53D1;&#x73B0;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x4ECE;&#x4EBA;&#x4F53;&#x8840;&#x6DB2;&#x6837;&#x672C;-S108T &#xFF08;13%&#xFF09;&#xFF0C;&#x5728;&#x975E;&#x5E38;&#x4F4E;&#x9891;&#x7387;&#x4E0E; A16V &#x548C; 108T + 16V &#x53CC;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; (&sim;4%)&#x3002;&#x5947;&#x602A;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x4E59;&#x80FA;&#x5627;&#x5576;&#x8010;&#x836F;&#x7A81;&#x53D8;&#x682A;&#x53D1;&#x75C5;&#x7387;&#x5F88;&#x4F4E; (2-12%) &#x4E2D;&#x7684;&#x6309;&#x868A; arabiensis &#x80A0;&#x868A;&#x5B50;&#xFF0C;&#x4F46; cycloguanil &#x8010;&#x836F;&#x7A81;&#x53D8;&#x682A;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x88AB;&#x666E;&#x904D; S108T (90%)&#xFF0C;&#x4E0E; A16V &#x548C; 108T + 16V &#x53CC;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; (49-57%&#xFF09;&#x3002;&#x7845;&#x5EFA;&#x6A21;&#x4E2D;&#x4E8C;&#x6C22;&#x53F6;&#x9178;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x5206;&#x6790;&#x63ED;&#x793A;&#x5185; NADPH &#x7ED1;&#x5B9A;&#x53E3;&#x888B;&#x91CC;&#xFF0C;&#x9884;&#x6D4B; S108N &#x9176;&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x7A33;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x4F46; S108T &#x9176;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x7A33;&#x5B9A;&#x9176;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x533A;&#x522B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x80FD;&#x627F;&#x53D7;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x4E3B;&#x673A;&#x7684;&#x8010;&#x836F;&#x57FA;&#x56E0;&#x591A;&#x6001;&#x6027;&#xFF0C;&#x6700;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x53CD;&#x6620;&#x51FA;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x538B;&#x529B;&#x5B58;&#x5728;&#x4E8E;&#x4EBA;&#x4F53;&#x548C;&#x868A;&#x5B50;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x5B83;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x6709;&#x7528;&#x4EBA;&#x6743;&#x548C;&#x868A;&#x5B50;&#x8FDB;&#x884C;&#x62BD;&#x6837;&#x77E2;&#x91CF;&#x611F;&#x67D3;&#x4E3A;&#x4E86;&#x51C6;&#x786E;&#x5730;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x8010;&#x836F;&#x57FA;&#x56E0;&#x6D41;&#x884C;&#x75C5;&#x5B66;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;

&#x759F;&#x75BE; antifolate &#x62B5;&#x6297;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x4E8C;&#x6C22;&#x53F6;&#x9178;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176; (DHFR) &#x591A;&#x6001;&#x6027;&#x4E0E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x548C;&#x868A;&#x5F62;&#x6210;&#x4E86;&#x9C9C;&#x660E;&#x5BF9;&#x6BD4;&#x3002;

Surveillance for drug-resistant parasites in human blood is a major effort in malaria control. Here we report contrasting antifolate resistance polymorphisms in Plasmodium falciparum when parasites in human blood were compared with parasites in Anopheles vector mosquitoes from sleeping huts in rural Zambia. DNA encoding P. falciparum dihydrofolate reductase (EC 1.5.1.3) was amplified by PCR with allele-specific restriction enzyme digestions. Markedly prevalent pyrimethamine-resistant mutants were evident in human P. falciparum infections--S108N (>90%), with N51I, C59R, and 108N+51I+59R triple mutants (30-80%). This resistance level may be from selection pressure due to decades of sulfadoxine/pyrimethamine use in the region. In contrast, cycloguanil-resistant mutants were detected in very low frequency in parasites from human blood samples-S108T (13%), with A16V and 108T+16V double mutants (âˆ¼4%). Surprisingly, pyrimethamine-resistant mutants were of very low prevalence (2-12%) in the midguts of Anopheles arabiensis vector mosquitoes, but cycloguanil-resistant mutants were highly prevalent-S108T (90%), with A16V and the 108T+16V double mutant (49-57%). Structural analysis of the dihydrofolate reductase by in silico modeling revealed a key difference in the enzyme within the NADPH binding pocket, predicting the S108N enzyme to have reduced stability but the S108T enzyme to have increased stability. We conclude that P. falciparum can bear highly host-specific drug-resistant polymorphisms, most likely reflecting different selective pressures found in humans and mosquitoes. Thus, it may be useful to sample both human and mosquito vector infections to accurately ascertain the epidemiological status of drug-resistant alleles.

Malaria antifolate resistance with contrasting Plasmodium falciparum dihydrofolate reductase (DHFR) polymorphisms in humans and Anopheles mosquitoes.

La surveillance de la pharmaco-r&#xE9;sistantes de parasites dans le sang humain est un effort majeur dans la lutte antipaludique. Nous rapportons ici contrastant polymorphismes r&#xE9;sistance antifolates dans Plasmodium falciparum o&#xF9; les parasites dans le sang humain ont &#xE9;t&#xE9; compar&#xE9;s par des parasites chez Anopheles moustiques vecteurs de dormir huttes en Zambie rurale. ADN codant pour la dihydrofolate r&#xE9;ductase de P. falciparum (CE 1.5.1.3) a &#xE9;t&#xE9; amplifi&#xE9; par PCR avec l&#x26;#39;all&#xE8;le-sp&#xE9;cifiques digestions d&#x26;#39;enzymes de restriction. Nettement pr&#xE9;valentes pyrim&#xE9;thamine mutants r&#xE9;sistants &#xE9;taient &#xE9;videntes dans l&#x26;#39;homme infections &#xE0; P. falciparum - S108N (&#x26;gt; 90%), avec N51I, C59R, et 108N +51 +59 I mutants Triple R (30-80%). Ce niveau de r&#xE9;sistance peut &#xEA;tre de la pression de s&#xE9;lection due &#xE0; des d&#xE9;cennies de la sulfadoxine / pyrim&#xE9;thamine utilisation dans la r&#xE9;gion. En revanche, le cycloguanil mutants r&#xE9;sistants ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;tect&#xE9;s dans de tr&#xE8;s basse fr&#xE9;quence chez les parasites du sang humain &#xE9;chantillons-S108T (13%), avec A16V et 108T +16 V doubles mutants (~ 4%). &#xC9;tonnamment, la pyrim&#xE9;thamine-mutants r&#xE9;sistants &#xE9;taient de la pr&#xE9;valence tr&#xE8;s faible (2-12%) dans les estomacs d&#x26;#39;Anopheles arabiensis vecteur les moustiques, mais cycloguanil mutants r&#xE9;sistants &#xE9;taient tr&#xE8;s r&#xE9;pandus-S108T (90%), avec A16V et le +16 V 108T double mutant (49-57%). Analyse structurelle de la dihydrofolate r&#xE9;ductase par la mod&#xE9;lisation in silico a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; une diff&#xE9;rence cl&#xE9; dans l&#x26;#39;enzyme NADPH dans la poche de liaison, la pr&#xE9;diction de l&#x26;#39;enzyme S108N avoir r&#xE9;duit la stabilit&#xE9;, mais l&#x26;#39;enzyme S108T avoir une stabilit&#xE9; accrue. Nous concluons que P. falciparum peut supporter tr&#xE8;s sp&#xE9;cifiques de l&#x26;#39;h&#xF4;te r&#xE9;sistant aux m&#xE9;dicaments polymorphismes, tr&#xE8;s probablement refl&#xE9;tant des pressions s&#xE9;lectives trouv&#xE9;es chez l&#x26;#39;homme et les moustiques. Ainsi, il peut &#xEA;tre utile pour d&#xE9;guster les infections vectorielles &#xE0; la fois l&#x26;#39;homme et le moustique de conna&#xEE;tre avec pr&#xE9;cision la situation &#xE9;pid&#xE9;miologique de pharmaco-r&#xE9;sistantes all&#xE8;les.

R&#xE9;sistance antifolate paludisme contrastant avec Plasmodium Falciparum dihydrofolate r&#xE9;ductase (DHFR) Polymorphismes chez les humains et les moustiques anoph&#xE8;les

&Uuml;berwachung der Medikamenten-resistenten Parasiten im menschlichen Blut ist eine gro&szlig;e Anstrengung in Malariabek&auml;mpfung. Hier berichten wir, kontrastierenden struktur&auml;hnliche Widerstand Polymorphismen in Plasmodium Falciparum Parasiten im menschlichen Blut mit Parasiten in der Anopheles-M&uuml;cke Vektor vom schlafen H&uuml;tten in l&auml;ndlichen Sambia verglichen wurden. DNA Kodierung p. Falciparum Dihydrofolate Reduktase (EG 1.5.1.3) wurde mit Allel-spezifische Beschr&auml;nkung Enzym Verdauung durch PCR verst&auml;rkt. Deutlich vorherrschende Pyrimethamin-resistente Mutanten zeigten sich in menschlichen p. Falciparum Infektionen--S108N (&gt; 90 %), mit N51I, C59R und 108N + 51I + 59R verdreifachen Mutanten (30-80 %). Dieser Widerstand kann von Selektionsdruck aufgrund jahrzehntelanger Sulfadoxine/Pyrimethamin-Einsatz in der Region wird. Im Gegensatz dazu wurden Cycloguanil-resistente Mutanten in sehr niedriger Frequenz in Parasiten aus menschlichem Blut Proben-S108T (13 %), mit A16V und 108T + 16V entdeckt doppelte Mutanten (&sim;4 %). &Uuml;berrascht Pyrimethamin-resistente Mutanten waren sehr niedrigen Pr&auml;valenz (2-12 %) in der Midguts von Anopheles Arabiensis Vektor M&uuml;cken, aber Cycloguanil-resistenten Mutanten sehr weit verbreitet-S108T (90 %) waren, mit A16V und 108T + 16V Doppel Mutant (49-57 %). Strukturanalyse von der Dihydrofolate Reduktase durch in Silico Modellierung ergab einen entscheidender Unterschied in das Enzym innerhalb der NADPH Bindung Tasche, Vorhersage, das S108N Enzym Stabilit&auml;t verringert haben, aber das S108T Enzym Stabilit&auml;t erh&ouml;ht zu haben. Wir schlie&szlig;en, dass p. Falciparum hoch Host-spezifischen Medikamenten-resistente Polymorphismen, ertragen kann h&ouml;chstwahrscheinlich reflektieren verschiedene selektive Dr&uuml;cke, die bei Menschen und M&uuml;cken gefunden. Also es kann sinnvoll sein, probieren Sie Mensch und Moskito Vektor Infektionen den epidemiologischen Status der Medikamenten-resistenten Allele genau festzustellen.

Malaria struktur&auml;hnliche Widerstand mit kontrastierenden Plasmodium Falciparum Dihydrofolate Reduktase (DHFR) Polymorphismen in der Mensch und die Anopheles-M&uuml;cke.

Sorveglianza per parassiti resistenti ai farmaci nel sangue umano &egrave; un grande sforzo nel controllo di malaria. Qui riportiamo polimorfismi antifolate resistenza a Plasmodium falciparum in contrasto quando parassiti nel sangue umano sono stati confrontati con parassiti nelle zanzare vettore Anopheles da dormire capanne in Zambia rurale. DNA codifica p. falciparum diidrofolato reduttasi (CE 1.5.1.3) &egrave; stato amplificato mediante PCR con enzima di restrizione di allele-specific digestioni. Nettamente prevalente mutanti resistenti pirimetamina erano evidenti nelle infezioni da p. falciparum umano - S108N (&amp;gt; 90%), con N51I, C59R e 108N + 51icomunica + 59R tripla mutanti (30-80%). Questo livello di resistenza pu&ograve; essere dalla pressione di selezione a causa di decenni di impiego sulfadossina/pirimetamina nella regione. Al contrario, mutanti resistenti alla cycloguanil sono stati rilevati in very low frequency in parassiti da campioni di sangue umano-S108T (13%), con A16V e 108T + 16V doppio mutanti (% &sim;4). Sorprendentemente, mutanti resistenti alla pirimetamina erano di prevalenza molto bassa (2-12%) nell&#39;intestino medio di Anopheles arabiensis zanzare vettore, ma mutanti resistenti alla cycloguanil erano altamente prevalente-S108T (90%), con A16V e il 108T + 16V doppio mutante (49-57%). Analisi strutturale della diidrofolato reduttasi da in silico modellazione ha rivelato una differenza fondamentale nell&#39;enzima all&#39;interno della tasca di legame NADPH, predire l&#39;enzima S108N di aver ridotto la stabilit&agrave;, ma l&#39;enzima S108T per avere maggiore stabilit&agrave;. Possiamo concludere che p. falciparum pu&ograve; sopportare altamente specifico per l&#39;host polimorfismi farmaco-resistenti, probabilmente riflettendo diverse pressioni selettive trovati in esseri umani e le zanzare. Cos&igrave;, pu&ograve; essere utile a campione sia umani e zanzare vettore di infezioni per accertare con precisione la situazione epidemiologica di alleli farmaco-resistenti.

Resistenza antifolate malaria con contrasto Plasmodium falciparum diidrofolato reduttasi (DHFR) polimorfismi in esseri umani e le zanzare Anopheles.

&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x8840;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x306E;&#x85AC;&#x5264;&#x8010;&#x6027;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306E;&#x30B5;&#x30FC;&#x30D9;&#x30A4;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x5236;&#x5FA1;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x4F5C;&#x696D;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x8840;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x306E;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306F;&#x3001;&#x5730;&#x65B9;&#x30B6;&#x30F3;&#x30D3;&#x30A2;&#x306E;&#x5C0F;&#x5C4B;&#x3092;&#x7720;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3089;&#x868A;&#x5A92;&#x4ECB;&#x868A;&#x306E;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3068;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x306E;&#x8449;&#x9178;&#x62B5;&#x6297;&#x591A;&#x578B;&#x3092;&#x5BFE;&#x6BD4;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;DNA&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x8449;&#x9178;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#xFF08;EC 1.5.1.3&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x5236;&#x9650;&#x9175;&#x7D20;&#x6D88;&#x5316;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;PCR&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5897;&#x5E45;&#x3057;&#x305F;&#x3002; N51I&#x3001;C59R&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;108N 51 I 59 R 3&#x91CD;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#xFF08;30&#x301C;80&#xFF05;&#xFF09;&#x3067;&#x3001;S108N&#xFF08;&#x26;gt; 90&#xFF05;&#xFF09; - &#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x666E;&#x53CA;&#x30D4;&#x30EA;&#x30E1;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x8010;&#x6027;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x3067;&#x9855;&#x8457;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x62B5;&#x6297;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x5730;&#x57DF;&#x306E;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;/&#x30D4;&#x30EA;&#x30E1;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x6570;&#x5341;&#x5E74;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9078;&#x629E;&#x5727;&#x304B;&#x3089;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;cycloguanil&#x8010;&#x6027;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;A16V&#x3068;108T +16 V&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#xFF08;&#x301C;4&#xFF05;&#xFF09;&#x3067;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x8840;&#x6DB2;&#x8A66;&#x6599;-S108T&#xFF08;13&#xFF05;&#xFF09;&#x304B;&#x3089;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3067;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x4F4E;&#x983B;&#x5EA6;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x30D4;&#x30EA;&#x30E1;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x8010;&#x6027;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x30CF;&#x30DE;&#x30C0;&#x30E9;&#x30AB;arabiensis&#x5A92;&#x4ECB;&#x868A;&#x306E;&#x4E2D;&#x8178;&#x3067;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x4F4E;&#x3044;&#x6709;&#x75C5;&#x7387;&#xFF08;2-12&#xFF05;&#xFF09;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x3001;cycloguanil&#x8010;&#x6027;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;A16V&#x3068;108T +16 V&#x4E8C;&#x91CD;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3067;&#x3001;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x666E;&#x53CA;&#x3057;&#x3066;-S108T&#xFF08;90&#xFF05;&#xFF09;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#xFF08;49&#x304B;&#x3089;57&#x30D1;&#x30FC;&#x30BB;&#x30F3;&#x30C8;&#xFF09;&#x3002; silico&#x3067;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x8449;&#x9178;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;S108T&#x9175;&#x7D20;&#x304C;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;S108N&#x9175;&#x7D20;&#x3092;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3057;&#x3001;NADPH&#x7D50;&#x5408;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x5185;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x9055;&#x3044;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x85AC;&#x5264;&#x8010;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x591A;&#x578B;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x3068;&#x868A;&#x3067;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x6700;&#x3082;&#x9AD8;&#x3044;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x3057;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x9078;&#x629E;&#x5727;&#x306B;&#x8010;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x4ED8;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B;&#x85AC;&#x5264;&#x8010;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x75AB;&#x5B66;&#x7684;&#x72B6;&#x6CC1;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x3068;&#x868A;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x3092;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x4FBF;&#x5229;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306A;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x8449;&#x9178;&#x30EC;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;DHFR&#xFF09;&#x30D2;&#x30C8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x591A;&#x578B;&#x3068;&#x30CF;&#x30DE;&#x30C0;&#x30E9;&#x30AB;&#x868A;&#x3068;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x8449;&#x9178;&#x62B5;&#x6297;

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD608;&#xC561;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC57D;&#xBB3C; &#xB0B4;&#xC131; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC10;&#xC2DC; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB178;&#xB825; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD608;&#xC561;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xC790;&#xB294; &#xC7A0;&#xBE44;&#xC544;&#xC758; &#xC2DC;&#xACE8; &#xC624;&#xB450;&#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C; Anopheles &#xBCA1;&#xD130; &#xBAA8;&#xAE30;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xD588;&#xB2E4; Plasmodium falciparum&#xC5D0; antifolate &#xC800;&#xD56D; polymorphisms &#xB300;&#xC870; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. DNA&#xC758; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; P. falciparum dihydrofolate reductase (EC 1.5.1.3) &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD2B9;&#xC815; &#xAE08;&#xC9C0; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC18C;&#xD654;&#xC640; PCR&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC99D;&#xD3ED; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xC720;&#xD589; pyrimethamine &#xB0B4;&#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC778;&#xAC04; P. falciparum &#xAC10;&#xC5FC;-s108n&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4; (&amp;gt; 90%), N51I, C59R, &#xBC0F; 108N + 51I + 59R &#xD2B8;&#xB9AC;&#xD50C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (30-80%). &#xC774; &#xC800;&#xD56D; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC120;&#xD0DD; &#xC555;&#xB825; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC218;&#xC2ED; &#xB144;&#xAC04;&#xC774; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; sulfadoxine/pyrimethamine &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, cycloguanil &#xB0B4;&#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; a16v&#xC640; 108T + 16V &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD608;&#xC561; &#xC0D8;&#xD50C;-S108T (13%)&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB0AE;&#xC740; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (&sim;4%)&#xB97C; &#xB450; &#xBC88;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, pyrimethamine &#xB0B4;&#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB0AE;&#xC740; &#xBCF4;&#xAE09; (2-12%)&#xC758; Anopheles arabiensis&#xC758; midguts&#xC5D0;&#xC11C; cycloguanil &#xB0B4;&#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBCA1;&#xD130; &#xBAA8;&#xAE30; &#xD588;&#xB2E4; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB110;&#xB9AC; S108T (90%), a16v&#xC640; 108T + 16V &#xB354;&#xBE14; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (49-57%). Silico &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; dihydrofolate reductase&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xBD84;&#xC11D; S108N &#xD6A8;&#xC18C; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; S108T &#xD6A8;&#xC18C; &#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xC99D;&#xAC00;&#xB97C; &#xC608;&#xCE21; &#xD558;&#xB294; NADPH &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xD0A4; &#xCC28;&#xC774; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xB2E4;&#xB978; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC555;&#xB825; &#xC778;&#xAC04;&#xACFC; &#xBAA8;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC744; &#xBC18;&#xC601; &#xADF8; P. falciparum &#xB192;&#xC740; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD2B9;&#xC815; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC800;&#xD56D;&#xB825;&#xC774; polymorphisms &#xACAC;&#xB51C; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xACB0;&#xB860; &#xC9C0;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04;&#xACFC; &#xBAA8;&#xAE30; &#xC0D8;&#xD50C;&#xB9C1;&#xC774; &#xC720;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218;&#xB3C4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xBCA1;&#xD130; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC57D;&#xBB3C; &#xB0B4;&#xC131; &#xB300;&#xB9BD; &#xC5ED;&#xD559; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB97C; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xD655;&#xC778; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Plasmodium falciparum dihydrofolate reductase (DHFR) polymorphisms &#xC778;&#xAC04;&#xACFC; Anopheles &#xBAA8;&#xAE30;&#xC5D0; &#xB300;&#xC870;&#xC640; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; antifolate &#xC800;&#xD56D;.

La vigilancia de la droga-resistentes a los par&#xE1;sitos en la sangre humana es un esfuerzo importante en el control de la malaria. Aqu&#xED; mostramos que contrasta polimorfismos antifolatos de resistencia en los par&#xE1;sitos Plasmodium falciparum, cuando en la sangre humana se compararon con los par&#xE1;sitos en los mosquitos Anopheles vectores de dormir en caba&#xF1;as de zonas rurales de Zambia. ADN que codifica el P. falciparum dihidrofolato reductasa (CE 1.5.1.3) se amplific&#xF3; por PCR con alelo-espec&#xED;ficas digestiones de enzimas de restricci&#xF3;n. Marcadamente predominantes pirimetamina mutantes resistentes fueron evidentes en humanos infecciones por P. falciparum - S108N (&#x26;gt; 90%), con N51I, C59R, y 108N +51 +59 I mutantes R triples (30-80%). Este nivel de resistencia puede ser de la presi&#xF3;n de selecci&#xF3;n debido a d&#xE9;cadas de sulfadoxina / pirimetamina uso en la regi&#xF3;n. En contraste, cicloguanil mutantes resistentes se detectaron en frecuencia muy baja en los par&#xE1;sitos de la sangre humana muestras-S108T (13%), con A16V y 108T +16 V mutantes dobles (~ 4%). Sorprendentemente, los mutantes resistentes a la pirimetamina eran de muy baja prevalencia (2-12%) en el intestino medio de los mosquitos Anopheles arabiensis vector, pero cicloguanil mutantes resistentes tuvieron una alta prevalencia-S108T (90%), con A16V y el 108T +16 V doble mutante (49-57%). El an&#xE1;lisis estructural de la dihidrofolato reductasa por el modelado in silico revel&#xF3; una diferencia fundamental en la enzima en el bolsillo de uni&#xF3;n de NADPH, la predicci&#xF3;n de la enzima S108N haber reducido la estabilidad, pero la enzima S108T que ha aumentado la estabilidad. Llegamos a la conclusi&#xF3;n que el P. falciparum puede soportar gran acogida espec&#xED;ficos resistentes a los medicamentos polimorfismos, m&#xE1;s probable es que reflejen las distintas presiones selectivas que se encuentran en los seres humanos y los mosquitos. Por lo tanto, puede ser &#xFA;til para muestrear las infecciones vector tanto humanos como mosquitos para determinar con precisi&#xF3;n la situaci&#xF3;n epidemiol&#xF3;gica de los alelos resistentes a los f&#xE1;rmacos.

Malaria Resistencia Antifolato que contrastan con Plasmodium falciparum dihidrofolato reductasa (DHFR) Los polimorfismos en los seres humanos y los mosquitos Anopheles

Mtawa Mkulama

Malaria Institute at Macha

A Simple Chelex Protocol for DNA Extraction from Anopheles spp.